技术特征：
1.一种柱花草的遗传转化方法，其特征在于，包含以下步骤：s1.取柱花草幼苗，斜切幼苗下胚轴，取地上部待用；s2.在地上部的下胚轴斜切面处涂布携带有目的基因的重组发根农杆菌，随后将柱花草地上部移植于土壤基质中，同时在土壤移植处加入携带有目的基因的重组发根农杆菌菌液，完成侵染；s3.将完成侵染的柱花草幼苗培养至第二对三出复叶完全展开，并长出新的根系，新长出的地下部部分即为转化后的柱花草。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s1中所述柱花草幼苗为生长3～12d的幼苗。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s1中斜切下胚轴时，在距柱花草子叶节下0.7～1.5cm处斜切断下胚轴。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s2中所用发根农杆菌菌株为k599、arqual、msu440或c58c1。5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s2中所用发根农杆菌菌液的od600值为0.8～1.0，加入的菌液的体积为0.3～0.6ml。6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s3中所述柱花草幼苗在用保鲜膜包裹后，再放入光照培养箱中培养，培养温度为24～26℃，光照强度为80μmol m-2
s-1
，16h光照/8h黑暗。7.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述幼苗为生长6～9d的幼苗。8.根据权利要求3所述方法，其特征在于，在距柱花草子叶节下0.7cm处斜切断下胚轴。9.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所用发根农杆菌菌株为k599、arqual或c58c1。10.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述发根农杆菌菌液的od600值为1.0，加入的菌液的体积为0.5ml。
技术总结
本发明公开了一种柱花草的遗传转化方法。本发明所述遗传转化方法为斜切柱花草幼苗的下胚轴，在地上部的下胚轴斜切面处涂布携带有目的基因的重组发根农杆菌，将幼苗移植于土壤基质中并加入携带有目的基因的重组发根农杆菌菌液完成侵染，将幼苗培养至第二对三出复叶完全展开，并长出新的根系，新长出的地下部部分即为转基因柱花草。本发明所述柱花草遗传转化方法操作简便，成本低，不需在无菌环境中进行，也不需要利用培养基进行诱导培养，遗传转化效率在85％以上，且耗时短，20天即可获得转化后的柱花草，克服了现有柱花草遗传转化方法耗时长，遗传转化效率低的问题。遗传转化效率低的问题。遗传转化效率低的问题。
技术研发人员：陈志坚 王林杰 董荣书 李欣勇 刘攀道 刘国道
受保护的技术使用者：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
技术研发日：2022.03.17
技术公布日：2022/6/24