一种检测表皮葡萄球菌的试剂盒及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因检测技术领域，具体地说涉及用于检测表皮葡萄球菌的试剂盒及 其应用。
【背景技术】
[0002] 表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidemidis)是滋生于生物体表皮上的一种常见 细菌。在人体的皮肤、阴道等部位寄生，属于正常菌群类型。葡萄球菌为革兰氏阳性菌，属 细球菌科，葡萄球菌属。在其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，或是某些耐药菌株可被染成革 兰氏阴性。表皮葡萄球菌在自然界中广泛分布，多数为非致病菌，仅少数可导致人和动物的 化脓性感染。葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，是引起医院内交叉感染的重要来源。表皮 葡萄球菌主要引起痈、疖、肺炎、毛囊炎、化脓性骨髓炎、脑脓肿、肝脓肿及伤口感染等。其致 病性随细菌传播方式、菌液浓度、毒性以及自身免疫力差异而不同。近年来，由于抗生素的 滥用，导致耐药菌株逐年递增，已有研宄报道，表皮葡萄球菌对青霉素的耐药率高达90%。 在不明病原菌的情况下滥用药物，针对性不强，效果差，破坏患者自身免疫力，还会增强菌 株的耐药性。因此，临床上迫切需要一种快速、准确的体外检测手段辨识菌种类型，进行有 针对性的个体化治疗。
[0003] 传统的细菌检验方法主要通过涂片镜检和分离培养的方法对细菌生理化特征进 行分类。涂片镜检的方法需要有丰富经验的技术工作者根据细菌形态、排列方式和染色性 作出初步诊断，分离培养需要较长的时间才能进行结果判读，不利于及时诊断病原。患者有 病情恶化蔓延的风险。PCR(聚合酶链式反应）技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的 分子生物学技术，它是生物体外的特殊DNA复制，将微量的DNA大幅度增加。PCR检测方法 具有操作简便、快捷、稳定、灵敏度高、特异性强等特点，已逐步成为细菌的主流快速体外检 测方法。传统的表皮葡萄球菌PCR检测方法具有耗时长、检出率低、准确性低和重复性差的 缺点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种检测表皮葡萄球菌的试剂盒及其应用。
[0005] 本发明首先提供用于检测表皮葡萄球菌的引物对，其核苷酸序列如SEQID NO. 1-2 所示。
[0006] 本发明提供了上述引物对在检测表皮葡萄球菌中的应用。
[0007] 本发明提供了上述引物对在制备表皮葡萄球菌检测试剂盒中的应用。
[0008] 本发明还提供了上述引物对在制备表皮葡萄球菌诊断试剂中的应用。
[0009] 含有本发明引物对的试剂盒也属于本发明的保护范围。本发明的试剂盒可以是由 多个隔断所形成，以容纳固定一个或多个如管或小瓶的容器。这些容器之一或者多个可以 装有本发明的引物，根据需要该引物可以是冻干形式或溶于缓冲液中的状态。另外，本发明 的试剂盒中还可以包括用于PCR反应的一种或多种酶/试剂，以及实施本发明所需要的其 它成分及用具。
[0010] 进一步地，本发明的试剂盒其25yL工作体系为：
[0011]
【主权项】
1. 检测表皮葡萄球菌的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1-2 所示。
2. 权利要求1所述的引物对在检测表皮葡萄球菌中的应用。
3. 权利要求1所述的引物对在制备表皮葡萄球菌检测试剂盒中的应用。
4. 权利要求1所述的引物对在制备表皮葡萄球菌诊断试剂中的应用。
5. -种试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物对。
6. 如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，其25 μ L PCR反应体系为：
7. 如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序为：预变性95°C、5min ;再经 95°〇变性3〇8,55°0退火3〇8,72°0延伸3〇8,40个循环；最后72°0延伸71^11。
8. 如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序还包括将PCR产物用2% -3% 琼脂糖凝胶进行电泳。
9. 一种检测表皮葡萄球菌的方法，其特征在于，该方法以样品总DNA为模板，利用权利 要求1所述的引物对进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后根据电泳条带判定 结果。
【专利摘要】本发明提供了一种检测表皮葡萄球菌的试剂盒及其应用，属于基因检测技术领域。本发明的试剂盒采用SEQ ID NO.1-2所述的引物对待测样品进行PCR扩增，将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，若在190bp处有单一条带，则结果为阳性，否则为阴性。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为表皮葡萄球菌的检测提供了新的方法。
【IPC分类】C12Q1-68, C12N15-11, C12R1-45, C12Q1-14
【公开号】CN104531849
【申请号】CN201410758345
【发明人】何犇, 易翔, 及思莹, 黄茜, 杨君
【申请人】中生北控生物科技股份有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月10日