利用生物转化技术从丹参地上茎叶中高效制备丹参酚酸类成分的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药技术领域，涉及一种丹参地上茎叶资源化利用方法，具体涉及一 种从一定生长期的丹参地上茎叶经光合细菌转化后提取制备丹参酚酸类成分的方法及其 制备得到丹参酚酸类成分和用途。
【背景技术】
[0002] 丹参（Salvia miltiorrhizaBge.)为唇形科鼠尾草属植物。始载于《神农本草经》， 列为上品。其根及根茎入药称为丹参，其味苦，性微寒，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、 凉血消痈的功效。现代临床多用于治疗心脑血管疾病、心绞痛等。
[0003] 我国药用丹参资源丰富，包括野生丹参和栽培丹参，每年年产量达5000?7000t。 但除根及根茎药用外，其地上茎叶、花等资源，并未得到产业化开发利用。目前虽有开展相 关研宄和开发的报道，但并未真正有效利用地上部分资源，因此丹参资源的综合高效利用 逐渐引起广大科研工作者的关注和重视，
[0004] 现代研宄表明丹参中丹参酚酸类成分为其主要的活性成分，具有强心、抗血栓形 成、改善微循环、促进组织的修复与再生、抑制过度增生、保肝、抗菌、降血脂等多种生物活 性，广泛应用于心脑血管疾病的治疗。
[0005] 光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PSB)是一类以光作为能源进行光合 作用而不产氧的特殊生理类群的总称，其种类繁多，生长繁殖快速，酶系丰富。沼泽红假单 胞菌（Rhodopseudomonas palustris, Rps. Palustris)属于紫色非硫杆菌，它是一种适应能 力很强的光合细菌，被应用于农业、渔业、环保、医药等领域。该属细菌一般为光能异养型， 能利用有机酸、氨基酸及糖类作为光合作用的氢供体或合成细胞的碳源。PBS的生物转化反 应条件温，处理法的流程工艺简单，处理成本低，能稳定运行，且不产生二次污染，因而有望 成为生物法处理植物次生代谢产物的首选菌种之一。
【发明内容】
[0006] 发明目的：本发明所要解决的技术问题，是基于资源价值最大化原理，提供一种从 一定生长期的丹参地上茎叶中制备丹参酚酸类成分的方法，其工艺新颖，流程简单，并可实 现丹参地上茎叶的资源化利用，具有重要的应用价值和生态效益。
[0007] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0008] -种丹参酚酸类成分，它由下列方法制备得到：
[0009] (1)取丹参地上茎叶作为原料，采用水或醇溶液提取，得到水或醇提取液；
[0010] (2)取步骤⑴的提取液在无菌条件下，接种提取液1/10?1/20体积的光合细菌 菌液，在400-3200LUX光照厌氧条件下培养3?20天，制成光合细菌转化丹参培养液，将光 合细菌转化丹参培养液在l〇〇〇-l〇〇〇〇r/min离心；
[0011] (3)取步骤（2)离心上清液，上大孔吸附树脂柱进行吸附，先用水洗，然后采用不 同浓度乙醇进行洗脱分离；
[0012] (4)收集步骤⑶体积浓度为20?70 %乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，得到总 丹参酚酸类成分。
[0013] 作为优选方案，以上所述的丹参酚酸类成分，所述的光合细菌优选如下：红 螺菌属Rhodospirillium为深红红螺菌（Rhodospirillium rubrum);红假单胞菌属 Rhodopseudomonas为沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonaspalustris)、绿色红假单胞菌 (Rhodopseudomonas viridis)、绿硫红假单胞菌(Rhodopseudomonas sulfoviridis)、 海洋红假单胞菌（Rhodopseudomonas marina);红细菌属Rodobacter为球形红细菌 (Rhodobacter sphaeroides)、荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus) 〇
[0014] 本发明提供到从丹参地上茎叶中提取制备丹参酚酸类成分的方法，其包括如下步 骤：
[0015] (1)取丹参地上茎叶作为原料，采用水或醇溶液提取，得到水或醇提取液；
[0016] (2)取步骤⑴的提取液在无菌条件下，接种提取液1/10?1/20体积的光合细菌 菌液，在400-3200LUX光照厌氧条件下培养3?20天，制成光合细菌转化丹参培养液，将光 合细菌转化丹参培养液在l〇〇〇-l〇〇〇〇r/min离心；
[0017] (3)取步骤（2)的上清液，上大孔吸附树脂柱进行吸附，先用水洗，然后采用不同 浓度乙醇进行洗脱分离；
[0018] (4)收集体积浓度为20?70%乙醇洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥，得到总丹参酚酸 类成分。
[0019] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分 的方法，所述的光合细菌优选如下：红螺菌属Rhodospirillium为深红红螺菌 (Rhodospirillium rubrum);红假单胞菌属Rhodopseudomonas为沼泽红假单胞菌 (Rhodopseudomonaspalustris)、绿色红假单胞菌(Rhodopseudomonas viridis)、绿硫 红假单胞菌（Rhodopseudomonas sulfoviridis)、海洋红假单胞菌（Rhodopseudomonas marina);红细菌属Rodobacter为球形红细菌（Rhodobacter sphaeroides)、荚膜红细菌 (Rhodobacter capsulatus)〇
[0020] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶中提取制备丹参酚酸类成分的方法， 所采用的丹参地上茎叶为6月下旬?7月下旬生长期内的地上茎叶部分。
[0021] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶中提取制备丹参酚酸类成分的方法， 步骤（2)所述的光合细菌菌液制备方法为：在经过灭菌的光合细菌培养基中接入1/10份数 光合细菌菌种，在光照、厌氧条件下，培养3-5天，作为光合细菌培养液。
[0022] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分的方法， 取丹参地上茎叶烘干后，打粉，过40目筛，取50?150g丹参茎叶的干燥粉末，分别置于 1500ml的锥形瓶中，精密加入500?IOOOml的纯水，精密称定，浸泡10?16h后在30? 50°C、100?200KHz下超声30?60min，称量补足失重，过滤，重复提取三次，合并滤液，得 提取液，将溶液浓缩至干燥粉末。
[0023] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分的方法，取 一定的干燥粉末，用水溶解至一定的体积，过〇. 22 μ m膜，定容至一定的含量，加入不同体 积的水，无菌条件下，接种1/20体积的球形红细菌或荚膜红细菌菌液后培养3?5d，得球形 红细菌或荚膜红细菌转化丹参培养液。
[0024] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分的方法，所 述的大孔吸附树脂型号为DlOl或AB-8。
[0025] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分的方法，步 骤（3)所述乙醇洗脱的体积浓度为10?95%。
[0026] 作为优选方案，以上所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分的方法，步 骤（4)中收集体积浓度为20 %?70 %到乙醇洗脱液。
[0027] 本发明所述的从丹参地上茎叶提取制备丹参酚酸类成分的方法，步骤（1)所使用 的丹参地上茎叶原料为一定生长期的丹参地上部分，也可以是采挖丹参前割取的废弃丹参 地上植株。
[0028] 本发明制备得到的丹参酚酸类成分，高效液相质量分析结果表明，总丹参酚酸纯 度为80%以上，可用于制备治疗心脑血管疾病药物或功能保健产品。
[0029] 本发明提供的从丹参地上茎叶中制备丹参酮类成分的方法，通过大量实验筛选， 采用优选的光合细菌生物处理丹参地上茎叶，可以使所含丹参酚酸类有效成分大幅提高， 再进行提取，提取液经大孔吸附树脂柱，分离纯化，乙醇洗脱，可以高效获得丹参酚酸类成 分，取得了非常好的技术效果。
[0030] 上述的从丹参地上茎叶中制备丹参酚酸类成分的方法中，所述大孔吸附树脂洗脱 溶剂为10%?95%乙醇溶液，收集20%?70%乙醇洗脱液。本发明根据有机溶剂萃取物 的成分性质，采用大量实验筛选得到丹参酚酸类成分的最佳洗脱溶液，先采用浓度水洗脱 除杂质，然后再收集20%?70%乙醇洗脱液，可以得到高纯度的丹参酚酸类成分。
[0031] 上述的从丹参地上茎叶中制备丹参酚酸类成分的方法中，所述喷雾干燥条件为： 进风温度为40?80 °C，出风温度为80?90 °C，物料温度为30?50 °C，雾化压力为0. 05? 0. 2兆帕，喷雾速