食品和餐饮具中大肠菌群快速检测纸片的制备与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种食品和餐饮具中大肠菌群快速检测纸片，是一种专门用于食品和餐饮具中快速检测大肠菌群的定性和定量检测试纸。
【背景技术】
[0002]大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方。人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。大肠菌群是人畜粪便中的主要细菌，因而被用来作为反映食品中是否被粪便污染或污染程度的指示菌。大肠菌群数的高低，表明了食品被粪便污染的程度，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。大肠菌群作为评价食品卫生质量的主要指标之一，我国已将其纳入“国家标准”。检测大肠菌群传统的方法是试管发酵法，需要配制新鲜培养基，操作方法繁琐，成本较高，检测时间长，达不到快速一步法，大肠菌群的检测结果无法定量分析。因此，业内一直希望能有一种经济、简便、易行、快速、准确的方法和产品。
[0003]纸片法是上世纪80年代发展起来的一种快速检测食品及食品接触的物体表面、餐具、茶具中大肠菌群污染情况的方法。目前，国内外对大肠菌群快速检测纸片法研究较多，如中国发明专利食品中大肠菌群快速检测纸片(200710013010.9)、湿式大肠菌群快检纸片(200420059068.9)、液体食品中大肠菌群快检纸片(200610069663.4)，上述专利可以用于大肠菌群的检测，但这些专利检测纸片没有冷水凝胶成分，因此菌落形成不清晰，菌落计数较难。中国发明专利一种快速检测微生物的测试片及其制备方法和应用(200910007917.3)，该专利中添加了冷水凝胶成分，但该专利只能用于食品中大肠菌群的检测，不能用于餐饮具大肠菌群的检测。本专利弥补了上述发明专利的不足，是一种能克服已有方法和产品不足，提供一种专用于食品和餐饮具快速检测大肠菌群并可定性、定量分析的冷水凝胶试纸片。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种能克服已有方法和产品不足，提供一种专用于食品和餐饮具快速检测大肠菌群并可定性、定量分析的冷水凝胶试纸片。该纸片不仅适合于多种食品中大肠菌群的检测，也可用于餐饮具中大肠菌群的快速检测。纸片操作简便易行、快速准确(一步法)，特异性强，敏感性高，成本低廉，便于基层单位特别是边沿地区及条件差的基层试验室使用。
[0005]为实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究和不懈探索，最终获得了如下技术方案:
一种大肠菌群快速检测冷水凝胶纸片，该纸片中含有混合培养基，其特征在于:混合培养基由基础培养基和冷水凝胶混合配置。
[0006]如上所述的一种大肠菌群快速检测冷水凝胶纸片，其特征在于:基础培养基中的抑菌剂为脱氧胆酸钠，指示剂为溴甲酚紫、红四氮唑；基础培养基由乳糖胰蛋白胨、牛肉膏、氯化纳、磷酸氢二钾、乳糖配置；冷水凝胶由聚丙烯酸钠、黄原胶、卡拉胶和魔芋胶配置。
[0007]如上所述的一种大肠菌群快速检测冷水凝胶纸片，其特征在于:该纸片的制备具有如下步骤:
(1)载体纸片制备:将层析滤纸剪切成5cmX5cm规格，经辐照或高压灭菌，高压灭菌后于50°C恒温真空干燥后备用；
(2)内包装袋:将耐高温的聚丙烯塑料薄膜袋，按试验要求压合成5.2cmX5.2cm规格的联袋；
(3)基础培养基配置:每升培养基中含有胰蛋白胨10.0-15.0g、牛肉膏3.0-5.0 g、氯化纳5.0-6.0 g、磷酸氢二钾4.0-5.0 g、乳糖15.0-20.0 g ;溴甲酚紫含量为60.0-70.0mg;脱氧胆酸的含量为1.0-1.5 g ；20.0 g/L红四氮唑(TTC)溶液5_7mL，培养基的pH6.3~6.5 ；
(4)冷水凝胶配置:0.2-0.4%聚丙烯酸钠、0.1-0.3%黄原胶、0.1-0.2%卡拉胶和0.1-0.2%魔芋胶；
(5)混合培养基配置:将基础培养基和冷水凝胶混合均匀，加去离子水定容至1000mL,于115°C高压灭菌15 min,调节pH至6.3-6.5 ；
(6)试纸片制作:将灭菌载体纸片依次放入灭菌的烧杯中，加入500C_55°C的混合培养基使之淹没纸片，浸泡5-10 min，使培养基充分吸附于纸片，摆放于无菌不锈钢丝网上，50°C恒温真空干燥；
(7)试纸片包装:将浸溃烘干的纸片，无菌操作装入无菌的塑膜袋内，其中5cmX5 cm的纸片，每袋I张，再装入铝铀袋，封口后室温以下保存备用。
[0008]如上所述的一种大肠菌群快速检测冷水凝胶纸片，其特征在于:该纸片可同时适用于食品和餐饮具中大肠菌群的定量、定性检测。
[0009]与现有技术相比，本发明具有以下优点:
1、本发明适用于食品和餐饮具中大肠菌群定量和定性检测分析，本发明利用冷水凝胶以层析滤纸为载体，将培养基成分和冷水凝胶混合，均匀的负载到层析滤纸上，样品可均匀分布于冷水凝胶，在其表面形成鲜明的菌落特征，使大肠菌群的检测达到快速准确定量。可以用于大肠菌群菌落的计数，用于定量分析。
[0010]2、本发明适用于食品和餐饮具中大肠菌群快速检测，目前现有技术只有适用于食品或餐饮具的大肠菌群快速检测试纸，没有同时适合食品和餐饮具的大肠菌群快速检测试纸。
[0011]3、大肠菌群快检纸片含有抑菌剂，在检测中可减少微生物因素的干扰影响，产品的敏感性高、特异性强、结果准确。
[0012]4、本发明成本低廉，操作方法简便，检测时间只需16-24 h，比常规发酵法缩短了4天，使繁琐的发酵培养和证实试验技术简化到一步法即可完成，一般人员都能掌握操作。
【附图说明】
[0013]附图1为冷水凝胶纸片的成品。
[0014]附图2为冷水凝胶纸片检测呈阴性时的效果图。
[0015]附图3为冷水凝胶纸片检测呈阳性时的效果图。
[0016]附图4为本发明冷水凝胶纸片检测大肠菌群的效果图。
[0017]附图5为其他厂家试纸片检测大肠菌群的效果图。
【具体实施方式】
[0018]以下实施例用于说明本发明，但不用于限制本发明的范围，如未特别说明，本发明所用方法为常规技术，所用试剂均购自生化商店。
[0019]实施例1:快速检测试纸片的制备方法
(I)载体纸片制备:将层析滤纸切成5cmX5cm规格，经辐照或高压灭菌(高压后于50°C恒温真空干燥)后备用。
[0020](2)内包装袋制备:将耐高温的聚丙烯塑料薄膜袋，按试验要求压合成
5.1cmX 5.1cm规格的联袋。
[0021](3)基础培养基配置(IL):胰蛋白胨10.0-15.0g;牛肉膏3.0-5.0g;氯化纳
5.0-6.0g 磷酸氢二钾(K2HPO4.2H20)4.0-5.0 g ;乳糖 15.0-20.0 g;溴甲酚紫含量为60.0-70.0 mg ;脱氧胆酸的含量为1.0-1.5 g ；20.0g/L红四氮唑(TTC)溶液5_7 mL。
[0022](4)冷水凝胶配置(质量百分比):0.2-0.4%聚丙烯酸钠、0.1-0.3%黄原胶、
0.1-0.2%卡拉胶和0.1-0.2%魔芋胶。
[0023](5)混合培养基配置:将基础培养基和冷水凝胶混合均匀，加去离子水定容至1000ml，于115°〇高压(1父10午&)灭菌15min，调节pH至6.3-6.5。
[0024](6)试纸片制作:将灭菌载体纸片依次放入灭菌的烧杯中，加入50_55°C的混合培养基使之淹没纸片，浸泡5-10 min，使培养基充分吸附于纸片，摆放于无菌不锈钢丝网上，50°C恒温真空干燥。
[0025](7)试纸片包装:将浸溃烘干的纸片，无菌操作装入无菌的塑膜袋内，其中5cmX 5cm的纸片，每袋I张，再装入铝铀袋，封口后室温以下保存备用，如图1。
[0026]实施例2:快速检测试纸片的特异性试验
将枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌摇瓶过夜培养，将ImL菌悬液8000 r/min离心5min,将菌体重悬于ImL无菌水中，按照十倍稀释，稀释到一定倍数(13-1O4)后，将ImL菌悬液滴加至检测纸片上，36°C ±1°C培养16_24h，观察纸片上菌落的生长情况，研究试纸片的特异性。设置5个平行组，试验重复3次。
[0027]试验结果表明，只有当大肠杆菌存在时，试纸片才会变黄并在黄色背景上呈现红色斑点菌落或片状红晕；而枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌存在时，试纸片保持紫蓝色不变，或有红色斑点但斑点周围无黄晕。
[0028]实施例3:快速检测试纸片的干扰性试验
同时将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌摇瓶过夜培养，将0.5mL菌悬液