AATCATCAGTGCTCTGTGA
TACGTTCTCTACGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCAAAATGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGG
CGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACCGTGAGGGAAAGATGAAAAGCACTTTGGAAAGAGAGTTAAACAGTACGTGAA
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GGGTCAACATCAGTTTTGTCCGGTGGATAAAGGATTTAGGAATGTGACTCCCTCGGGAGTGTTATAGCCTAGGTTCA
CATACACTGGGTGAGACTGAGGACTGCAGCTCGCCTTTTGGCCGGGGTTCGCCCACGTTCGAGCTTAGGATGTTGAC
ATAATGGCTTTAAACGACo
[0022]实施例3:丝孢酵母菌WIN的生长曲线
利用实施例1中的菌液，采用115°C ,20 min高压灭菌的含四环素和土霉素的固体改良马丁培养基(葡萄糖 10 g/L，(NH4)2SO4 I g/L,MgSO4 0.5 g/L, K2HPO4 I 8/1，四环素0.058/1;土霉素0.05 g/L, pH 7), 30 0C, 150 rpm下培养，接种量为10%。菌体生长量采用紫外分光光度法检测660 nm下菌液吸光度，菌株WIN的生长情况如图2，菌株生长108 h后进入稳定期，12-108 h为对数生长期。
[0023]实施例4:菌株WIN扫描电镜
取2 mL实施例3培养108 h的菌液于2 mL离心管中，12000 rpm，离心10 min，弃去上清液。用50 mmol/L磷酸盐缓冲液清洗菌体2次，用1.5 mL 5%戊二醛溶液悬起菌体，置于4°C下孵化2 h，于12000 rpm、4°C下离心15 min，弃去上清液。再依次用1.5 mL 30%、50%、75%、90%、95%乙醇溶液悬起菌体，12000 rpm、4°C，离心15 min，弃去上清液，最后用1.5 mL100%乙醇重悬菌体。样品用导电胶粘附在样品台上，真空离子溅射喷镀铂金膜后使扫描电子显微镜观察，菌株WIN的细胞形态如图3所示，菌体呈椭球形，长度约为6-8 μ mo
[0024]实施例5:不同pH对菌株WIN生长的影响
用KOH和H2SO4溶液调节改良马丁培养基pH分别为5、6、7、8和9，接种实施例3中生长108 h的菌液，接种量10%，培养菌株至144 h取样，采用紫外分光光度法测定生物量，如图4所示。结果表明，菌株WIN在pH 5-9的条件下均能生长，pH为6时生长量最大，OD660为 0.36。
[0025]实施例6:不同温度对菌株WIN生长的影响
采用改良马丁培养基，温度分别设置为20、25、30、35、40°0，接种实施例3中生长108 h的菌液，接种量10%，培养菌株至144 h取样，采用紫外分光光度法测定生物量，如图5。结果表明，菌株WIN在20°C至40°C时均可以生长，其中30°C时生长量最大(?66(|为0.3012。
[0026]实施例7:菌株WIN合成金纳米颗粒的紫外-可见光全波长扫描
取实施例3中培养至108 h的菌液2 mL加入5 mL管中，再加入1.0 mmol/L的HAuC14。将该体系置于150 rpm, 300C摇床振荡孵育。分别在3、6、10、20 min时刻取样，1500 rpm离心5 min，取上清液进行紫外-可见光全波长扫描，如图6所示。结果显示菌株WIN和HAuCI4作用3 min时还没有开始产生AuNPs，而相互作用6 min后即可开始催化HAuCl 4生成AuNPs，全波长扫描显示，该紫色物质在560 nm左右出现明显的吸收峰，证实有金纳米颗粒生成(金纳米颗粒在500 nm-600 nm有特征吸收峰)，菌株WIN在10 min即可达到产AuNPs的峰值，继续反应至20 min时AuNPs量没有明显增加，证实了菌株WIN具有快速合成AuNPs的能力。
[0027]实施例8:菌株WIN合成金纳米颗粒的透射电镜表征
将实施例7中得到的产物进行透射电镜表征，如图7所示。菌株WIN可催化HAuCl4^成不同粒径、形状的金颗粒，尺寸为纳米级，多数纳米金呈不规则的球形，少数金纳米颗粒呈规则的球形及五边形。
[0028]实施例9:菌株WIN合成金纳米颗粒的元素分析
将实施例7中得到的产物负载在铜网上进行能量色散X射线光谱分析，如图8所示。菌株WIN催化HAuCl4合成的纳米颗粒所含金属元素为Au，结果中的Fe、Co、Cu为铜网上含有的元素，C、O等为样品中的生物质。
【主权项】
1.一株丝孢酵母菌i Trichosporonsv.WIN)，其特征是:所述丝孢酵母菌株的登记入册编号为CGMCC N0.10368，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年I月19日。
2.根据权利要求1所述的一株丝孢酵母菌，其特征是:所述丝孢酵母菌株培养基为改良马丁固体培养基或液体培养基，所述液体培养基组成为:葡萄糖10 g/L, (NH4)2SO4 I g/L，MgSO4 0.5 g/L，K2HPO4 I g/L, pH 7 ;并加入四环素 50 mg/L ;土霉素 50 mg/L，所用的固体培养基为对应的液体培养基中加入2 wt%琼脂，固体培养基或液体培养基均在115°C湿热灭菌20 min后使用。
3.根据权利要求1所述的一株丝孢酵母菌在金纳米颗粒合成中的应用，其特征是:所述菌株在催化HAuCl4^成球形或五边形不同形态的金纳米颗粒。
【专利摘要】一株丝孢酵母菌及其在金纳米颗粒合成中的应用，属于微生物技术领域。该菌株分离自实验室反应器污泥，2015年1月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10368。该菌株经26S rRNA基因序列测定，其与Trichosporon具有最高的相似性(99％)，因此该菌分类命名为Trichosporon montevideense，菌株26S rRNA基因序列的GenBank登录号为KP676895。该菌株在改良马丁培养基中生长的最适温度为30℃，最适pH为6。该菌株具有快速合成金纳米颗粒的能力，可催化氯金酸3至6分钟内开始合成金纳米颗粒，10分种即可达到合成的峰值，显示了其在生物冶金领域具有潜在的应用价值。CGMCC No. 1036820150119
【IPC分类】C12N1-14, C12R1-645, C12P3-00
【公开号】CN104694398
【申请号】CN201510094751
【发明人】曲媛媛, 王经伟, 沈文丽, 李端行, 刘紫嫣, 李会杰, 马桥, 周集体
【申请人】大连理工大学
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月4日