一种采用高速逆流色谱从海刀豆中分离多酚单体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于海刀豆提取技术领域，具体涉及一种采用高速逆流色谱从海刀豆中分 离制备多酚单体的方法。
【背景技术】
[0002] 海刀豆（Canavalia maritime)属于豆科刀豆属，在我国沿海滩涂有广泛分布， 其主要成分为黄酮类、多酚类、黄烷类、留醇类化合物，具有抗肿瘤、细胞毒性、溶血脂等作 用。2, 3, 4-三羟基-6-甲氧基-6-氧代-5-[(3, 4, 5-三羟基苯甲酰基）氧基]己酸是分 布于海刀豆中的主要活性物质，是一种多酷单体，其分子式为C24H 18N2O4, ChemSpider ID : 8771037 (http://www. chemspider. com/Molecular-Formula/C14H16012)，结构式如下：
[0003]
【主权项】
1. 一种采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征包括以下步骤： (1) 选取海刀豆，采用加速溶剂萃取法提取后，获得海刀豆粗提物； (2) 选取高速逆流色谱的溶剂体系； (3) 将步骤（1)获得的海刀豆粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂体系的下相溶 解，得到高速逆流色谱分离样液； (4) 采用高速逆流色谱分离步骤（3)的样液，并收集各流分； (5) 将步骤（1)获得的海刀豆粗提物用高效液相色谱分析，确定最大色谱峰的保留时 间； (6) 将步骤（4)收集的各流分采用高效液相色谱分析，收集与步骤（5)中最大色谱峰的 保留时间一致的流分，即为多酚单体。
2. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤（1)中采用加速溶剂萃取法提取时，萃取溶剂为体积百分含量为50~90%的甲 醇，萃取温度为50~130°C，萃取压力为10. 3MPa~20. 6MPa，循环次数为1~5次，每次萃 取时间为5~25min，萃取池容积为10~66mL。
3. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤⑵中高速逆流色谱的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其中正己烷-乙 酸乙酯-甲醇-水的体积比为2:5:2:5。
4. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤（4)中采用高速逆流色谱分离时，分离条件为：流速为I. 0~3. OmL/min，转速为 700 ~900rpm/min，检测波长为 283nm。
5. 根据权利要求1-5任一项所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法， 其特征是：步骤（4)中采用高速逆流色谱分离时，以溶剂体系的上相为固定相，下相为流动 相。
6. 根据权利要求1-5任一项所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法， 其特征是：步骤（5)~（6)中高效液相色谱分析的条件为：Athena C18-WP，4.6mmX250mm， 5 ym ;流动相为甲醇-0. 2%冰醋酸，二者的体积比为20 :80 ;检测器88232UV紫外检测仪， 检测波长283nm ;流速lmL/min ;柱温30°C ;进样量20 y L。
7. 根据权利要求1所述的采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，其特征 是：步骤（6)中多酚单体的纯度大于95%。
【专利摘要】本发明公开了一种采用高速逆流色谱分离海刀豆中多酚单体的方法，包括以下步骤：(1)将海刀豆用加速溶剂萃取法提取，得粗提物；(2)选取高速逆流色谱的溶剂系统；(3)将粗提物浓缩至膏状，用高速逆流色谱溶剂系统的下相溶解，得高速逆流色谱分离样液；(4)采用高速逆流色谱分离样液，收集各流分；(5)将各流分采用高效液相色谱分析，通过高效液相色谱的保留时间定性，收集与粗提物主要成分保留时间一致的流分即为多酚单体。该方法将加速溶剂萃取ASE与高速逆流色谱HSCCC联用实现海刀豆中多酚单体的分离纯化，其精密度和重现性相对传统的分离纯化方法得到了提升。且操作简单、耗时短、适用范围广、对环境污染小、易于工业推广。
【IPC分类】C07C67-48, C07C69-84, C07C67-56
【公开号】CN104744260
【申请号】CN201510167203
【发明人】邓建朝, 李来好, 杨贤庆, 牛改改, 吴燕燕, 戚勃, 马海霞, 胡晓, 荣辉, 黄卉, 赵永强, 王锦旭
【申请人】中国水产科学研究院南海水产研究所
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月9日