一种高速逆流色谱提取油茶中抑菌物质的方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及高速逆流色谱分离纯化领域，具体涉及一种高速逆流色谱提取油茶中 抑菌物质的方法及应用，还涉及一种油茶提取物。
【背景技术】
[0002] 目前，对植物源中活性成分的提取大部分采用水提法、水蒸气蒸馏法、有机溶剂 法、超滤膜法等，这些方法不同程度地存在得率低、提取时间长、流程多、能耗大、纯度低等 缺点。
[0003] 而高速逆流色谱是一种新型的液一液分配色谱技术，可以在较短的时间内实现样 品在两个互不相溶的溶剂系统中的高效分配，从而实现样品高度分离。HSCCC最大的优点是 每次分离样品的进样量比较大，可以达到毫克量级，甚至克量级；同时，HSCCC是一种不使用 固态支撑体或载体的液液分配色谱技术。它不需要任何固态载体，只是借助螺旋管的同轴 行星式运动实现固定相的高保留以充分分配分离，避免了分离样品与固态载体表面发生化 学反应而变性和不可逆吸附等情况。每次分离样品结束后，管道中残留溶剂均可冲出，不会 对后续分离产生任何影响，因此分离样品均具有高回收率。
[0004] 目前，应用HSCCC方法分离制备油茶中最强抑菌活性物质的研究还尚未见报道。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种高速逆流色谱提取油茶中 抑菌物质的方法及应用、油茶提取物。
[0006] 第一方面，本发明提供了一种高速逆流色谱提取油茶中抑菌物质的方法，包括以 下步骤：
[0007] (1)油茶粗提物的制备:连续相变萃取茶粉原料，获得油茶粗提物；
[0008] (2)高速逆流色谱法分离:采用含I -10 %乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液作为 两相溶剂体系，在流速I. 〇~3. OmL/min，主机转速500~900r/min，进样量IOOmg~600mg的 条件下，将步骤(1)制得的油茶粗提物进行高速逆流色谱法分离，并根据峰形分段收集流出 液，获得油茶中的抑菌物质；其中，所述含1-10%乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液中，乙 酸乙酯、正丁醇、水的体积比为1:2~4:4。
[0009] 优选的，步骤(1)中所述的茶粉原料通过将油茶的茶叶或茶梗、根、花、籽柏粉碎制 得。
[0010] 进一步优选的，将油茶的茶叶或茶梗、根、花、籽柏粉碎至20-80目，得到茶粉原料。
[0011] 优选的，步骤（1)所述的连续相变萃取茶粉原料，获得油茶粗提物的步骤包括:将 茶粉原料装入萃取釜中，在始终低于萃取剂的临界压力和临界温度的条件下，将萃取剂压 缩为液体，在萃取温度50-901，萃取压力0.3-0.71〇^的条件下，流经萃取釜，连续萃取1-5h，所得萃取物流经解析釜，获得油茶粗提物。
[0012] 优选的，所述步骤（1)中，所述萃取剂包括但不限于乙醇、甲醇、丙酮、石油醚、苯、 氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷，丙烷、丁烷中的一种或多种。
[0013]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂的浓度为50-90%。
[0014]优选的，所述步骤（1)中，所述萃取剂为70-90 %的乙醇水溶液，萃取温度优选为 70-90°C，萃取压力优选为0 · 4-0 · 6MPa，连续萃取l-3h。
[0015] 优选的，所述步骤(1)中，所述流经萃取釜的流速为80-150L/h。
[0016] 优选的，所述步骤（1)中，所述流经解析釜中解析并收集萃取物的条件为:解析温 度为80-90°C，解析压力为0 · 05-0 · 2MPa。
[0017]进一步优选的，所述步骤(1)中，解析温度为90°C，解析压力为0.2MPa。
[0018] 优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为70%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 70°C，萃取压力0 · 4MPa，连续萃取lh。
[0019] 优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为70%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 80°C，萃取压力0 · 5MPa，连续萃取2h。
[0020] 优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为70%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 90°C，萃取压力0 · 6MPa，连续萃取3h。
[0021]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为80%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 90°C，萃取压力0 · 5MPa，连续萃取lh。
[0022]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为80%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 70°C，萃取压力0 · 6MPa，连续萃取2h。
[0023]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为80%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 80°C，萃取压力0 · 4MPa，连续萃取3h。
[0024] 优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为90%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 80°C，萃取压力0 · 6MPa，连续萃取lh。
[0025] 优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为90%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 90°C，萃取压力0 · 4MPa，连续萃取2h。
[0026] 优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为90%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 70°C，萃取压力0 · 5MPa，连续萃取3h。
[0027]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为80%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 70°C，萃取压力0 · 5MPa，连续萃取lh。
[0028]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为80%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 80°C，萃取压力0 · 4MPa，连续萃取3h。
[0029]优选的，所述步骤(1)中，所述萃取剂为80%的乙醇水溶液，萃取条件为:萃取温度 80°C，萃取压力0 · 4MPa，连续萃取lh。
[0030] 可以理解的是，本领域技术人员为了后续纯化，可进一步采用有机溶剂对步骤(1) 获得的油茶粗提物进一步萃取提纯。所述有机溶剂包括但不限于石油醚、正丁醇、乙酸乙 酯、乙醚、苯、氯仿、二氯乙烷，丙烷、丁烷中的一种或多种。
[0031] 优选的，所述采用有机溶剂对步骤（1)获得的油茶粗提物进一步萃取提纯的步骤 包括：
[0032] 将步骤(1)所得油茶粗提物加入蒸馏水溶解后，加入石油醚，充分振摇萃取，静置， 待溶液完全分层后，放出上层的乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得石油醚萃取物。
[0033]进一步优选的，采用有机溶剂对所得石油醚萃取物进一步萃取提纯的步骤包括： [0034]将所得石油醚萃取物加入蒸馏水溶解后，加入乙酸乙酯，充分振摇萃取，静置，待 溶液完全分层后，放出上层的乙酸乙酯萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物。
[0035]更进一步优选的，采用有机溶剂对所得乙酸乙酯萃取物进一步萃取提纯的步骤包 括：
[0036]将所得乙酸乙酯萃取物加入蒸馏水溶解后，加入正丁醇，充分振摇萃取，静置，待 溶液完全分层后，放出上层的正丁醇萃取液，直至正丁醇层澄清无色。将萃取液合并，减压 浓缩得正丁醇萃取物。
[0037]优选的，步骤(2)中，采用含3%乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液作为两相溶剂 体系。
[0038] 优选的，步骤(2)中，所述含1-10 %乙酸的乙酸乙酯、正丁醇、水混合液中，乙酸乙 酯、正丁醇、水的体积比为1:4:4、1:3:4或1:2:4。
[0039] 可以理解的是，步骤(2)中乙酸乙酯-正丁醇-水(含I -10 %乙酸，优选含3 %乙酸） 溶剂体系的配制方法为本领域技术人员容易理解的常规技术，包括但不限于如下方法:将 乙酸乙酯、正丁醇、水、乙酸按一定体积比用分液漏斗配制，充分振摇后静置过夜，分离上、 下相，两相分别超声脱气15~30min，即得乙酸乙酯-正丁醇-水(含1-10%乙酸，优选含3% 乙酸)溶剂体系，以上相溶液为高速逆流色谱的固定相，下相溶液为流动相。
[0040] 优选的，步骤(2)中，所述流速为1.5~3 .OmL/min，主机转速为800~850r/min，进 样量为100~500mg。
[0041 ] 进一步优选的，步骤(2)中，所述流速为1.5~1.7mL/min，主机转速为800~850r/ min，进样量为100~500mg。
[0042] 更进一步优选的，步骤(2)中，所述流速为1.5~1.7mL/min，主机转速为850r/min， 进样量为500mg。
[0043]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:4:4)作为两相溶 剂，在流速3mL/min，主机转速800r/min，进样量IOOmg的条件下，根据峰形分段收集流出液。 [0044]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:4:4)作为两相溶 剂，所述流速为1.7mL/min，主机转速为850r/min，进样量为500mg。
[0045]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:4:4)作为两相溶 剂，流速1.5mL/min，主机转速850r/min，进样量500mg。
[0046]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:3:4)作为两相溶 剂，所述流速为1.5mL/min，主机转速为800r/min，进样量为lOOmg。
[0047]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:3:4)作为两相溶 剂，所述流速为2. OmL/min，主机转速为850r/min，进样量为300mg。
[0048]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:3:4)作为两相溶 剂，所述流速为3. OmL/min，主机转速为850r/min，进样量为500mg。
[0049]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:2:4)作为两相溶 剂，所述流速为1.5mL/min，主机转速为800r/min，进样量为100mg。
[0050]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:2:4)作为两相溶 剂，所述流速为2. OmL/min，主机转速为850r/min，进样量为300mg。
[0051]优选的，步骤（2)中，选用乙酸乙酯-正丁醇-水（含3%乙酸）（1:2:4)作为两相溶 剂，所述流速为3. OmL/min，主机转速为850r/min，进样量为500mg。