高速逆流色谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黄酮类化合物的制备方法，具体涉及一种以高速逆流色谱法从油 茶籽壳中分离制备黄酮类化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 油茶（Camellia oleifera)属山茶科山茶属，种子可榨油供食用，茶籽壳即为外种 皮，种皮含较多色素呈棕黑色，且较坚硬，占茶果重的30. 6% -34.0%。油茶树是我国主要 的木本油料树种之一，每年产油150万吨，茶籽壳为茶籽榨油后的副产物，是茶籽榨油前除 去的种皮，其利用率却相对较低。研宄表明，茶籽壳中富含茶皂素、黄酮、多糖、多酚、原花青 素等成分，若能将茶籽壳加以有效利用，必将产生巨大的经济效益。
[0003] 现代研宄表明，黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌、抗心脑血管疾病、抗炎、抗病毒、 免疫调节等多种生理功能及药理作用，其提取物可用于食品、药品、化妆品等产品中。因此 充分开发利用油茶籽壳中的黄酮类化合物具有十分重要的现实意义，不仅可解决废物污染 环境的问题，还可提高油茶的经济效益。
[0004] 高速逆流色谱法是一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，已在生物、医药、 食品、材料等领域得到广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视， 但以该高速逆流色谱法从油茶籽壳中分离制备黄酮类化合物的方法尚未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种高速逆流色 谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种高速逆流色谱制备油 茶籽壳中黄酮类化合物的方法，该方法步骤如下：
[0007] A.油茶籽壳提取物的制备：取油茶籽壳粉，用为油茶籽壳粉6-12倍重量的 50-70%质量浓度的乙醇提取，收集提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇后通过装有D-101大 孔吸附树脂的层析柱以2-3BV/h流速进行吸附，吸附后静置30min-60min，先用3-4BV的水 以4-6BV/h的流速淋洗，然后用4-6BV质量浓度为10%的乙醇水溶液以2-4BV/h的流速洗 脱，再用30%质量浓度的乙醇水溶液以2-4BV/h的流速洗脱至无色，收集30%质量浓度的 乙醇洗脱液，浓缩后冷冻干燥，得油茶籽壳提取物；
[0008] 上述油茶籽壳粉是取油茶籽壳，粉碎过10目筛得到。
[0009] 上述步骤A中乙醇提取时的温度为50-60°C，提取次数为3次，每次提取时间为 0.5-lh〇
[0010] B.高速逆流色谱法分离：按体积比以水：正丁醇：甲基叔丁基醚：乙腈：冰乙酸为 6 :3 :1 :1 001作为两相溶剂体系，充分混合后静置过夜，两相分离后超声脱气，上相作 固定相，下相作流动相；在流速2mL/min、主机转速850rpm/min，分离温度20°C，检测波长 280nm，上样量300mg的条件下，将上述制得的油茶籽壳提取物进行HSCCC分离，根据峰形分 段收集流出液，将收集的流出液旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，得粉末状化合物1和化合物2， 其结构分别如下：
[0011]
【主权项】
1. 一种高速逆流色谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法，其特征在于，该方法步骤 如下： A. 油茶籽壳提取物的制备：取油茶籽壳粉，用为油茶籽壳粉6-12倍重量的50-70%质 量浓度的乙醇提取，收集提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇后通过装有D-101大孔吸附树脂 的层析柱以2-3BV/h流速进行吸附，吸附后静置30min-60min，先用3-4BV的水以4-6BV/h 流速淋洗，然后用4-6BV质量浓度为10%的乙醇水溶液以2-4BV/h的流速洗脱，再用30% 质量浓度的乙醇水溶液以2-4BV/h的流速洗脱至无色，收集30 %质量浓度的乙醇洗脱液， 浓缩后冷冻干燥，得油茶籽壳提取物； B. 高速逆流色谱法分离：按体积比以水：正丁醇：甲基叔丁基醚：乙腈：冰乙酸为6 : 3 :1 :1 :0. 001作为两相溶剂体系，充分混合后静置过夜，两相分离后超声脱气，上相作固定 相，下相作流动相；在流速2mL/min、主机转速850rpm/min，分离温度20°C，检测波长280nm， 上样量300mg的条件下，将上述制得的油茶籽壳提取物进行HSCCC分离，根据峰形分段收集 流出液，将收集的流出液旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，得粉末状化合物1和化合物2,其结构 分别如下：
2. 如权利要求1所述的高速逆流色谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法，其特征在 于，所述步骤A中乙醇提取时的温度为50-60°C，提取次数为3次，每次提取时间为0. 5-lh。
3. 如权利要求1所述的高速逆流色谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法，其特征在 于，所述步骤A中油茶籽壳粉的粒度为10目。
【专利摘要】一种高速逆流色谱制备油茶籽壳中黄酮类化合物的方法，该方法以油茶籽壳为原料，粉碎后经乙醇提取，收集提取液，用D-101大孔吸附树脂纯化后，以水：正丁醇：甲基叔丁基醚：乙腈：冰乙酸为6：3：1：1：0.001(体积比)作为高速逆流溶剂体系，对油茶籽壳提取物进行高速逆流色谱分离，制得2个黄酮类化合物。本方法简便，重现性好，可用于化合物大量制备，为进一步活性研究奠定了物质基础。
【IPC分类】C07H1-08, C07H17-07
【公开号】CN104861019
【申请号】CN201510345178
【发明人】陆英, 李觅路, 李嘉伟, 刘毅
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年6月19日