一种有机酸水解柚皮苷制备柚皮素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种制备抽皮素的方法，属于化学提纯技术领域。
【背景技术】
[0002] 抽皮素是抽皮巧的巧元，由于抽皮素具有重要的生物活性，因此被广泛地应用于 医药、保健品、食品等领域。
[0003] 在医药领域，抽皮素具有高效低毒的抗肿瘤潜能，李瑞芳等（李瑞芳，左学 兰，周颖，等.抽皮素对人髓系白血病K562细胞增殖的作用[J].武汉大学学报：医学 版，2007, 28 (3) : 344-347.)研究了抽皮素对人慢性髓系白血病K562细胞株生长的影响及 其作用机制，初步证实了抽皮素对人白血病K562细胞具有显著的增殖抑制作用；宋紫辉 (宋紫辉.抽皮素对急性免疫性肝损伤的保护作用巧].开封：河南大学，2009:1-68.)发 现抽皮素对小鼠免疫性急性肝损伤有保护作用，其直接抑制T淋己细胞的激活，从而阻止 了各种炎症因子的分泌，达到减轻肝损伤的目的。在保健品领域，抽皮素可用作功能食品 添加剂，用于治疗由于人体血液中过多的血液胆固醇和甘油S醋引起的疾病。
[0004] 在食品领域中，抽皮素可作为食品中的香料添加剂，进行食用香料或者甜味剂的 调配。作为香料添加剂，最为重要的品质指标是纯度高和口感无苦味无异味，只有满足了上 述品质指标，才可W实现具有功能作用的抽皮素和植物来源甜味剂的联合应用，从而利用 抽皮素遮盖甜味剂的不良口感，W替代食品业中大量庶糖的应用，具有非常广阔的市场前 景。
[0005] 由于抽皮素广泛存在于费奠、化橘红、积实、桃叶等天然植物中，所W，目前抽皮素 的制备方法主要有两种；第一、提取法，即从含有抽皮素的天然植物中通过特定工艺进行提 取、纯化等；第二、水解法，即W抽皮巧作为反应物，通过对反应物进行水解反应制备抽皮 素。其中，从天然植物中提取的方法，需要复杂的提取分离工艺，往往提取收率低且=废排 放量大。
[0006] 其中，水解法主要包括酶水解法和酸水解法。雷生蛟等（雷生蛟，潘思铁.抽（皮） 巧酶的研究进展[J].食品科学，2009, 30 (19) : 314-317.)报道的一种酶水解法制备抽皮素 的工艺，该工艺由aA-鼠李糖巧酶和P-D-葡萄糖巧酶组成混合抽巧酶，该种酶可有效地 将抽皮巧水解为鼠李糖、抽皮素和葡萄糖，但生物酶造价高，易失活，且酶水解法耗时较长， 水解过程通常需要几十个小时，生产效率极低，生产成本高。酸水解法一般采用水或者醇作 溶剂，刘亚萍（刘亚萍，抽皮素的制备方法研究，光谱实验室，2008, 25化），1292-1294.)在 "抽皮素的制备方法研究"中采用硫酸水解抽皮巧得到抽皮素，但是该方法所得到的巧元需 要用己醇反复结晶才能得到高纯度抽皮素。在申请号201010530272. 4的中国发明申请公 开了一种采用低级醇或者酬作为溶剂进行酸水解的方法，得到的抽皮素粗品杂质较少，然 而有机溶媒进行酸水解也增加了成本和操作复杂程度。
[0007] 现有技术中提取或水解法得到的抽皮素，均有苦味或者其他异味残留的问题，严 重影响了抽皮素作为食品添加剂在食品或保健品领域中的应用。鉴于此，研究一种味道纯 正、没有苦味或其他异味残留的抽皮素的制备方法，是本发明亟待解决的问题。
【发明内容】
[000引因此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中的抽皮素产品中有苦味或 其他异味残留的技术缺陷，从而提出一种纯度高、味道纯正、没有杂味的抽皮素的制备方 法。
[0009] 为此，本发明提供一种抽皮素的制备方法，包括：
[0010] A、将抽皮巧固体边揽拌边加入有机酸性溶液中，于高压蓋中加热水解，水解一定 时间后将水解后的反应液冷却至室温，将反应液抽滤，用一定量纯化水抽滤淋洗滤饼至中 性，获得抽皮素粗品；
[0011] B、将步骤A中得到的抽皮素粗品溶解在含有活性炭的己醇溶液中，加热揽拌脱色 除杂，并趁热滤除活性炭，得到脱色除杂后的滤液；将脱色除杂后的滤液静置析晶，抽滤收 集析出的白色针状结晶，干燥，获得抽皮素。
[0012] 上述抽皮素的制备方法中，所述有机酸为巧樣酸、富马酸、酒石酸、苹果酸中的一 种或多种。
[0013] 上述抽皮素的制备方法中，所述步骤A中抽皮巧及有机酸的加入比例为固液比 (W/V) 1:3-1:25,优选 1:5-1:20 ;有机酸浓度为 0. 5-4. 5mol/L，优选 0. 8-4mol/L，更优选 为 1. 5-3. 5mol/l，更优选为 0. 5-2. 5mol/l，更优选为 0. 8-2mol/l，0. 6-2mol/l，更优选为 2-3mol/L。
[0014] 上述抽皮素的制备方法中，所述步骤A中加热水解的温度为80-140°C，反应时间 为0. 5-化，优选加热水解的温度为90-130°C，反应时间为1-化。
[0015] 上述抽皮素的制备方法中，所述步骤B中抽皮素粗品及己醇溶液的加入比例为固 液比（W/V) 1:5-1:35,优选 1:10-1:30 ;己醇浓度（V/V% )为 45% -95%，优选 50% -90% ; 活性炭含量（W/V% )为1% -12%，优选2% -10%。
[0016] 上述抽皮素的制备方法中，所述步骤B中加热揽拌的温度为55-100°C，优选 60-95°C;反应时间为 25-70min，优选 30-60min。
[0017] 上述抽皮素的制备方法中，当采用有机酸进行催化时，优选所述步骤A中加热水 解的温度为90-130°C，反应时间为1-化；所述步骤B中己醇浓度（V/V% )为50% -90%， 活性炭含量（W/V% )为2% -10%，加热揽拌的温度为60-95°C，反应时间为30-60min，纯化 后抽皮素含量达98%W上。
[0018] 上述抽皮素的制备方法中，当采用巧樣酸进行催化时，所述步骤A中有机酸浓度 优选为1. 5-3. 5mol/l，抽皮素粗品含量达87% -92% ;当采用富马酸进行催化时，所述步骤 A中有机酸浓度优选为l-3mol/l，抽皮素粗品含量达84% -91% ;当采用酒石酸进行催化 时，所述步骤A中有机酸浓度优选为l-3mol/l，抽皮素粗品含量达83% -90%;当采用苹果 酸进行催化时，所述步骤A中有机酸浓度优选为2-4mol/l，抽皮素粗品含量达81% -88% ; W上优选方案中所述步骤B中经一次纯化后抽皮素含量均达98%W上。
[0019] 本发明还提供一种抽皮素，由上述制备方法制备得到，抽皮素含量>98 % (HPLC)〇
[0020] 本申请人经过长期研究发现，在使用硫酸进行酸水解抽皮巧的过程中，一般水解 温度较高，时间较长。由于硫酸具有较强的氧化性，使抽皮巧或者抽皮素产生一定程度的氧 化产物，在后续纯化过程中有残留，导致最终产品中会有苦味或者其它异味残留。
[0021] 本发明的上述技术方案相比现有技术具有W下优点：
[0022] 本发明所述抽皮素的制备方法，其使用有机酸溶液水解抽皮巧，水解的抽皮素得 率高，水解过程更稳定，降低了后续纯化难度及成本，且本工艺所得抽皮素在制备全部流程 中均为天然原料，和现有技术中所用无机酸水解工艺相比味道纯正，没有苦味或其他杂味， 更为绿色环保，纯化过程中经一次结晶而不需重复结晶提纯即可得到纯度>98%的产品。
【具体实施方式】
[0023] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，W下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。
[0024] 实施例中所用巧樣酸、富马酸、酒石酸、苹果酸等有机酸均为市售纯度大于99%的 食品级产品。抽皮巧为市售纯度大于95%的合格产品。用于口感对比实验的市售抽皮素为 纯度大于98%的合格产品。液相检测所用抽皮素对照品为自制纯度> 99%产品。
[0025] 实施例1-4W巧樣酸为催化剂水解抽皮巧制备抽皮素
[0026]A分别将50g抽皮巧按不同固液比边揽拌边入不同浓度的巧樣酸溶液中，于高压 蓋中加热水解（具体工艺条件见表1)，水解结束后的反应液冷却，分别取样用液相测定水 解液中抽皮素含量并计算抽皮巧的水解率（检测结果见表1)。将反应液进行抽滤，用一定 量纯水淋洗滤饼至中性，即得到抽皮素粗品。
[0027] 表1 ;巧樣酸催化水解抽皮巧条件 [002引
【主权项】
1. 一种柚皮素的制备方法，其特征在于，步骤包括： A、 将柚皮苷边搅拌边加入有机酸溶液中，加热水解，将水解后的反应液冷却，对反应液 进行抽滤，淋洗滤饼至中性，获得柚皮素粗品。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括纯化步骤。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述纯化步骤具体为： B、 将步骤A中得到的柚皮素粗品溶解在含有活性炭的乙醇溶液中，加热搅拌脱色除 杂，并趁热滤除活性炭，得到脱色除杂后的滤液；将滤液冷却析晶，抽滤收集析出的白色针 状结晶，干燥，获得柚皮素。
4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述有机酸为柠檬酸、富马酸、酒石 酸、苹果酸中的一种或多种。
5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A中柚皮苷及有机酸的 加入比例为固液比（W/V) 1:3-1:25,优选1:5-1:20 ;有机酸浓度为0. 5-4. 5mol/L，优选 0· 8-4mol/L，更优选为 I. 5-3. 5mol/L，更优选为 0· 5-2. 5mol/L，更优选为 0· 8-2mol/L，更优 选为 2-3mol/L。
6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A中加热水解的温度为 80-140°C，反应时间为0. 5-5h ;优选温度为90-130°C ;优选反应时间为l_4h。
7. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述步骤B中柚皮素粗品及乙醇溶 液的加入比例为固液比（W/V) 1:5-1:35,乙醇浓度（V/V% )为45% -95%，活性炭含量（W/ V% )为1% -12% ;优选固液比（W/V) 1:10-1: 30,乙醇浓度（V/V% )50% -90% ;活性炭含 量（W/V% )为 2% -10%。
8. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述步骤B中加热搅拌的温度为 55-100°C，反应时间为25-70min ;优选搅拌温度60-95°C ;反应时间30-60min。
9. 一种柚皮素，其特征在于上述权利要求1-8之一所述的制备方法制备得到，柚皮素 含量多98%。
【专利摘要】本发明提供一种柚皮素的制备方法，将柚皮苷与有机酸溶液混合水解，经抽滤后用水洗涤得到柚皮素粗品；再加入乙醇溶液搅拌，经活性炭脱色后经过滤，静置后析晶，抽滤干燥，即得到柚皮素。本发明在酸水解过程中采用有机酸溶液，本工艺所得柚皮素和通常所用无机酸水解工艺相比，所得产品与市售无机酸水解纯化所得柚皮素相比，味道纯正，没有杂味，且水解的柚皮素得率高，降低了后续纯化难度及成本，更为绿色环保。
【IPC分类】C07D311-32
【公开号】CN104829579
【申请号】CN201510160588
【发明人】温尧林, 曾光, 张秀才
【申请人】苏州凯祥生物科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月7日