一种酶法水解蜗牛黏液制备生物活性肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及蛋白质水解技术领域，具体涉及一种酶法水解蜗牛黏液制备生物活性肽的方法。
【背景技术】
[0002]蜗牛黏液是蜗牛的足腺分泌的粘滑液体，帮助蜗牛在爬行过程中保护腹足肌肉与地面直接摩擦时不受到损伤；也可以让蜗牛在静止时吸附在岩石表面，形成暂时的封闭结构。蜗牛黏液密度较大，不易蒸散，进而减缓体内水分的散失，所以蜗牛黏液具有降低水分散失、湿润皮肤的作用。蜗牛黏液中含水量为95% _99%，蛋白质含量为5.0-5.lmg/g，糖类含量0.3-0.6mg/g，是蜗牛黏液中最主要的活性物质。此外，还含有大量活性物质如糖蛋白、尿囊素、甘醇酸、骨胶原、软骨素、维生素、小分子抗氧化类物质等制作化妆品必不可少的材料。例如蛋白质可以增加皮肤营养，使肌肤更加细腻和光滑，还具有较强的抗氧化作用:其中的胶原蛋白，是皮肤重要结缔组织成分，与弹力蛋白共同架构完整皮肤，具有保持水分的功效；弹力蛋白可保持皮肤组织，当年龄增长时，皮肤失去弹性产生皱纹，适当补充弹力蛋白可防治皱纹提早出现，并减少紫外线对皮肤的伤害。黏液中的尿囊素可有效修补伤痕，刺激细胞再生，是皮肤柔软剂和抗氧化剂。另外蜗牛黏液也是一种天然抗生素，能够杀死皮肤上的某些细菌，消除皮肤斑点和痤疮。除了被应用于化妆品外，蜗牛黏液在治愈烧伤皮肤和处理大的疤痕皮肤等方面具有显著的功效。
[0003]然而，蜗牛黏液中的蛋白质由于分子量大，结构复杂，粘度大，人体吸收率并不高。因此可将黏液中的蛋白质水解为分子量较小的生物活性肽，加强皮肤对蜗牛黏液中蛋白质的吸收，扩大蜗牛黏液的应用范围。
[0004]生物活性肽是指对生物机体的生命活动有益或具有生理功能的肽类化合物。与蛋白质相比，活性肽具有良好的理化性能，如良好的溶解性和水合性、粘度低、生物利用率高，比氨基酸更易吸收，具有调节人体生理机能的功效，是原蛋白质及其组成氨基酸所不具备的。因此被广泛应用于食品、保健品和化妆品中。
[0005]近年来，世界各国已经从各种乳蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、鱼贝类蛋白、胶原蛋白等食物蛋白中提取和分离得到多种生物活性肽。其中一些已作为保健食品和药物实现了工业化生产，并取得巨大的经济效益。活性肽类食品、保健品和化妆品在日本、美国、欧洲已上市，其中日本在活性肽生产方面走在世界前列。而我国对活性肽的研究起步较晚，产品并不多见。因此，充分利用我国丰富的蛋白质资源，开发具有良好生物活性的肽类产品，具有非常广泛的市场和应用前景。
[0006]目前对蜗牛产品的应用开发多集中在食品和化妆品领域，研究比较多的是多糖、蜗牛酶、分泌物提取等方面，但未见对蜗牛黏液中的蛋白质水解方面的研究。由蜗牛黏液中的蛋白质水解制备的生物活性肽，与植物来源的产品相比，其氨基酸组成和比例与人体氨基酸更为相似。在生产工艺方面，传统的方法多采用酸法水解动植物蛋白，生产工艺较难控制，造成氨基酸一定程度的破坏；而且酸和高温条件往往导致水解液中含有致癌物质，尤其是氯丙醇含量超标，大大限制了产品的使用。本发明采用酶法水解蜗牛黏液制备生物活性肽，具有反应条件温和、原料有效成分保存完整、产物安全、无有毒有害副产物生成、无氨基酸破坏或消旋现象、无环境污染等优势。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于，提供一种酶法水解蜗牛黏液制备生物活性肽的方法，充分开发利用我国丰富的优质蛋白质资源，通过体外蛋白酶水解技术释放出具有生物活性的肽类产品，发挥原蛋白质不具备的生理功能。
[0008]本发明为实现上述目的所采用的技术方案如下:
[0009]—种酶法水解蜗牛黏液制备生物活性肽的方法，该方法为:收集蜗牛黏液，调节蜗牛黏液的PH值为所用蛋白酶的最适pH值，加入蛋白酶，加热搅拌，进行酶解，酶解结束后进行灭酶处理制得酶解液；将前述制得的酶解液进行脱色、过滤，得到的滤液经浓缩、干燥处理，制得所述生物活性肽产品。具体包括如下步骤:
[0010](I)黏液收集:将蜗牛足部黏液用药匙刮入容器内，用去离子水冲洗蜗牛足部残留的黏液，合并液体。
[0011](2)酶解:调节蜗牛黏液的pH值为所用酶的最适pH值，加入酶，并加热搅拌，进行酶解。酶解结束后，水解液煮沸5-10min灭酶。
[0012](3)脱色:向酶解液中加入活性炭，搅拌脱色。
[0013](4)过滤:使用助滤剂硅藻土预敷过滤介质，将脱色后的酶解液过滤得到无色、透明状液体。
[0014](5)浓缩:过滤后的液体浓缩去除大部分水分。
[0015](6)干燥:浓缩后的粘稠状液体经干燥得到粉末状生物活性肽产品。
[0016]步骤(I)所述蜗牛黏液优选白玉蜗牛产生的黏液。
[0017]步骤(2)所述的酶为蛋白酶，可以是酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶、菠萝蛋白酶等中的一种或几种酶的复合酶。所述的酶的最适pH值为:酸性蛋白酶3.0-5.0，碱性蛋白酶8.0-11.5，中性蛋白酶6.5-7.5，木瓜蛋白酶5.0-7.0、胰蛋白酶7.0-8.5、风味蛋白酶6.5-7.5、菠萝蛋白酶6.0-8.0。
[0018]步骤(2)所述的酶的添加量为蜗牛黏液体积的0.1-3% (w/v)，即酶质量与蜗牛粘液体积的百分比为0.1-3%，优选为1-2%。
[0019]步骤(2)所述的酶解时间为0.5-4h，优选2-3h ;酶解温度为40_60°C，优选50°C。
[0020]步骤(3)所述的活性炭的添加量为液体体积的0.5-2w/v%,优选I %;脱色温度为室温_50°C，优选室温；脱色时间为0.5-3h，优选lh。
[0021]步骤(4)所述的过滤可采用真空抽滤、板框过滤、离心等方式，过滤时使用硅藻土等助滤剂，娃藻土的使用量为液体体积的0.5~2w/v%,优选I %。
[0022]步骤(5)所述的浓缩可采用但不局限于真空浓缩。
[0023]步骤(6)所述的干燥可采用冷冻干燥或喷雾干燥。
[0024]与现有技术相比，本发明的有益效果如下:
[0025](I)本发明采用酶水解法对蜗牛黏液进行水解，蛋白水解度高，可达22.06%。所述蛋白水解度，指蛋白质水解过程中肽键被裂解的程度或百分比，即该工艺中22.06%的肽键