高纯度低分子量肝素钠的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药原料制备领域，具体涉及一种高纯度低分子量肝素钠的制备方法。
【背景技术】
[0002]肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药，属粘多糖类物质。其药物功能主要体现在:治疗各种疾病并发的播散性血管内早期凝血；预防动、静脉血栓和肺栓塞；治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛，急性心肌梗塞；人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物；作为溶血栓疗法的维持治疗，用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。
[0003]纯化的肝素钠过程主要是对粗品肝素钠进行除杂和脱色，现有技术中，肝素钠的纯化主要有两种:①在不同pH条件下采用高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法，②过氧化氢分次加入的二次氧化法，经这两种方法处理后再以有机溶剂进行分级沉淀获得纯化的肝素钠。但第一种方法的缺点是产品的活性损失大、色泽差，产生的二氧化锰较难滤除，且二氧化锰对肝素钠有部分吸附作用，同时得到肝素外用级或类肝素等副产品，使产品回收率较低；第二种方法所得产品色泽较好，目前应用比较广泛，但可能是二次氧化对肝素钠结构造成破坏，难以得到较高纯度的低分子量肝素钠。
[0004]低分子肝素是从普通肝素通过降解得到的小分子肝素制品，具有生物利用率高、血浆半衰期长等优点，特别是其引起的出血副作用大幅降低。目前高纯度低分子量肝素钠的制备方法生产周期长、得率低，工艺复杂而且制得的产品质量不稳定。
【发明内容】
[0005]针对现有技术不足，本发明提供了一种高纯度的低分子量肝素钠的制备方法。
[0006]本发明解决上述技术问题采用的技术方案为:高纯度低分子量肝素钠的制备方法，包括以下步骤:
[0007]①粗品低分子量肝素钠的制备
[0008]a.将粗品肝素钠溶于生理盐水中，充分搅拌溶解后，向溶液中边搅拌边滴加碱液至沉淀产生，静置后滤去不溶物得肝素钠溶液；
[0009]b.调节a步骤所得的肝素钠溶液pH为5?6，并将肝素钠溶液降温至I?8°C，分3次加入总重量为粗品肝素钠1.2%的亚硝酸钠，每次加入1/3的亚硝酸钠，并充分搅拌2?3h后再行加入，最终得粗品低分子量肝素钠溶液；
[0010]②粗品低分子量肝素钠的纯化
[0011]C.将b步骤所得粗品低分子量肝素钠溶液用碱液调节pH为8?9，并加入为溶液质量4?5%的氯化钠，充分搅拌后采用阴离子交换柱吸附；
[0012]d.采用浓度为3?5%的氯化钠溶液洗涤，并采用浓度为15?25%的氯化钠溶液洗脱，将洗脱液经超滤膜过滤，所得滤液加入2倍的乙醇并充分搅拌，用于沉淀肝素钠，得沉淀物；
[0013]e.将沉淀物脱盐及脱水后，于30?50°C下抽真空干燥得纯化肝素钠；
[0014]f.将所得纯化肝素钠采用凝胶过滤，经杀菌消毒处理后得高纯度低分子量肝素钠。
[0015]进一步地，所述阴离子交换柱为弱碱性离子交换柱D315。
[0016]进一步地，所述碱液为NaOH溶液。
[0017]进一步地，所述超滤膜为5000D的超滤膜。
[0018]按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在120?180IU/mg，平均分子量在 2200 ?3000Da，抗 FIIa 效价在 I ?8IU/mg。
[0019]按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在140?150IU/mg，平均分子量在 2400 ?2600Da，抗 FIIa 效价在 1.5 ?2IU/mg。
[0020]本发明所具备的优点:
[0021]1、本发明的原料-粗品肝素钠来源丰富，得率可达85%以上，所得产品纯度高、质量稳定，成本低，无毒副作用，可进一步制备成注射剂、胶囊剂等。
[0022]2、工艺简单，无废液排放，工艺条件环保。
[0023]3、本发明制得的产品抗FXa效价在120?180IU/mg，平均分子量在2200?3000Da JjtFIIa效价在I?8IU/mg，综合质量较高。
【具体实施方式】
[0024]下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述。
[0025]实施例1:高纯度低分子量肝素钠的制备方法，包括以下步骤:
[0026]①粗品低分子量肝素钠的制备
[0027]a.将粗品肝素钠溶于生理盐水中，充分搅拌溶解后，向溶液中边搅拌边滴加碱液至沉淀产生，静置后滤去不溶物得肝素钠溶液；
[0028]b.调节a步骤所得的肝素钠溶液pH为5?6，并将肝素钠溶液降温至4°C，分3次加入总重量为粗品肝素钠1.2%的亚硝酸钠，每次加入1/3的亚硝酸钠，每次加入时要缓慢加入并充分搅拌2h后再次加入，最终得粗品低分子量肝素钠溶液；
[0029]②粗品低分子量肝素钠的纯化
[0030]c.将b步骤所得粗品低分子量肝素钠溶液用碱液调节pH为8?9，并加入为溶液质量5%的氯化钠，充分搅拌后采用阴离子交换柱吸附；
[0031]d.采用浓度为5%的氯化钠溶液洗涤，并采用浓度为20%的氯化钠溶液洗脱，将洗脱液经超滤膜过滤，所得滤液加入2倍的乙醇并充分搅拌，用于沉淀肝素钠，得沉淀物；
[0032]e.将沉淀物脱盐及脱水后，于40°C下抽真空干燥得纯化肝素钠；
[0033]f.将所得纯化肝素钠采用凝胶过滤，经杀菌消毒处理后得高纯度低分子量肝素钠。
[0034]进一步地，所述阴尚子交换柱为弱碱性尚子交换柱D315 ;所述碱液为NaOH溶液；所述超滤膜为5000D的超滤膜，可以滤去绝大部分分子量大于6000Da的肝素钠。
[0035]经测试按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在147IU/mg，平均分子量在2200?3000Da J^FIIa效价在2.0IU/mg，吸光度及各项药检、理化指标军达到中国药典标准。
[0036]实施例2:高纯度低分子量肝素钠的制备方法，包括以下步骤:
[0037]①粗品低分子量肝素钠的制备
[0038]a.将粗品肝素钠溶于生理盐水中，充分搅拌溶解后，向溶液中边搅拌边滴加碱液至沉淀产生，静置后滤去不溶物得肝素钠溶液；
[0039]b.调节a步骤所得的肝素钠溶液pH为5?6，并将肝素钠溶液降温至I°C，分3次加入总重量为粗品肝素钠1.2%的亚硝酸钠，每次加入1/3的亚硝酸钠，并充分搅拌3h后再行加入，最终得粗品低分子量肝素钠溶液；
[0040]②粗品低分子量肝素钠的纯化
[0041]c.将b步骤所得粗品低分子量肝素钠溶液用碱液调节pH为8?9，并加入为溶液质量4%的氯化钠，充分搅拌后采用阴离子交换柱吸附；
[0042]d.采用浓度为4%的氯化钠溶液洗涤，并采用浓度为25 %的氯化钠溶液洗脱，将洗脱液经超滤膜过滤，所得滤液加入2倍的乙醇并充分搅拌，用于沉淀肝素钠，得沉淀物；
[0043]e.将沉淀物脱盐及脱水后，于35°C下抽真空干燥得纯化肝素钠；
[0044]f.将所得纯化肝素钠采用凝胶过滤，经杀菌消毒处理后得高纯度低分子量肝素钠。
[0045]进一步地，所述阴尚子交换柱为弱碱性尚子交换柱D315 ;所述碱液为NaOH溶液；所述超滤膜为5000D的超滤膜，可以滤去绝大部分分子量大于6000Da的肝素钠。
[0046]经测试按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在142IU/mg，平均分子量在2200?3000Da J^FIIa效价在1.7IU/mg，吸光度及各项药检、理化指标军达到中国药典标准。
【主权项】
1.高纯度低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: ①粗品低分子量肝素钠的制备 a.将粗品肝素钠溶于生理盐水中，充分搅拌溶解后，向溶液中边搅拌边滴加碱液至沉淀产生，静置后滤去不溶物得肝素钠溶液； b.调节a步骤所得的肝素钠溶液pH为5~6，并将肝素钠溶液降温至1~8°C，分3次加入总重量为粗品肝素钠1.2%的亚硝酸钠，每次加入1/3的亚硝酸钠，并充分搅拌2~3h后再行加入，最终得粗品低分子量肝素钠溶液； ②粗品低分子量肝素钠的纯化 c.将b步骤所得粗品低分子量肝素钠溶液用碱液调节pH为8~9，并加入为溶液质量4-5%的氯化钠，充分搅拌后采用阴离子交换柱吸附； d.采用浓度为3~5%的氯化钠溶液洗涤，并采用浓度为15~25%的氯化钠溶液洗脱，将洗脱液经超滤膜过滤，所得滤液加入2倍的乙醇并充分搅拌，用于沉淀肝素钠，得沉淀物； e.将沉淀物脱盐及脱水后，于30~50°C下抽真空干燥得纯化肝素钠； f.将所得纯化肝素钠采用凝胶过滤，经杀菌消毒处理后得高纯度低分子量肝素钠。
2.根据权利要求1所述的高纯度低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于:步骤c中，所述阴1?子交换柱为弱碱性1?子交换柱D315。
3.根据权利要求1所述的高纯度低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于:步骤a和c中，所述碱液为NaOH溶液。
4.根据权利要求1所述的高纯度低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于:步骤d中，所述超滤膜为5000D的超滤膜。
5.根据权利要求1所述的高纯度低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于:按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在120?180IU/mg，平均分子量在2200?3000Da，抗FIIa效价在I?8IU/mgo
6.根据权利要求1所述的高纯度低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于:按照本制备方法制得的低分子肝素钠抗FXa效价在140?150IU/mg，平均分子量在2400?2600Da，抗FIIa效价在1.5?2IU/mgo
【专利摘要】本发明公开了一种高纯度低分子量肝素钠的制备方法，在一定条件下，通过粗品低分子量肝素钠的制备以及粗品低分子量肝素钠的纯化制得高纯度低分子量肝素钠。与现有技术相比，本发明的工艺简单，无废液排放，工艺条件环保；原料来源丰富，产品得率高，所得产品纯度高、质量稳定，成本低，无毒副作用，可进一步制备成注射剂、胶囊剂等。
【IPC分类】C08B37-10
【公开号】CN104829752
【申请号】CN201510271813
【发明人】王芃
【申请人】苏州鸿洋医药科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月26日