进行梯度洗脱，各洗脱物经减压干燥后分别得到4.3 g的20%乙醇溶液洗脱物、9.8 g的50%乙醇溶液洗脱物、3.6 g的75%乙醇溶液洗脱物及2.9 g的95%乙醇溶液洗脱物，即得核苷类目标组分。
[0022]其中:减压干燥条件是指真空度为0.06 MPa,温度为65 V。
[0023]所得黄绿蜜环菌子实体核苷类组分经二维制备色谱进一步分离纯化及NMR碳谱、氢谱分析，依次判定主要含有尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、次黄苷及腺苷及其他核苷类化合物。
[0024]实施例2 —种黄绿蜜环菌子实体核苷类组分的前处理方法，包括以下步骤: ⑴提取:黄绿蜜环菌子实体粉碎后，按0.5kg:4 L的料液比加入分析纯水，在60°C下提取I h后过滤，重复2次，合并得到滤液A ;该滤液A经减压干燥至膏状，获得黄绿蜜环菌子实体水提物。
[0025]其中:减压干燥条件是指真空度为0.09 MPa,温度为50 V。
[0026]⑵醇沉:黄绿蜜环菌子实体水提物中加入其质量的5倍的水进行溶解，然后加入黄绿蜜环菌子实体水提物质量的5倍的体积分数为90%的乙醇溶液醇沉，过滤，重复2次，合并得到滤液B ;该滤液B经减压干燥得35.2 g棕黄色浸膏。
[0027]其中:减压干燥条件是指真空度为0.09 MPa,温度为50 V。
[0028]⑶树脂柱色谱富集:棕黄色浸膏中加入其质量的2倍的体积分数为20%的乙醇溶液溶解，并经HP20SS型树脂柱进行分离后，分别以水溶液、体积分数为的20%乙醇溶液、体积分数为50%的乙醇溶液、体积分数为75%的乙醇溶液、体积分数为95%的乙醇溶液按5倍的柱体积进行梯度洗脱，各洗脱物经减压干燥后分别得到1.8 g的20%乙醇溶液洗脱物、4.3 g的50%乙醇溶液洗脱物、1.6 g的75%乙醇溶液洗脱物及1.3 g的95%乙醇溶液洗脱物，即得核苷类目标组分。
[0029]其中:减压干燥条件是指真空度为0.09 MPa,温度为50 V。
[0030]所得黄绿蜜环菌子实体核苷类组分经二维制备色谱进一步分离纯化及NMR碳谱、氢谱分析，依次判定主要含有尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、次黄苷及腺苷及其他核苷类化合物。
[0031]实施例3 —种黄绿蜜环菌子实体核苷类组分的前处理方法，包括以下步骤: ⑴提取:黄绿蜜环菌子实体粉碎后，按2kg:12 L的料液比加入分析纯水，在80°C下提取2 h后过滤，重复I次，合并得到滤液A ;该滤液A经减压干燥至膏状，获得黄绿蜜环菌子实体水提物。
[0032]其中:减压干燥条件是指真空度为0.08 MPa,温度为55 V。
[0033]⑵醇沉:黄绿蜜环菌子实体水提物中加入其质量的3倍的水进行溶解，然后加入黄绿蜜环菌子实体水提物质量的8倍的体积分数为75%的乙醇溶液醇沉，过滤，重复I次，合并得到滤液B ;该滤液B经减压干燥得128.0 g棕黄色浸膏。
[0034]其中:减压干燥条件是指真空度为0.08 MPa,温度为55 V。
[0035]⑶树脂柱色谱富集:棕黄色浸膏中加入其质量的3倍的体积分数为15%的乙醇溶液溶解，并经MCI型树脂柱进行分离后，分别以水溶液、体积分数为的20%乙醇溶液、体积分数为50%的乙醇溶液、体积分数为75%的乙醇溶液、体积分数为95%的乙醇溶液按4倍的柱体积进行梯度洗脱，各洗脱物经减压干燥后分别得到6.8 g的20%乙醇溶液洗脱物、16.2 g的50%乙醇溶液洗脱物、5.7 g的75%乙醇溶液洗脱物及4.7 g的95%乙醇溶液洗脱物，即得核苷类目标组分。
[0036]其中:减压干燥条件是指真空度为0.08 MPa,温度为55 V。
[0037]所得黄绿蜜环菌子实体核苷类组分经二维制备色谱进一步分离纯化及NMR碳谱、氢谱分析，依次判定主要含有尿嘧啶核苷、鸟嘌呤核苷、次黄苷及腺苷及其他核苷类化合物。
【主权项】
1.一种黄绿蜜环菌子实体核苷类组分的前处理方法，包括以下步骤: ⑴提取:黄绿蜜环菌子实体粉碎后，按Ikg:4~8L的料液比加入分析纯水，在600C ~95°C下提取1~3 h后过滤，重复1~3次，合并得到滤液A ;该滤液A经减压干燥至膏状，获得黄绿蜜环菌子实体水提物； ⑵醇沉:所述黄绿蜜环菌子实体水提物中加入其质量的2~5倍的水进行溶解，然后加入所述黄绿蜜环菌子实体水提物质量的5~10倍的体积分数为60°/『95%的乙醇溶液醇沉，过滤，重复1~3次，合并得到滤液B ;该滤液B经减压干燥得棕黄色浸膏； ⑶树脂柱色谱富集:所述棕黄色浸膏中加入其质量的2~5倍的体积分数为5~20%的乙醇溶液溶解，并经树脂柱进行分离后，分别以水溶液、体积分数为的20%乙醇溶液、体积分数为50%的乙醇溶液、体积分数为75%的乙醇溶液、体积分数为95%的乙醇溶液按2~5倍的柱体积进行梯度洗脱，各洗脱物经减压干燥后分别得到20%乙醇溶液洗脱物、50%乙醇溶液洗脱物、75%乙醇溶液洗脱物及95%乙醇溶液洗脱物，即得核苷类目标组分。
2.如权利要求1所述的一种黄绿蜜环菌子实体核苷类组分的前处理方法，其特征在于:所述步骤⑴和所述步骤⑵及所述步骤⑶中的减压干燥条件是指真空度为0.06-0.09MPa，温度为 50~65 °C。
3.如权利要求1所述的一种黄绿蜜环菌子实体核苷类组分的前处理方法，其特征在于:所述步骤⑶中的树脂柱是指HP20型树脂柱、HP20SS型树脂柱或MCI型树脂柱中的一种。
【专利摘要】本发明涉及一种黄绿蜜环菌子实体核苷类组分的前处理方法，该方法包括以下步骤：⑴提取：黄绿蜜环菌子实体粉碎后加入分析纯水进行提取，经过滤、减压干燥至膏状，获得黄绿蜜环菌子实体水提物；⑵醇沉：黄绿蜜环菌子实体水提物中加入水进行溶解，然后进行醇沉、过滤、减压干燥得棕黄色浸膏；⑶树脂柱色谱富集：棕黄色浸膏中加入乙醇溶液溶解，并经树脂柱分离，分别以水溶液、乙醇溶液进行梯度洗脱，各洗脱物经减压干燥后分别得到20%乙醇溶液洗脱物、50%乙醇溶液洗脱物、75%乙醇溶液洗脱物及95%乙醇溶液洗脱物，即得核苷类目标组分。本发明工艺简单、易规模化实施、重复性、质量稳定可控。
【IPC分类】C07H1-08, C07H19-067, A61P39-06, C07H19-167, A61K36-07
【公开号】CN104844664
【申请号】CN201510295172
【发明人】王启兰, 党军, 张莉, 梅丽娟, 邵赟, 陶燕铎, 于瑞涛, 文怀秀
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月2日