一种从白柳皮提取水杨苷的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种从白柳皮提取高纯度水杨苷的制备方法。
【背景技术】
[0002] 白柳皮是杨柳科植物白柳Salix alba L.的树皮，使用历史悠久，主要用于消炎、 镇痛、退烧。后经科学研宄，白柳皮中所含水杨苷成分是其抗炎症和减轻疼痛能力的效果 来源，因此，水杨苷进入了大家的视野范围。水杨苷，又称水杨甙，分子式为C 13H18O7,分子量 286. 28,为白色结晶，可溶于水，易溶于沸水，难溶于乙醇，不溶于醚或氯仿，但能溶于碱溶 液、吡啶或冰醋酸中，具有解热、镇痛、抗风湿、抗炎的作用。最新研宄还发现，水杨苷作为一 种氧化酶抑制剂，可以促进皮肤的新陈代谢、增加皮肤光泽度及弹性，减少色素沉淀，还有 报道称，富含水杨苷的植物提取物具有减肥降脂的效果，因此，富含水杨苷的天然植物提取 物可应用于药品、保健品、化妆品等领域，具有广阔的市场前景。
[0003] 目前，水杨苷通常是从柳皮、柳枝中提取得到，现有的提取方法很多，一般需要将 原料与生石灰搅拌后，再经溶剂提取，得到提取物。例如CN 102731587B公开了一种从白柳 皮中提取水杨甙的方法，采取了白柳枝皮与生石灰混拌后，80-95%乙醇超声波萃取，提取液 经减压浓缩后上大孔吸附树脂柱，再用60-80%乙醇解析，得到水杨甙解析液，经两次结晶 后，得到纯度在95%以上的水杨甙成品。也有人提出，用生石灰混拌不利于生产操作，因而 提出了不需生石灰的制备方法，如CN 102558254B公开了一种以柳皮或柳枝为原料提取高 纯度水杨苷的方法，包括直接水或醇溶液提取，超滤，滤液经吸附树脂吸附分离，上多氨基 弱碱性离子交换树脂脱色，再加入活性炭或壳聚糖脱色，过滤，降温冷却结晶，得到纯度为 99%的水杨苷提取物。此外，还有人利用二氧化碳超临界萃取法(如CN 104231014A)、复合 酶解法(如CN 102453061B)来提取水杨苷。但是，上述各种方法都存在各自的优缺点，生石 灰法不利于生产车间内粉末控制但工艺简单性价比高，二氧化碳超临界萃取法提取效率高 但成本过高，二次结晶法需要耗费大量溶剂但纯度有限等。
[0004] 因此，本申请的发明人为了提出一种收率高、成本低、且溶剂可循环利用，降低环 境污染，易于产业化的方法，进行了深入研宄，进而获得本发明。
【发明内容】
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供了一种从白柳皮中提取水杨苷的方法，包括如下 步骤： (1) 取原料，切成或粉碎成l-2cm小段，紫外线照射30-50分钟； (2) 向灭酶后的原料中加入5-10倍水，加入3-8重量％食盐，常温浸泡1-2小时，过滤， 得浸润后的原料； (3) 向浸润后的原料中加入原料重量1. 5-2倍的水，加入纤维素酶：碱性蛋白酶的复合 酶（1:2)，复合酶用量为原料的0. 5-2重量％，在20-40°C下酶解l_3h，每隔15分钟超声处 理酶解液15分钟，超声频率为40-80KHZ，超声功率为200-300W，得酶解液； (4) 酶解液经浓缩后，通过聚酰胺层析柱，上样量与聚酰胺比为I : 5~I : 25,树脂 柱径高比为1 : 4~1 : 15,用乙醇水溶液梯度洗脱，收集40-70%乙醇溶液部分，减压回收 乙醇并浓缩至无醇味水溶液； (5) 水溶液浓缩后，通过中性氧化铝柱，树脂柱径高比为1 : 4~1 : 15,分别用1-3 倍柱体积水、1-2倍柱体积95%乙醇溶液洗脱除杂，用6-10倍柱体积的0. 3-0. 8%冰醋酸水 溶液洗脱，收集洗脱液，挥去冰醋酸后，微波真空干燥，得产品。
[0006] 优选的，微波真空干燥温度：20-80°C，回差温度l-5°c，真空度-0. 07Mpa以上，微 波功率1-100KW，干燥10-200分钟。
[0007] 优选的，微波真空干燥温度：40-60°C，回差温度2-4°C，真空度-0. 07Mpa以上，微 波功率10-80KW，干燥100-150分钟。
[0008] 本发明通过对白柳皮的灭菌、浸润、酶解提取、分离、干燥的工艺，得到了富含水杨 苷的产品：经过系统的筛选和优化，首先确定了酶解提取的步骤，由于酶解前要减少干扰， 因此，在酶解前确定了预先杀灭材料自身所含酶以及经浸润步骤除去杂质和增大表面积的 步骤，又由于酶解后白柳皮的大部分成分都被溶出，为了获得更高浓度的水杨苷，确定了聚 酰胺柱和中性氧化铝柱的两次层析分离，并经微波干燥，得到了适应工业化生产的水杨苷 最佳提取工艺。
[0009] 与现有技术相比，本发明创造性地采用了酶解前灭酶和食盐水浸泡的工艺，并通 过系统筛选确定酶解反应的酶种类，并经过两次柱层析分离，微波干燥后，得到水杨苷含量 超过95%的白柳皮提取物。整个方法无需使用生石灰，且所用材料均为常规材料，成本低且 收率高、且溶剂可循环利用，能降低环境污染，易于产业化。
[0010] 本发明还提供了上述制备方法制得的白柳皮提取物。
[0011] 以下将详细介绍本发明的研发过程。
[0012] 一、酶解工艺的研宄 实验材料：灭菌后的白柳皮粉末，纤维素酶、碱性蛋白酶、果胶酶、淀粉酶、脂肪酶、溶菌 酶 实验方法：取灭菌后的白柳皮粉末，加入原料重量1. 5-2倍的水，并加入1%的酶，超声 处理。测定酶解后的上清液中水杨苷的含量，实验结果见表一。
[0013] 表一酶的筛选
【主权项】
1. 一种从白柳皮中提取水杨苷的方法，包括如下步骤： (1) 取原料，切成或粉碎成l-2cm小段，紫外线照射30-50分钟； (2) 向灭酶后的原料中加入5-10倍水，加入3-8重量％食盐，常温浸泡1-2小时，过滤， 得浸润后的原料； (3) 向浸润后的原料中加入原料重量1. 5-2倍的水，加入纤维素酶：碱性蛋白酶的复合 酶（1:2)，复合酶用量为原料的0. 5-2重量％，在20-40°C下酶解l_3h，每隔15分钟超声处 理酶解液15分钟，超声频率为40-80KHZ，超声功率为200-300W，得酶解液； (4) 酶解液经浓缩后，通过聚酰胺层析柱，上样量与聚酰胺比为1 : 5~1 : 25,树脂 柱径高比为1 : 4~1 : 15,用乙醇水溶液梯度洗脱，收集40-70%乙醇溶液部分，减压回收 乙醇并浓缩至无醇味水溶液； (5) 水溶液浓缩后，通过中性氧化铝柱，树脂柱径高比为1 : 4~1 : 15,分别用1-3 倍柱体积水、1-2倍柱体积95%乙醇溶液洗脱除杂，用6-10倍柱体积的0. 3-0. 8%冰醋酸水 溶液洗脱，收集洗脱液，挥去冰醋酸后，微波真空干燥，得产品。
2. 优选的，微波真空干燥温度：20-80°C，回差温度1_5°C，真空度-0. 07Mpa以上，微波 功率1-100KW，干燥10-200分钟。
3. 优选的，微波真空干燥温度：40-60°C，回差温度2-4°C，真空度-0. 07Mpa以上，微波 功率10-80KW，干燥100-150分钟。
4. 上述方法制得的富含水杨苷的提取物。
【专利摘要】本发明涉及从白柳皮中提取水杨苷的方法，采用灭菌、浸润、酶解提取、分离、干燥的工艺，得到了富含水杨苷的产品。本发明创造性地采用了酶解前灭酶和食盐水浸泡的工艺，并通过系统筛选确定酶解反应的酶种类，并经过两次柱层析分离，微波干燥后，得到水杨苷含量超过95%的白柳皮提取物。整个方法无需使用生石灰，且所用材料均为常规材料，成本低且收率高、且溶剂可循环利用，能降低环境污染，易于产业化。
【IPC分类】C07H1-08, C07H15-203
【公开号】CN104861013
【申请号】CN201510323978
【发明人】高瑞, 白易, 白莲婷, 赵永强, 张成亮
【申请人】白心亮
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年6月15日