度如表所示：
[0038]
[0039] 采集14. 6min-16. 6min的流出液，葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩后得到 白色固体参比化合物E (Rr11. 20)。
[0040] 本发明的另一个目的在于提供磺达肝癸钠的相关参比化合物在检测磺达肝癸钠 质量中的应用。
[0041] 本发明所述的检测方法，采用高效液相色谱法测定，
[0042] 具体为，用以季铵阴离子薄壳树脂为填充剂的聚合阴离子交换柱（预柱=Dionex CarboPac? PA l，4X50mm;色谱柱Dionex CarboPac? PA l，4X250mm)。流动相：以二甲亚 砜-水为流动相AQOOOml超纯水中加入约10 μ L二甲亚砜，0. 22 μm滤膜过滤），以116. 9g/ L氯化钠溶液为流动相B，流速为1.0 ml/min，检测波长为210nm，柱温为35°C，按下表进行梯 度洗脱。
[0043]
[0044] 本发明所涉及的磺达肝癸钠参比化合物，这些参比化合物可以作为分析磺达肝癸 钠杂质时的对照品，为磺达肝癸钠的质量研宄、质量控制和安全性研宄提供基础，从而提高 磺达肝癸钠的质量标准，为磺达肝癸钠的临床用药提供重要的指导意义。 此外，我们将进一步对这些未知杂质进行药理学和毒理学的研宄，寻找其潜在的药理 方面的作用。从长远角度看，这些未知杂质还有更高的的研宄价值。
【附图说明】
[0045] 图1 :色谱检测结果
【具体实施方式】
[0046] 通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明，但不作为本发明的限制。
[0047] 实施例1参比化合物A (RrtO. 45):
[0048] 准确称取磺达肝癸钠纯品I. 5g于500ml圆底烧瓶中，再向其中加入300ml Imol/ L的HCl水溶液，油浴40°C，搅拌18h后会产生酸降解参比化合物A (RrtO. 45)。加入lmol/ L的NaOH调节PH至碱性，葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩至干，得参比化合物A粗 品。
[0049] 称取参比化合物A(RrtO. 45)粗品，用纯化水溶解，采用高效制备液相色谱仪，选 择强碱型阴离子交换色谱柱DIONEX CarboPac TMPAl (250 X 9mm)，少量多次地进行上样分 离，流速为5. Oml/min，紫外波长为210nm，流动相A、B进行梯度洗脱（流动相A :117g/L氯 化钠水溶液，流动相B :注射用水），梯度如表所示：
[0050]
[0052] 采集8. Omin-11. 3min的流出液，葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩后得到白 色固体参比化合物A (Rrt045)。
[0053] 参比化合物A (RrtO. 45)氢谱与碳谱数据
[0054]
[0055] 参比化合物A (RrtO. 45)高分辨质谱数据
[0056]
[0058] 从氢谱与碳谱来看，参比化合物A(RRT0. 45)与磺达肝癸钠相比，F环的化学位移 变化最大，所以推断F环上2位磺酰基掉了。结合质谱，应该是掉了两个磺酰基。我们推断 是D环上2位磺酰基掉了。理由是：参比化合物A(RRTO. 45)是由酸降解得到的，所以氨基 上的磺酰基是最容易被打掉。从立体构型上来看，如果是H环2位上磺酰基掉的话，对H环 的化学位移影响会比较大，所以推断是D环上2位磺酰基掉。另外G环上氢谱变化不大，但 碳谱化学位移变化较大，推断是由于G环为艾杜糖，其立体构型可以在船式与椅式间互换， 空间构型的变化引起了 G环上碳化学位移的变化。通过高分辨质谱（ESI负离子）检测，推 断该化合物的精确分子量为：1522. 8933,分子式为C31H45N3Na8O 43S6,结构式如下：
[0059]
[0060] 实施例2参比化合物B (RrtO. 54):
[0061] 准确称取磺达肝癸钠纯品I. 5g、NaCl 2. 5g，于500ml钠钙玻璃瓶中，再向其中加 入300ml纯化水，用铝塑组合盖密封，烘箱中130°C加热2. 5h后会产生高温破坏参比化合物 B (RrtO. 54)。经葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩至干，得参比化合物B粗品。
[0062] 称取参比化合物B(RrtO. 54)粗品，用纯化水溶解，采用高效制备液相色谱仪，制 备条件和分离步骤如实施例1中所示，即得到白色固体参比化合物B(RrtO. 54)。
[0063] 参比化合物B (RrtO. 54)氢谱与碳谱数据
[0064]
[0066] 参比化合物B (RrtO. 54)高分辨质谱数据
[0067]
[0068] 氢谱中甲氧基的氢还在，只出现了 5. 47, 5. 00两个异头碳，推断是从F糖与G糖之 间的键断裂。在化学位移5. 94处出现了明显的烯烃氢，G糖5位氢消失，可以推断G换上 4, 5位形成了双键。碳谱中G糖4位碳与5位碳明显移向低场，在不饱和键位置出峰，也可 以确证是在4, 5位形成双键。通过高分辨质谱（ESI负离子）检测，该化合物的精确分子量 为：678. 9148分子式为C13H17NNa4O19S 3，结构式如下：
[0069]
[0070] 实施例3参比化合物C (RrtO. 77):
[0071] 准确称取磺达肝癸钠纯品LOg于500ml圆底烧瓶中，再向其中加入200ml lmol/L 的HCl水溶液，室温（20°C )搅拌65h后会产生酸降解参比化合物C(RrtO. 77)。加入lmol/ L的NaOH调节PH至碱性，葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩至干，得参比化合物C粗 品。
[0072] 称取参比化合物C(RrtO. 77)粗品，用纯化水溶解，采用高效制备液相色谱仪，制 备条件和分离步骤如实施例1中所示，即得到白色固体参比化合物C(RrtO. 77)。
[0073] 参比化合物C (RrtO. 77)氢谱与碳谱数据
[0074]
[0076] 参比化合物C (RrtO. 77)高分辨质谱数据
[0077]
[0078] 由氢谱可以看出，与磺达肝癸钠相比，只有F环上的氢的化学位移发生了明显的 变化，其他位置变化不明显。从碳谱看出，F环上碳的化学位移变化很大，其它环也是不明 显。结合质谱所推断分子式，可以判断是F环上2位上的磺酰基掉了。从立体构型上来看， 磺酰基掉了之后，对F换上的电子环境影响较大，使得F环的碳化学位移发生了非常明显的 变化。通过高分辨质谱（ESI正离子、负离子）检测，该化合物的精确分子量为：1624. 8320， 分子式为C31H44N3Na9O 46S7，结构式如下：
[0079]
[0080] 实施例4参比化合物D (RrtO. 93):
[0081] 在液相制备分离磺达肝癸钠时，将其分成三个组分："前杂"、"主峰"和"后杂"，工 艺参比化合物D存在于"前杂"组分中。经葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩至干，得 参比化合物D粗品。
[0082] 称取参比化合物D(RrtO. 93)粗品，用纯化水溶解，采用高效制备液相色谱仪，制 备条件和分离步骤如实施例1中所示，即得到白色固体参比化合物D(RrtO. 93)。
[0083] 参比化合物D (RrtO. 93)氢谱与碳谱数据
[0084]
[0085] 参比化合物D (RrtO. 93)高分辨质谱检测数据
[0086]
[0087] 碳谱中，在167. 33处出现了羰基碳的峰，同时D糖2位C由60. 59移向高场54. 74， 其他位置的碳没有明显的变化，说明只有D环C2上取代基发生了明显的变化。另外，DEPT 谱上也出现了 CHO上的C，证明羰基碳非季碳。综上所述可以确定在D糖上2位取代基变为 了甲酰氨基。通过氢谱可以看出，与磺达肝癸钠相比，在8. 17处出现明显的CHO基氢，由于 D糖2位取代基由NHSO3Na变为NHCH0,受电子效应与空间效应的影响，D糖2位氢化学位移 移向低场由3. 25到3. 58,同时D糖1位氢也有微弱影响，由5. 59移向高场5. 44。这与碳 谱的推断相符。通过高分辨质谱（ESI正离子、负离子）检测，推断该化合物的精确分子量 为：1652. 8269,分子式为C32H44N3Na9O 47S7，结构式如下：
[0088]
[0089] 实施例5参比化合物E (Rr11. 20):
[0090] 在液相制备分离磺达肝癸钠时，将其分成三个组分："前杂"、"主峰"和"后杂"，工 艺参比化合物E存在于"后杂"组分中。经葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，减压浓缩至干，得 参比化合物E粗品。
[0091] 称取参比化合物E(Rrt