用于水体、土壤、大气等环境样品和电子 产品、纺织印染品、建筑装潢等产品中痕量溴代阻燃剂三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯的检 测。
[0036] 由于三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯是小分子物质，只具有反应原性而没有免疫 原性，而且该分子上没有能与蛋白质分子直接结合的氨基、仲氨基等官能团，故本发明通过 选择2, 4, 6-三（烯丙氧基）-1，3, 5-三嗪为原料，经两步反应制备带有仲氨基活性基团的 TBC半抗原，然后用戊二醛法将这个含氨基的半抗原与蛋白质分子偶联制备人工免疫原，在 将制备的免疫原对新西兰大白兔免疫，得到高特异性的抗三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯 多克隆抗体，此抗体将用于建立针对三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯的免疫分析方法。
[0037] 与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
[0038] (1)抗原实用性强：三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯抗原制备和抗体制备具有重 要的实用价值和现实意义。利用本专利中的方法，首次成功制备了三（2, 3-二溴丙基）异 氰脲酸酯人工免疫原TBC-BSA。该人工免疫原保留了三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯的结 构，具有针对三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯的抗原决定簇，为制备特异性好、效价高的抗 体和建立免疫PCR方法提供了保障。
[0039] (2)抗原稳定性好：此法合成的三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工抗原具有较 好的稳定性，在0-4°C环境下可保存9个月不变性，-20°C环境下可保存3年。
[0040] (3)抗原制备技术简便可行：抗原的整个制备过程无需特别的仪器设备，成本低 廉，容易工业化规模生产。
【附图说明】
[0041] 通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、 目的和优点将会变得更明显：
[0042] 图1为三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原红外光谱；
[0043] 图2为三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原的核磁共振谱图；
[0044] 图3为三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原、载体蛋白和人工免疫原紫外吸收 光谱图；
[0045] 图4为免疫新西兰大白兔产生的抗TBC抗体效价的变化；
[0046] 图5为直接竞争法检测三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯免疫PCR方法的扩增曲 线；
[0047] 图6为直接竞争免疫PCR方法检测三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯的标准工作曲 线；
[0048] 其中：实线为浓度对数为_2~1的标准曲线；虚线为浓度对数为-4~2的标准曲 线。
【具体实施方式】
[0049] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明 的保护范围。
[0050] 实施例1三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸醅半抗原的合成与鉴宙
[0051] (1)三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原的合成
[0052] 原料2, 4, 6-三（烯丙氧基）_1，3, 5-三嗪、水、二水合氯化铜的摩尔比为1:1:45， 溶于甲苯后加入到圆底烧瓶中，95~KKTC加热回流，薄板层析法（展开剂，正己烷：乙酸 乙酯=5:1 (v:v))检测到原料点消失为止，自然冷却至室温后将反应液转移至旋转蒸发仪 中减压蒸馏除去溶剂；随后用二氯甲烷和石油醚的混合液= 2:1)重结晶，抽滤后得 到浅绿色粉末状固体；固体用稀盐酸重复洗涤绿色固体直至颜色变为白色，再用蒸馏水洗 涤至近中性，加压烘干后取0. 5g溶于20mL二氯甲烷中，加热状态下逐滴加入120 y L液溴， 保持回流反应，薄板层析法（展开剂，正己烷：乙酸乙酯=5:l(v:v))监测反应直至反应完 全；冷却至室温后向反应体系中加入饱和似23203溶液直至反应体系液红色消失，用lOOmL 水和150mL(50mLX3次）二氯甲烷重复萃取反应液，分离并保留有机相，并用饱和氯化钠溶 液多次洗涤以去除杂质，再用无水硫酸钠干燥有机相以除去多余的水分，粗品用乙酸乙酯/ 正己烷（v:v = 1:1)重结晶得针状结晶体即TBC半抗原，产率47. 1% ;恪点：128-131°C。
[0053] (2)三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原的鉴定
[0054] 将制得的半抗原进行红外光谱和核磁共振表征。
[0055] 取上述合成的三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原少许，用溴化钾压片后 作红外光谱扫描，如图1所示，结果如下：IR(KBr) [v (cm1)] :1671.98(C = 0伸缩）， 1430.92(0-11面内弯曲）；3320.82(肿胺^伸缩），1295.93、1315.21((：4芳香伸缩） ； 2989. 12(C-H 伸缩），1648. 84 ~1432. 85(C = C 苯环骨架振动），910 ~665(C-H 面外弯 曲），621. 08(C-Br伸缩）。TBC半抗原分子的红外光谱中有明显的-C00H、-NH、苯环、C-Br 等基团特征吸收峰，证明了反应中成功将仲氨基连接到TBC分子结构中。
[0056] 取三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯半抗原少许，用⑶CU容解，浓度范 围大致为10-20mg/0. 5mL。如图2的核磁共振图所示，检测结果为4 NMR(⑶Cl3) S (ppm) :9. 22(1HN-H)，4. 42(1H R-CH-Br)，3. 77、3. 88(2H-CH2-Br)，1. 44、1. 28(2H-CH2_)。
[0057] 从以上红外、核磁表征结果分析可知，所合成的产物为目标物。
[0058] 实施例2三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸醅人工免痔原的合成
[0059] (1)三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工免疫原的合成
[0060] 0?lmmol TBC半抗原溶于lmLN, N-二甲基甲酰胺中，120mg BSA溶于10mL PBS中； 〇°C低温磁力搅拌下，逐滴将TBC半抗原溶液滴入BSA溶液中，滴加结束后向反应体系中加 入120 y L 25 %戊二醛，使TBC半抗原、戊二醛、BSA的摩尔比为1:30:0. 005,继续低温搅拌 18小时；反应结束后，低温离心分离上清液，将上清液装入透析袋中，用PBS透析3天，每天 换水3次，离心分离沉淀后得三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工免疫原TBC-BSA。经紫 外-可见分光光度计鉴定后，小量分装，_20°C冷冻保存。
[0061] 实施例3三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸醅人工免痔原的合成
[0062] (1)三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工免疫原的合成
[0063] 0?lmmol TBC半抗原溶于lmLN, N-二甲基甲酰胺中，240mg BSA溶于10mL PBS中； 2°C低温磁力搅拌下，逐滴将TBC半抗原溶液滴入BSA溶液中，滴加结束后向反应体系中加 入160yL 25%戊二醛，使TBC半抗原、戊二醛、BSA的摩尔比为1:40:0.01，继续低温搅拌 20小时；反应结束后，低温离心分离上清液，将上清液装入透析袋中，用PBS透析3天，每天 换水3次，离心分离沉淀后得三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工免疫原TBC-BSA。经紫 外-可见分光光度计鉴定后，小量分装，_20°C冷冻保存。
[0064] 实施例4三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸醅人工免痔原的合成
[0065] (1)三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工免疫原的合成
[0066] 0? lmmol TBC半抗原溶于lmLN，N-二甲基甲酰胺中，1200mg BSA溶于10mL PBS中； 3°C低温磁力搅拌下，逐滴将TBC半抗原溶液滴入BSA溶液中，滴加结束后向反应体系中加 入200 yL 25 %戊二醛，使TBC半抗原、戊二醛、BSA的摩尔比为1:50:0. 05,继续低温搅拌 24小时；反应结束后，低温离心分离上清液，将上清液装入透析袋中，用PBS透析3天，每天 换水3次，离心分离沉淀后得三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸酯人工免疫原TBC-BSA。经紫 外-可见分光光度计鉴定后，小量分装，-20°C冷冻保存。
[0067] 实施例5三（2, 3-二溴丙基）异氰脲酸醅人工免痔原的鉴宙
[0068] 可进行人工免疫原鉴定的方法有色谱法、红外光谱法、紫外光谱法、SDS-PAGE凝胶 电泳等。其中最常用的方法是紫外可见光谱法。一般来说，只要人工免疫原的紫外-可见 光谱与载蛋白和半抗原的紫外光谱不同，即可间接说明半抗原成功与蛋白质偶联，人工免 疫原合成成功。因为根据朗伯-比尔定律，当波长一定时，混合物的紫外吸收具有加合性。 采用全波长紫外分光光度计对半抗原、载体蛋白和人工免疫原进行扫描，根据特征吸收峰 的位置确定偶联是否成功。元素分析结果进一步证明了产物的结构和所设计的路线一致。
[0069] 由图3的紫外光谱图可知，TBC半抗原在281nm处有特征吸收峰，载体蛋白BSA在 227、278nm处有特征吸收峰，而人工免疫原TBC-BSA在256处有特征吸收峰，且偶联物具有 TB