改进的伤口愈合组合物和治疗的制作方法
【专利说明】改进的伤口愈合组合物和治疗
[0001]序列表
[0002]本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交并由此以其全部内容通过引用结合于此。所述ASCII副本，创建于2014年6月17日，命名为E3697_00329_SL.txt并且大小1，925个字节。
技术领域
[0003]本发明涉及识别和治疗按预期的速率不愈的难愈性慢性伤口的方法，以及剂量方案和含有适用于治疗那些伤口的间隙连接调节剂的制造制品。
【背景技术】
[0004]以下包括可以用于理解本发明的信息。这并非承认本文所提供的任何信息是目前描述或要求保护的发明的现有技术，或是与其相关的，或者承认专门或隐含参考的任何公开或文件是现有技术。
[0005]在人和其他哺乳动物中，伤口损伤触发细胞和生化事件的组织化复杂级联，这在大多数情况下会使得伤口愈合。理想愈合的伤口是在细胞、组织、器官和生物体水平上恢复正常解剖结构、功能和外观。伤口愈合，与是由外伤、微生物或是异物所致无关，会经由包括许多重叠阶段的复杂过程而进展，包括发炎、上皮形成、血管生成和基质沉积。通常情况下，这些过程会导致成熟伤口和一定程度的瘢痕形成。虽然发炎和修复大多沿着规定的过程发生，但这个过程的敏感性取决于各种伤口愈合调节因子的平衡，包括例如调节性细胞因子和生长因子的复杂网络。
[0006]间隙连接是促进直接细胞间通信的细胞膜结构。间隙连接通道由两个连接子(半通道)组成，每一个由六个连接蛋白亚单位组成。每个六聚体连接子与在相对的膜中连接子对接(dock)而形成单间隙连接。据报道间隙连接通道发现于整个身体中。
[0007]连接蛋白为蛋白家族，通常根据其分子量命名或基于系统发生分类成α，β和γ亚类。已确定至少20种人类和19种小鼠的同种型。据报道不同组织和细胞类型具有特征的连接蛋白表达的模式。
[0008]反义技术已经报道用于调节涉及病毒、真菌和代谢性疾病的基因的表达。参见例如美国专利号5，166，195,5,004,810ο反义技术也已经开发用于调节连接蛋白和治疗伤口。参见例如美国专利号 7,098，190、7，879，811、7，902、164、7，919，474、8，034，789、8，059，486,8, 063，023,8, 181，580和8，314，074。间隙连接和半通道的肽抑制剂也有报道。参见例如W02006/134494，公开的美国专利申请出版号20100279921。
[0009]尽管在伤口愈合过程所经历的原理的理解上取得了进展，但在慢性伤口护理的合适治疗选项上仍然存在显著未满足的需要。这些发明解决这个持续的需求。
【发明内容】
[0010]在本文中描述并要求保护的本发明具有许多属性和实施方式，包括但不限于，在本
【发明内容】
部分中阐述或描述或引用的那些，其并不旨在是包容一切的。在本文中描述并要求保护的本发明并不限于或受限于本
【发明内容】
部分中确定的所述特性或实施方式，将其包括在内目的仅仅在于概述举例说明而非进行限制。
[0011]本公开涉及识别和治疗难愈性慢性伤口的方法，以及剂量方案和适用于治疗那些伤口的制造制品。含有制造制品、并适用于本文中公开的方法的药物组合物含有连接蛋白26、连接蛋白30和/或连接蛋白43，以及本文中公开的其他连接蛋白的有效剂量的抗连接蛋白多核苷酸(例如，连接蛋白反义寡脱氧核苷酸，如单链抗连接蛋白寡脱氧核苷酸)。
[0012]正如本文中所用，在本发明的一个实施方式中，并举例而言，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内例如，在二至四周内使用加压包扎或减压设备，在尺寸方面不降低超过约30%(+30% )，并且在伤口尺寸方面其不增加超过15% (-15% )。这种标准护理治疗期也可以称之为〃磨合(run-1n)〃或〃预处理〃期。伤口尺寸的增加或减少可以统称为“表面面积减少”(也称为“SAR”)。在磨合期内SAR范围例如-15%至+30%，可以称为磨合期SAR范围。一旦出现针对治疗的慢性伤口，提供标准护理持续二至四周的一段时间。出现之后(upon presentat1n)和在磨合期结束时的伤口尺寸的估计和/或正式测量被用于通过评估它是否随着指定的SAR磨合期范围下降以确定伤口是否对于标准护理治疗是难愈性的。在一些方面中例如磨合期内的标准护理是多层加压包扎(compress1n bandaging)。在其他方面中，标准护理例如是减压(off-loading)。在一些实施方式中，磨合期内的标准护理治疗是单层加压包扎，或压缩绷带包扎(stocking)。加压包扎通常约每周一次更换或重新应用。在其他的实施方式中，磨合期内的标准护理治疗是减少压力，或减压。足压力、震动、和剪切可以随着经适当和适的鞋、鞋垫、和袜子降低。使用轮椅或拐杖的总非重支承是另一种有效的缓解压力方法。其他的减压标准护理方式包括全接触石膏，去除石膏和可去除石膏助行架。
[0013]在其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内在二至四周内使用加压包扎在尺寸方面不降低超过约30% (+30% )。
[0014]在还有的其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用加压包扎在尺寸方面不降低超过约35% (+35% )其在伤口尺寸方面不增加超过15% (-15% )。
[0015]在进一步实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用二至四周加压包扎在尺寸方面增加或降低不超过约-5% /+30%、-10% /+30%、-15% /+30%、-20% /+30%^25%/+30% 或-30% /+30%。
[0016]令人惊讶的是，据观察，难愈性慢性伤口易感于给予这样的药物组合物:其含有适合于局部给予的药用载体和例如约0.5mg/mL至约40mg/mL、或举其他实例而言约I至30mg/mL的抗连接蛋白26、抗连接蛋白30或抗连接蛋白43的多核苷酸。
[0017]因此，在一个方面中，本公开涉及一种治疗难愈性伤口的方法，方法包括:
[0018]确定用于治疗的慢性伤口的初始出现后的尺寸以获得第一尺寸测量结果或估算值；
[0019]向伤口给予标准护理，如例如加压包扎和/或减压；
[0020]在给予所述标准护理之后约二至四周确定伤口的尺寸以获得第二尺寸测量结果;
[0021]确定伤口的第二尺寸指标处于第一尺寸测量结果的预定范围(例如，-15%至+30% /-35%至+30% )之内，或通过更多预定量(例如，超过约+30% -35%的伤口 SAR)而不治愈，由此识别出难愈性伤口 ；和
[0022]向伤口处或伤口附近给予含有例如有效量的抗连接蛋白43多核苷酸的药物组合物。合适剂量、剂量用量和剂量浓度和制剂的实例在本文中进行了描述。
[0023]可以通过本领域内已知的各种方法，包括例如通过测定或合理估算或近似伤口的任何物理尺寸，如表面面积、最长直径的长度和/或最长直径的较长垂直平分线的长度测定伤口的尺寸。对于具有相对小的表面面积的深伤口，如糖尿病性足溃疡，体积也可以作为尺寸测量。其他已知的伤口测量方法包括测面法、伤口示踪法、数字化技术和立体光学测定法(stereophotograrometry)，以及简单的基于标尺的方法。三种市售伤口测量技术包括维斯特拉克(Visitrak)系统(Smith and Nephew Healthcare，Hull，U.K.)，数字摄影和图像处理系统(Analyze，vers1n 6.0 ；AnalyzeDirect, Lenexa，KS)，和使用计算椭圆面积的标准公式(Jiab)的椭圆测量方法。
[0024]在另一方面中，本公开涉及检测易感于通过含有例如约0.5mg/mL至约40mg/mL或约I至30mg/mL的例如抗连接蛋白43多核苷酸的药物组合物的治疗的难愈性慢性伤口的方法，方法包括
[0025]测定进行治疗的伤口初始出现后的尺寸指标以获得第一尺寸测量结果；
[0026]向伤口给予标准护理，如例如加压包扎和/或减压；
[0027]在给予初始标准护理治疗之后约二至四周测定伤口面积以获得第二尺寸测量结果;
[0028]确定伤口的第二尺寸指标处于本文内描述的第一尺寸测量结果的预定范围之内，由此检测易感于通过给予含有治疗有效量的例如抗连接蛋白43多核苷酸的药物组合物的治疗的进展缓慢或难愈性的创伤。其他连接蛋白靶按照本文中也是设想的。
[0029]在另一方面中，本公开涉及适用于治疗具有难愈性伤口的受试者的试剂盒、包装和/或制造制品，包括包含药物组合物的容器；和如本文中描述和要求保护的组合物的使用说明书，该药物组合物包含以治疗有效量或浓度例如1.0至3.0至约30.0至lOOmg/mL存在的抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸，和药用载体例如非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物。这种药物包括如本文中用于治疗受试者的那些。
[0030]在另一方面中，本发明涉及一种在向伤口局部给予含有非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物例如泊洛沙姆407 (以例如约15% -30%，如25% -27%的浓度)和例如以约3.0至约30mg/mL，或约1.0至约100mg/mL的浓度存在的单链抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸的组合物之后、采用完全愈合的增加的可能性来检测难愈性伤口的方法，例如，方法包括:
[0031]测定进行治疗的伤口初始出现后的尺寸指标以获得第一尺寸测量结果；
[0032]向伤口给予标准护理，如例如加压包扎和/或减压；
[0033]测定在开始标准护理治疗之后约2-4周伤口的尺寸指标以获得第二尺寸测量结果；和
[0034]检测伤口面积处于的预定尺寸范围之内，例如在磨合期之后其尺寸的约-15%至+30%，由此确定在向难愈性伤口局部给予含有所述抗连接蛋白43反义寡脱氧核苷酸的组合物之后完全愈合的增加的可能性。
[0035]在一些实施方式中，药物组合物包含有效量的3-30mg/mL或Ι-lOOmg/mL或本文中公开的其他合适剂量的抗连接蛋白43多核苷酸。药物组合物可以进一步包含一种或多种适合于局部给予的药物载体。在一个实施方式中，药物组合物可以包含约20% -30%的非离子聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物，和/或本文中公开的其他药物载体。
[0036]在一个方面中，抗连接蛋白多核苷酸可以以约3.0至约30mg/mL，或约1.0至约100mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些方面中，抗连接蛋白多核苷酸可以以约3、约5、约10、或约30mg/ml、或最高达约100mg/mL的任何量的浓度存在。在其他方面中，抗连接蛋白多核苷酸可以例如以约100 μ M至约5000uM的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方式中，本发明的治疗有效量的组合物含有药用载体和以约0.5至约40mg/mL(mL ；mg/mL)或约3至约30mg/mL，或约100 μ M至约5000 μ M的浓度存在的抗连接蛋白的药剂如单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸。
[0037]—种或多种剂量可以给予至具有难愈性伤口的受试者。在一些实施方式中，可以按照合适或所需的间隔反复给予一种或多种剂量的药物组合物。在一些实施方式中，药物组合物可以例如每日、或每周一至六次反复给予。例如，本文中所描述的含抗连接蛋白的药剂的组合物和制剂能够按照所需每周一次给予直至观察到愈合进展或完全。本发明的组合物可以更加频繁地施用，例如两或三次/周。它们也可以每两周、或每月施用。给予的频率和剂量可以在治疗过程中随着伤口面积和体积的变化而变化。此外，在伤口愈合再次变得停滞不前或延迟的情况下能够进行进一步的一次或多次施用。
[0038]根据本发明的另一方面，促进了伤口再上皮化和/或肉芽组织的形成。促进皮肤伤口再上皮化的方法包括以有效促进再上皮化的量向具有按照预期速率不愈合的伤口，包括例如延迟愈合或不完全愈合伤口或慢性伤口的受试者给予抗连接蛋白的药剂例如抗连接蛋白多核苷酸。类似的方法可以用于调节上皮基础细胞分裂和生长。
[0039]令人惊讶地观察到，难愈性伤口易感于在其之上或附近给予例如含有0.5至40mg/mL或更高浓度的抗连接蛋白多核苷酸和适合于局部给予的药用载体的药物组合物。举例而言，检测难愈性伤口可以有利地用于识别服从于采用含有0.5至40mg/mL抗连接蛋白多核苷酸、例如3至30mg/mL的抗连接蛋白430DN的药物组合物治疗的患者。本文中提供了其他合适剂量和剂量浓度。
[0040]在本发明的方法的一些方面中，如上所述，通过确定伤口的长度、宽度、深度、评估、边缘周长、体积、或表面面积，或它们的函数评估患者伤口的大小。可以使用任何合适方法，包括直接手动测量、激光扫描、成像装置如相机、平板电脑或PDA、表面映射等。对于伤口尺寸目前优选的度量是伤口表面面积，优选作为伤口长度乘以宽度伤口的乘积，伤口示踪法，或通过测面法获得。
[0041]令人惊讶和出乎意料地已经发现，磨合期内的尺寸变化范围为例如在磨合期内在伤口尺寸方面不超过约30%的增加至在伤口尺寸方面不超过15%的降低，和如前提及的其他范围和/或阈值量。优选的磨合阶段范围为约7至约30天，优选约7天至约21天，更优选约7天至约14天。优选14天的磨合。
[0042]以下提供的本发明的这些和其他方面，不限于或不受限于本
【发明内容】
中的信息。
【附图说明】
[0043]图1A-图1C显示了在10周治疗期之后在磨合期内使用-40%至+40%伤口尺寸变化的2B期临床研究的结果。图1A显示了在每个研究组中患者的％完全伤口封闭的作图:标准护理(SOC)，仅媒介物，和低剂量(Img)或高剂量(Img)的示例性抗连接蛋白43多核苷酸。图1B显示了每个研究小组中患者伤口表面面积降低的作图。图1C显示了基于磨合期内-40%至+40%伤口尺寸变化选择的患者并未在表面面积减少终点和完全伤口愈合次要终点的背景中表现出统计上的显著响应。
[0044]图2显示了来自满足-15%至+30%伤口尺寸变化标准的研究的每个小组中2B期研究的患者亚群体数据的重新分析的在第10周的％完全伤口封闭的作图。
[0045]图3显示了基于来自针对在研究每个小组中满足-15%至+30%伤口尺寸变化标准的患者亚群的2B期研究的数据的重新分析的表面面积减少的作图。。
[0046]图4表明满足-15%至+30%伤口尺寸变化标准的患者亚群体在表面面积减少终点和完全伤口愈合次要终点的背景中表现出统计显著性(P〈0.05)响应。
【具体实施方式】
[0047]按预期的速率不愈的伤口，包括愈合缓慢伤口、愈合延迟伤口、不完全愈合伤口、裂开性伤口以及慢性伤口，往往会造成感染，并可能导致截肢或死亡。通过间隙连接的细胞间通信在伤口愈合中起着关键作用。据发现，使用某些化合物，即抗连接蛋白的药剂，包括本文中描述或所提及或另外现在已知或以后开发的那些，可以阻断、抑制或改变细胞通信以促进按预期的速率不愈的伤口包括愈合缓慢伤口、愈合延迟伤口、不完全愈合伤口、裂开性伤口、以及慢性伤口的封闭和愈合。此外，如本文中的描述，令人惊奇和出乎意料的是，据发现，通过给予例如连接蛋白26(Cx26)、连接蛋白30(Cx30)或连接蛋白43 (Cx43)的一种或多种抗连接蛋白的药剂，通过向其一个或多个慢性伤口在标准护理(预处理)磨合阶段期间内维持于某尺寸范围内的患者给予所需的抗连接蛋白的药剂可以进一步促进难愈性慢性伤口的愈合。其他连接蛋白靶包括连接蛋白30.3(Cx30.3)、连接蛋白31(Cx31)、连接蛋白31.l(Cx31.1)、连接蛋白32(Cx32)、连接蛋白37 (Cx37)、连接蛋白40 (Cx40)和连接蛋白45(Cx45)，即，是抗连接蛋白26,30,30.3,31,31.1、32、37、40、43、或45的多核苷酸。优选的是，在约I至约30天、优选约5天至约20天、更加优选约7天至约14天的预处理阶段的期间内，待治疗的伤口在尺寸方面增加不超过约30%，例如，或作为另一实例在尺寸方面增加不超过约35%，或例如，在尺寸方面增加不超过约30%或在尺寸方面降低不超过约15%。
[0048]令人惊讶的是，据观察，在尺寸方面不增加约30%或在尺寸方面不降低约15%的难愈性伤口易感于向伤口处或伤口附近给予含有约0.5mg/mL至约40mg/mL，或约I至30mg/mL的抗连接蛋白多核苷酸和适合于局部给予的药用载体的药物组合物。在其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如在二至四周内加压包扎或减压设备在尺寸方面不降低超过约30% (+30%)。在还有的其他实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如加压包扎或减压设备在尺寸方面不降低超过约35% (+35% )，其在伤口尺寸增加不超过15% (-15% ) ο在进一步实施方式中，难愈性伤口是慢性伤口，或按预期的速率不愈的伤口，如延迟愈合的伤口和不完全愈合伤口，其在标准护理治疗期内使用例如在二至四周内加压包扎或减压设备在尺寸方面不增加或降低超过约-5% /+30%,-10% /+30%,-15%/+30%, -20% /+30%,25% /+30%或-30% /+30%。在其他实施方式中，磨合期内标准护理治疗是降低压力，或减压。可以采用适当合适的鞋、鞋垫和袜子降低足压、冲击和剪切。使用轮椅或拐杖的总非重支承(Total non-weight bearing)是另一种有效的缓解压力方法。其他的减压标准护理方式包括全接触石膏、去除石膏和可去除石膏助行架。
[0049]在一些实施方式中，治疗有效量的本发明组合物含有药用载体和以约0.5至约40.0mg/mL (mL ；mg/mL)或约3至约30mg/mL的浓度存在的抗连接蛋白的药剂如单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸。优选的浓度范围为约1.5至约30mg/mL(mg/mL)、约1.5至约1mg/mL、或约3、约5、约10、或约30mg/mL。在一些方面中给予的抗连接蛋白多核苷酸的总剂量可以为约100 μ g至约30mg。
[0050]尤其优选的连接蛋白反义多核苷酸(例如，单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)的浓度范围为约150 μ M至约10，000 μ Μ。从另一方面而言，根据本发明通过给予约150 μ g至约10，OOOyg的连接蛋白反义多核苷酸(例如，单链抗连接蛋白43寡脱氧核苷酸)/平方厘米的伤口表面面积可以有效治疗难愈性慢性皮肤伤口。
[0051]