一种细菌培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种培养基，特别是一种细菌培养基。
【背景技术】
[0002] 红螺菌科光合细菌在水产养殖中具有净化水质、促进动物生长与减少动物病害的 作用，是国内外致力于开发且常用的微生态菌剂。红螺菌可分泌拮抗物质，与化学药品和抗 生素相比，红螺菌分泌的拮抗物质不但可以减少和阻止病原菌的感染，而且还能有效解决 耐药性的问题。因此，开展提高耐盐红螺菌拮抗物质的分泌产量研究具有重要意义。
[0003] 因此寻找一种能够提高耐盐红螺菌拮抗能力的培养基能够为促进耐盐红螺菌药 物在生物防治水产养殖病害中的应用具有重要的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种能够促进耐盐红螺菌对 棉花黄萎病中的应用，提高耐盐红螺菌拮抗能力的培养基。
[0005] 本发明采用的技术方案如下：
[0006] 本发明的一种细菌培养基，由3. 0%~7%醋酸钠，0. 7%~4. 7%丙酸钠，1. 3%~ 1. 9%硫酸铵，1. 8%~2. 4%硫酸镁，1. 3%~2. 3%氯化钙，0· 4%~1. 4%硫酸锰，2. 6%~ 4. 6%谷氨酸，14. 0%~16. 0%缓冲液，15. 5%~2L5%蛋白胨，3. 4%~9. 4%酵母膏， 15. 0%~16. 8%牛肉膏，3. 6%~5. 4%芒果提取物，L3%~2. 3%芦荟胶，L8%~2. 8% 琼脂，0. 5%~1. 1%Gemini表面活性剂组成和16. 8%~17. 4%去离子水组成。
[0007] 由于采用了上述技术方案，采用蛋白胨、牛肉膏和芒果提取物作为细菌培养的氮 源和碳源，芒果中不仅含有大量的类胡萝卜素、维生素C、果胶和膳食纤维等有益物质，同时 还含有特殊的芒果苷，芒果酸和类似维他命P复合物的槲黄素，均能够促进细菌的生长。
[0008] 缓冲液的存在保证培养基的pH处于一定的恒定范围内，避免细菌在生长过程中， 代谢产物的产生改变培养基的pH环境，使得pH变化过大而抑制细菌的生长。
[0009] 醋酸钠，丙酸钠，硫酸铵，硫酸镁，氯化钙和硫酸锰作为细菌生长的必要微量元素 提供成分，缺乏微量元素锰、钙、镁等会导致细菌生长缓慢，但如果无机盐的含量过高，会在 培养基中形成难溶物，反而会抑制细菌的生长，因此，上述比例为最合理的范围。
[0010] 本发明的一种细菌培养基，由5.0%醋酸钠，2. 7%丙酸钠，1.6%硫酸铵，2. 1 %硫 酸镁，1. 8 %氯化钙，0. 9 %硫酸锰，3. 6 %谷氨酸，15. 0 %缓冲液，18. 5 %蛋白胨，6. 4 %酵母 膏，15. 9 %牛肉膏，4. 5 %芒果提取物，1. 8 %芦荟胶，2. 3 %琼脂，0. 8 %Gemini表面活性剂 组成和17. 1 %去离子水组成。
[0011] 由于采用了上述技术方案，上述比例为最佳值。
[0012] 本发明的一种细菌培养基，所述蛋白胨为螺旋藻蛋白胨。
[0013] 由于采用了上述技术方案，现有技术通常采用日本蛋白胨来培养细菌，价格较为 昂贵，成本较高，螺旋藻的组物中其中60%以上的是蛋白质，主要包括异亮氨酸，亮氨酸，赖 氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，苏氨酸，色氨酸和缬氨酸，此外，还含脂肪，碳水化合物，叶绿素，类 胡萝卜素，藻青素，维生素4、81、82、86、8124，烟酸，肌酸，丫-亚麻酸，泛酸|丐，叶酸（￡〇1;^ acid)及钙，铁，锌，镁等。可以从螺旋藻中分离提取出新的廉价的优质蛋白胨，由螺旋藻制 成的螺旋藻蛋白胨能够为细菌生长提供所需的氮源和碳源。
[0014] 本发明的一种细菌培养基，所述Gemini表面活性剂的结构式如下，
[0015]
[0016] 由于来用J上还扠木万菜，该表囬沽?生刑口」以刺微细囷栢杌物质的产生，并提高 拮抗物质的产量。
[0017] 本发明的一种细菌培养基，所述芒果提取物通过以下步骤制备，
[0018] 步骤一：取用新鲜芒果，按芒果：淀粉的质量比12:1，将淀粉溶解在温度为25~ 38°C的水中清洗芒果；
[0019] 步骤二：将步骤一中清洗好的芒果浸泡在浓度为4. 82mol/L的盐水中，在微波功 率为550W，温度为27°C的条件下预处理20min;
[0020] 步骤三：将步骤二中经过处理的芒果取出，用常温清水清洗；
[0021] 步骤四：将步骤三中晾干的芒果浸泡在无水乙醇中，芒果：无水乙醇的质量比为 1:1. 5,在微波功率为400W，温度为30°C的条件下预处理20min;
[0022] 步骤五：对经过步骤四处理的芒果在无水乙醇中进行破碎，加水将无水乙醇稀释 为73%的乙醇溶液，在压力0.62奸 &，温度78°(：的条件下回流511;
[0023] 步骤六：将步骤五中的反应体系趁热过滤，得滤液一与滤渣一，取滤渣一溶于乙酸 乙酯中，滤渣：乙酸乙酯的质量比为1:1. 5,在温度78°C的条件下回流5h;
[0024] 步骤七：将步骤六中的反应体系趁热过滤，得滤液二与滤渣二；
[0025] 步骤八：取步骤六中制得的滤液一，将体系中的乙醇除去，冷却至常温，置于 360nm，2kW的高压萊灯下，在光强为96mW/cm2,福照距离为8cm的条件下福照2h，体系表面 形成一层膜状物，弃去膜状物，得悬浊液；
[0026] 步骤九：将步骤八中的悬浊液与步骤七中滤液二混合，去除溶剂水和乙酸乙酯，得 到芒果提取物。
[0027] 由于采用了上述技术方案，在微波的作用，能够迅速破坏植物细胞中的细胞壁提 高分子运动速率，使得芒果中含有的天然产物更够更好更快地从植物细胞中渗透出，提高 提取的效率和提取物的产量。芒果中含有一种特殊的物质一一芒果漆酚，该物质不利于细 菌的生长，漆酚不溶于水，且为油状物，漆酚的密度小于水的密度；漆酚具有成膜的物理性 质，高压栗灯能够发出强的紫外光，在强的紫外光照射下，漆酚能够迅速成膜，利用该特性 既能够高效地去除掉提取物中的漆酚。
[0028] 的一种细菌培养基，其特征在于：所述缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲 液，所述缓冲液由9mL的Na2HP04溶液和lmL的狃丨04溶液组成，所述Na2ΗΡ04溶液的浓度为 0· 067mol/L，所述ΚΗ2Ρ04溶液的浓度为 0· 66mol/L〇
[0029] 本发明的一种细菌培养基，所述培养基的pH为7. 73。
[0030] 由于采用了上述技术方案，该pH值为最适宜细菌生长的pH值。
[0031] 本发明的一种细菌培养基，所述培养基在提高耐盐红螺菌拮抗能力的应用。
[0032] 由于采用了上述技术方案，使用该培养基培养的耐盐红螺菌拮抗能力较普通培养 基的能力有所提高，且经过该培养基培养的耐盐红螺菌产生的拮抗物质产量也有所提高。
[0033] 综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
[0034] 1、为细菌生长提供所需的氮源，碳源和微量元素，为细菌提供稳定的生长环境，且 较廉价。
[0035] 2、使用该培养基培养的耐盐红螺菌拮抗能力较普通培养基的能力有所提高，且经 过该培养基培养的耐盐红螺菌产生的拮抗物质产量也有所提高。
【附图说明】
[0036] 图1为本发明培养基和普通培养基的拮抗能力对比曲线图。
[0037] 图2为本发明培养基和普通培养基的生长情况对比曲线图。
【具体实施方式】
[0038] 下面对本发明作详细的说明。
[0039] 为了使发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进 行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限 定本发明。
[0040] 实施例1
[0041] 一种细菌培养基，由3.0 %醋酸钠，4. 7 %丙酸钠，1.3 %硫酸铵，2. 4 %硫酸镁， 1. 3 %氯化钙，1. 4 %硫酸锰，2. 6 %谷氨酸，16. 0 %缓冲液，15. 5 %蛋白胨，9. 4 %酵母膏， 15. 0%牛肉膏，5