一种细菌培养基的制作方法_2

文档序号:9592763阅读:来源:国知局
. 4%芒果提取物,1. 3%芦荟胶,2. 8%琼脂,0. 5%Gemini表面活性剂组成 和17. 4 %去离子水组成。
[0042] 其中,蛋白胨为螺旋藻蛋白胨,Gemini表面活性剂的结构式如下,
[0043]
[0044] 芒果提取物通过以下步骤制备,
[0045] 步骤一:取用新鲜芒果,按芒果:淀粉的质量比12:1,将淀粉溶解在温度为25~ 38°C的水中清洗芒果;
[0046] 步骤二:将步骤一中清洗好的芒果浸泡在浓度为4. 82mol/L的盐水中,在微波功 率为550W,温度为27°C的条件下预处理20min;
[0047] 步骤三:将步骤二中经过处理的芒果取出,用常温清水清洗;
[0048] 步骤四:将步骤三中晾干的芒果浸泡在无水乙醇中,芒果:无水乙醇的质量比为 1:1. 5,在微波功率为400W,温度为30°C的条件下预处理20min;
[0049] 步骤五:对经过步骤四处理的芒果在无水乙醇中进行破碎,加水将无水乙醇稀释 为73%的乙醇溶液,在压力0.62奸 &,温度78°(:的条件下回流511;
[0050] 步骤六:将步骤五中的反应体系趁热过滤,得滤液一与滤渣一,取滤渣一溶于乙酸 乙酯中,滤渣:乙酸乙酯的质量比为1:1. 5,在温度78°C的条件下回流5h;
[0051] 步骤七:将步骤六中的反应体系趁热过滤,得滤液二与滤渣二;
[0052] 步骤八:取步骤六中制得的滤液一,将体系中的乙醇除去,冷却至常温,置于 360nm,2kW的高压萊灯下,在光强为96mW/cm2,福照距离为8cm的条件下福照2h,体系表面 形成一层膜状物,弃去膜状物,得悬浊液;
[0053] 步骤九:将步骤八中的悬浊液与步骤七中滤液二混合,去除溶剂水和乙酸乙酯,得 到芒果提取物。
[0054] 缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液,缓冲液由9mL的Na2HP04溶液和lmL 的腿$04溶液组成,所述Na2ΗΡ04溶液的浓度为0. 067mol/L,所述KH2P04溶液的浓度为 0· 66mol/L,培养基的pH为 7. 73。
[0055] 实施例2
[0056] 一种细菌培养基,由7 %醋酸钠,0.7 %丙酸钠,1. 9 %硫酸铵,1. 8 %硫酸镁,2. 3% 氯化钙,0. 4%硫酸锰,4. 6%谷氨酸,14. 0%缓冲液,21. 5%蛋白胨,3. 4%酵母膏,16. 8%牛 肉膏,3. 6%芒果提取物,2. 3%芦荟胶,1. 8%琼脂,1. 1%Gemini表面活性剂组成和16. 8% 去离子水组成。
[0057] 其中,蛋白滕为帱掄菡?白滕rTfimini丟而9SW剂的结抝忒加下,
[0058]
[0059] 芒果提取物通过以下步骤制备,
[0060] 步骤一:取用新鲜芒果,按芒果:淀粉的质量比12:1,将淀粉溶解在温度为25~ 38°C的水中清洗芒果;
[0061] 步骤二:将步骤一中清洗好的芒果浸泡在浓度为4. 82mol/L的盐水中,在微波功 率为550W,温度为27°C的条件下预处理20min;
[0062] 步骤三:将步骤二中经过处理的芒果取出,用常温清水清洗;
[0063] 步骤四:将步骤三中晾干的芒果浸泡在无水乙醇中,芒果:无水乙醇的质量比为 1:1. 5,在微波功率为400W,温度为30°C的条件下预处理20min;
[0064] 步骤五:对经过步骤四处理的芒果在无水乙醇中进行破碎,加水将无水乙醇稀释 为73%的乙醇溶液,在压力0.62奸 &,温度78°(:的条件下回流511;
[0065] 步骤六:将步骤五中的反应体系趁热过滤,得滤液一与滤渣一,取滤渣一溶于乙酸 乙酯中,滤渣:乙酸乙酯的质量比为1:1. 5,在温度78°C的条件下回流5h;
[0066] 步骤七:将步骤六中的反应体系趁热过滤,得滤液二与滤渣二;
[0067]步骤八:取步骤六中制得的滤液一,将体系中的乙醇除去,冷却至常温,置于 360nm,2kW的高压萊灯下,在光强为96mW/cm2,福照距离为8cm的条件下福照2h,体系表面 形成一层膜状物,弃去膜状物,得悬浊液;
[0068] 步骤九:将步骤八中的悬浊液与步骤七中滤液二混合,去除溶剂水和乙酸乙酯,得 到芒果提取物。
[0069] 缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液,缓冲液由9mL的Na2HP04溶液和lmL 的腿$04溶液组成,所述Na2ΗΡ04溶液的浓度为0. 067mol/L,所述KH2P04溶液的浓度为 0· 66mol/L,培养基的pH为 7. 73。
[0070] 实施例3
[0071] 一种细菌培养基,由5.0 %醋酸钠,2. 7 %丙酸钠,1.6 %硫酸铵,2. 1 %硫酸镁, 1. 8 %氯化钙,0. 9 %硫酸锰,3. 6 %谷氨酸,15. 0 %缓冲液,18. 5 %蛋白胨,6. 4 %酵母膏, 15. 9%牛肉膏,4. 5%芒果提取物,1. 8%芦荟胶,2. 3%琼脂,0. 8%Gemini表面活性剂组成 和17. 1 %去离子水组成。
[0072] 其中,蛋白胨为螺旋藻蛋白胨,Gemini表面活性剂的结构式如下,
[0073]
[0074] 芒果提取物通过以下步骤制备,
[0075] 步骤一:取用新鲜芒果,按芒果:淀粉的质量比12:1,将淀粉溶解在温度为25~ 38°C的水中清洗芒果;
[0076] 步骤二:将步骤一中清洗好的芒果浸泡在浓度为4. 82mol/L的盐水中,在微波功 率为550W,温度为27°C的条件下预处理20min;
[0077] 步骤三:将步骤二中经过处理的芒果取出,用常温清水清洗;
[0078] 步骤四:将步骤三中晾干的芒果浸泡在无水乙醇中,芒果:无水乙醇的质量比为 1:1. 5,在微波功率为400W,温度为30°C的条件下预处理20min;
[0079] 步骤五:对经过步骤四处理的芒果在无水乙醇中进行破碎,加水将无水乙醇稀释 为73%的乙醇溶液,在压力0.62奸 &,温度78°(:的条件下回流511;
[0080] 步骤六:将步骤五中的反应体系趁热过滤,得滤液一与滤渣一,取滤渣一溶于乙酸 乙酯中,滤渣:乙酸乙酯的质量比为1:1. 5,在温度78°C的条件下回流5h;
[0081] 步骤七:将步骤六中的反应体系趁热过滤,得滤液二与滤渣二;
[0082] 步骤八:取步骤六中制得的滤液一,将体系中的乙醇除去,冷却至常温,置于 360nm,2kW的高压萊灯下,在光强为96mW/cm2,福照距离为8cm的条件下福照2h,体系表面 形成一层膜状物,弃去膜状物,得悬浊液;
[0083] 步骤九:将步骤八中的悬浊液与步骤七中滤液二混合,去除溶剂水和乙酸乙酯,得 到芒果提取物。
[0084] 缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液,缓冲液由9mL的Na2HP04溶液和lmL 的腿$04溶液组成,所述Na2ΗΡ04溶液的浓度为0. 067mol/L,所述KH2P04溶液的浓度为 0· 66mol/L,培养基的pH为 7. 73。
[0085] 实施例4
[0086] 上述培养基在提高耐盐红螺菌拮抗能力的应用。
[0087] 拮抗能力的测定:
[0088] 取适量的上述培养基,将耐盐红螺菌接种于培养基中,在30°C,光照强度 815~8401x下培养7d,将病原菌培养至对数生长期,制成菌体浓度为1.5X108~ 2. 5X108CFU·mL1的菌悬液,涂布,置30°C恒温箱中平衡干燥30min,后立即将无菌滤纸片 (96mm)贴于平板上,滴加10μL耐盐红螺菌CFS原液,置于30°C下培养24h后,用千分尺测 量抑菌圈直径。最低抑菌浓度测定:将耐盐红螺菌CFS按2倍稀释法稀释成一定倍数,以琼 脂纸片扩散法测定其对病原菌的抑菌活性,以肉眼观察到有抑菌圈的最高稀释度的倒数为 最低抑菌浓度(MIC,AU·mL4。分别测得实施例1,实施例2,实施例3和普通培养基的拮 抗能力曲线,如图1所示。
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