一种淡水小环藻培养液及培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及藻类培养领域，具体设及一种淡水小环藻培养液及培养方法。
【背景技术】
[0002] 小环藻属娃藻口圆筛藻目圆筛藻科，是淡水养殖中的常见娃藻种，该藻具有个体 小，生长繁殖快，营养丰富，无毒无副作用等特点，是水产动物苗种培育的良好开口巧料。有 学者调查发现小环藻是对邮养殖中后期池塘常见的优势种，可改善养殖水质，有利于对邮 生长。
[0003] 但在天然水体中，小环藻与其他藻类混杂生长，种群密度很低，很难满足水产养殖 的需要。目前，淡水小环藻的培养多采用CSI培养基，在该培养基中，小环藻生长速度较缓 慢，不利于小环藻的大规模培养。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种淡水小环藻培养液，该培养液适用于淡水小环藻生长。
[0005] 本发明的另一个目的是提供一种小环藻的培养方法，该方法可提高淡水小环藻生 长速率，有利于淡水小环藻的规模化培养。
[0006] 为了达到上述目的，本发明采取W下技术措施：
[0007] -种淡水小环藻培养液（本发明或称LXC培养液），包括：
[0008] 4 水硝酸巧（Ca(N〇3)2 ·4Η20) 60~75mg/L 硝酸卸（KN(V) 40~50mg/L 7 水硫酸镇CMgS〇4.7H2〇) 35~40mg/L 5 水β-甘油縣酸钢（P-Na;glycerophosphate'5H:0) 20~25m呂/L 4-巧乙基脈嗦乙礙酸（HEP路） 400~彿Omg/L 9 水偏插酸钢（Na2Si〇3.9H2〇) 150~200mg/L 6 水氯化铁（FeCl3.6压_0) 3.5~4ing/L 艺二胺四己酸二巧（Na^EDTA) 4~4.5mg/L 4 水'i'Yk化?·!?;ainCl:.4H;0) 0.25~化?5m狂也 7 水氯化粹（ZnCb7H2〇) 25~30ug/L 2 水合钢酸纳（Ν32Μο04·2Η2〇) 20~24ug/L 6水氯化钻（CoCk6H2Q) 7-12雌化 邻.?';南B|;*'ViurminB|.]) 0.05-0.111g/L 维生素Η(Biotin生物素） 0.05~0.lug/L
[0009] 维生素B1CT扣an血e:既C). 备-IQugiL..
[0010] 其余为双蒸水，培养液的抑范围是6~7。
[0011] 所述的小环藻为生长在淡水中的小环藻。
[0012] 一种小环藻的培养方法，包括下述步骤：
[0013] 1)将培养至对数期的小环藻进行饥饿培养1~2d(培养液为不含氮、憐、娃、铁的 CSI培养基），备用。
[0014] 2)将经过饥饿培养的小环藻3000~400化/min离屯、5~lOmin，弃上清后接种至 LXC培养液中，接种量为1~10Xl〇4cells/mL。28~30°C，光照强度为3000~50001X，光 暗比为12h~14h:lOh~12h，每隔化振摇锥形瓶一次。
[0015] 本发明与现有技术相比，具有W下优点：
[0016] 本发明所公开的培养液和培养方法，根据淡水小环藻生长的营养盐、溫度、抑值等 的需求特性，达到促进纯种淡水小环藻快速生长的目的。本发明中培养液搭配合理，可W有 效地促进小环藻的快速分裂增殖，促进其更好地吸收利用各种营养物质，加快小环藻细胞 的新陈代谢，提高其生产量。本发明中培养方法操作简单，针对性强，适应淡水小环藻的快 速生长，因此本发明具备了广泛的市场前景，特别适合于在水产养殖领域推广应用。
【附图说明】
[0017] 图1为实施例1中的小环藻在LXC培养液和CSI培养液中的生长曲线示意图。
【具体实施方式】
[0018]本发明所述技术方案，如未特别说明，均为常规技术，所述试剂或原料，如未特别 说明，均来源于商业渠道。
[001引实施例1 :
[0020] -种淡水小环藻培养液（本发明实施例或称LXC培养液），包括：
[0021] 4 水稱酸巧（Ca(N〇3)2 ·4Η20) 75mg/L 硝酸狎（KN03) 50mg/L 7 水硫酸钱（MgSO.r7H2〇> 40mg/L 5 水β-甘油憐酸销（β-Νπ;glycerophosphate·5H；!0) 25tng/L 4-程乙基嘛嗦己横酸（HEP'ES) 500mg/L 9 水偏桂酸销CNa：2SiO：r9H2〇) 200mg/L 6 水氯化铁（FeCb6H2O) 4mg/L 乙二胺四乙酸二納（Na出DTA) 4.5mg/L
[0022] 4 氷含氯化输（MnCV4H2〇) 0.25mg/L 7 水氯化巧（ZnCb7H2〇) 30ug/L 2 水合箱酸納（Ν32Μο04·2Η2〇) 24ug/L 6 水氯化钻（CoCk6 巧2〇) 12ug/L 维生素Bn(VitaminB12) O.lug/L 维生素H(Biotin生物素） O.Iug/L 维生素BI(ThiamineHC) lOug/L 其余为双蒸水。
[002引 实施例2 :
[0024] -种淡水小环藻培养方法，包括：
[00巧](1)按照实施例1所述配方配制LXC培养液，调节抑值为7。放入灭菌锅中，120°C，灭菌20min。灭菌结束后，放入4°C冰箱中备用。
[0026] (2)将小环藻在CSI培养基（《HandbookofMicroalgalQilture》）中培养至 对数期，备用。
[0027] (3)将（2)中的小环藻进行饥饿培养Id(培养液为不含氮、憐、娃、铁的CSI培养 基），备用。
[0028] (4)将经过饥饿培养的小环藻4000r/min离屯、lOmin，弃上清后分别接种到装有 LXC培养液（试验组）和CSI培养液（对照组）的锥形瓶中，接种量为1. 58X104cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0029](5)将锥形瓶移入光照培养箱中，设定溫度为28°C，光照强度为30001X，光暗比为 12h:12h〇
[0030] (6)每隔化振摇锥形瓶一次，w上所有器皿均需灭菌，操作均在超净工作台中进 行。
[0031] (7)每2d取样于显微镜下观察计数。
[0032] 细胞生长情况如表1和图1所示，试验组小环藻在接种的第Id藻细胞开始 分裂，第5d进入对数期。生长速率一直递增到接种后的第lld，最大藻细胞密度达到 78. 12X10"cells/ml〇
[003引表1小环藻细胞密度随时间的变化（X104cells/ml)
[0034]
[0035] 对照组CSI培养基中的细胞生长趋势与试验组中基本一致，但细胞生长速率显著 低于试验组，在第1Id达到最大细胞密度，仅有8. 09X104cells/ml。
[003引实施例3 :
[0037] -种淡水小环藻培养方法，包括：
[0038] (1)按照实施例1所述配方配置好LXC培养液，调节抑值为6,放入灭菌锅中， 120°C，灭菌20min，灭菌结束后。放入4°C冰箱中备用。
[003引 似将小环藻在CSI培养基中培养至对数期，备用。
[0040] (3)将（2)中的小环藻进行饥饿培养Id(培养液为不含氮、憐、娃、铁的CSI培养 基），备用。
[0041] (4)将经过饥饿培养的小环藻4000r/min离屯、lOmin，弃上清后分别接种到装有 LXC培养液（试验组）和CSI培养液（对照组）的锥形瓶中，接种量为1.92X104cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0042] (5)将锥形瓶移入光照培养箱中，设定溫度为将28°C，光照强度为30001X，光暗比 为1化：1化。
[0043] (6)每隔化振摇锥形瓶一次。W上所有器皿均需灭菌，操作均在超净工作台中进 行。
[0044] (7)每2d取样于显微镜下观察计数。
[0045] 经过lid培养，试验组细胞密度可达79. 53 + 4. 33X104cells/ml。
[0046] 实施例4:
[0047] 一种小环藻培养方法，包括：
[0048] (1)按照实施例1所述培养液配方配置好LXC培养液，调节pH值为6,放入灭菌锅 中，120°C，灭菌20min。灭菌结束后，放入4°C冰箱中备用。
[0049] (2)将小环藻在CSI培养基中培养至对数期，备用。
[0050] (3)将（2)中的小环藻进行饥饿培养Id(培养液为不含氮、憐、娃、铁的CSI培养 基），备用。
[0051] (4)将经过饥饿培养的小环藻4000r/min离屯、lOmin，弃上清后分别接种到装有 LXC培养液（试验组）和CSI培养液（对照组）的锥形瓶中，接种量为1.92X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[0052] (5)将锥形瓶移入光照培养箱中，设定溫度为将30°C，光照强度为30001X，光暗比 为 12h:12h;
[0053] (6)每隔化振摇锥形瓶一次。W上所有器皿均需灭菌，操作均在超净工作台中进 行。
[0054] (7)每2d取样于显微镜下观察计数。
[00巧]经过lid培养，试验组细胞密度可达82. 32 + 4. 55X 104cells/ml。
【主权项】
1. 一种淡水小环藻培养液，包括： 4水硝酸钙 60~75mg/L 硝酸钾 40~50mg/L 7水硫酸镁 35~40mg/L 5水β-甘油磷酸钠 20~25mg/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 400~500mg/L 9水偏硅酸钠 150~200mg/L 6水氯化铁 3. 5~4mg/L 乙二胺四乙酸二钠 4~4.5mg/L 4水合氯化锰 0· 25~0· 35mg/L 7水氯化锌 25~30ug/L 2水合钼酸钠 20~24ug/L 6水氯化钴 7~12ug/L 维生素B12 0. 05~0.lug/L 维生素Η 0. 05~0.lug/L 维生素B1 5~10ug/L 其余为双蒸水，培养液的pH范围是6~7。2. 利用权利要求1所述培养液培养小环藻的方法，包括： 将经过饥饿培养的小环藻3000~4000r/min离心5~10min，弃上清后接种至权利要求1 所述培养液中，28~30°C，光照强度为3000~50001x，光暗比为12h~14h: 10h~12h，每隔3h振 摇锥形瓶一次。
【专利摘要】本发明公开了一种淡水小环藻培养液及培养方法，本发明所公开的培养液，配方组分简单易得，根据淡水小环藻生长的营养盐、温度、pH值等的需求特性，可以有效地促进小环藻的快速分裂增殖，促进其更好地吸收利用各种营养物质，加快小环藻细胞的新陈代谢，提高其生产量，达到促进纯种淡水小环藻快速生长的目的。将该培养液结合本发明提供的培养方法，培养方法操作简单，针对性强，适应淡水小环藻的快速生长，具备广泛的市场前景，特别适合于在水产养殖领域推广应用。
【IPC分类】C12R1/89, C12N1/12
【公开号】CN105368713
【申请号】CN201510967854
【发明人】李晓莉, 李谷, 陶玲
【申请人】中国水产科学研究院长江水产研究所
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月22日