一种淡水针杆藻培养液及培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及藻类培养领域，具体设及一种淡水针杆藻培养液及培养方法。
【背景技术】
[0002] 针杆藻属娃藻口无壳缝目脆杆藻科，是淡水养殖中的常见娃藻种，其脂肪含量高， 脂肪种类丰富，是滤食性水产动物的天然巧料，而且不含纤维素等成分，能够很好地被水产 动物所摄食和消化，且营养丰富，富含巧、儀、铁等无机盐及多种维生素。同时，W针杆藻为 代表的许多娃藻对净化水质、维护水体生态平衡也有很好的效果。因此，在淡水养殖中，W 娃藻为优势种群（如针杆藻、舟形藻、菱形藻、星杆藻、圆筛藻等）的水体（多呈茶色或茶褐 色），一直被认为是水产养殖的最佳水环境之一。
[0003] 但在天然水体中，针杆藻与其他藻类混杂生长，种群密度很低，很难满足水产养殖 的需要。目前，淡水针杆藻的培养多采用CSI培养基，在该培养基中，针杆藻生长速度较缓 慢，不利于针杆藻的大规模培养。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种淡水针杆藻培养液，该培养液适用于淡水针杆藻的生 长。
[0005] 本发明的另一个目的是提供一种针杆藻的培养方法，该方法可提高淡水针杆藻生 长速率，有利于淡水针杆藻的规模化培养。
[0006] 为了达到上述目的，本发明采取W下技术措施：
[0007] -种淡水针杆藻培养液（本发明或称LXS培养液），包括：
[0008] 4求硝酸濟:浓禱3》'化納 巧於1洗釀 確酸钟（KN03) 90~i00mg/L 7 氷硫酸镑（MgS〇4.7H2〇) 35~40mg/L 5涨.p-巧綱磯灣顿.（.良-?姑2.g如脚曲任巧免汹的坂贷25~滋如碁化:： 4-哲乙基脈嗦乙横酸CHEPES) 斯:0~如;0mg化 9水偏畦酸钢lNa2SiO;-9打2〇) 1就…就0紅晦化. 6 水扣化铁（Fe(J,.6H:0) 3.5~4mg,L 乙二胺四己酸二軸CNa2EDTA) 4~4.5mg/L 4 水合氯化猛（MnCV4H2〇) 0.25~0.35mg/L 7 水氯化粹（Ζηα2·7Η2〇) 25~30ug/L 2 水合巧酸钢lNa2M0〇4-2H2〇) 20~24ug/L
[0009] 6 水氯化钻（CoCk6H20) 7~12ug/L 维?.东B|:?Vi趾TiinB|:) 0.05-0.lug/L 维生素H化iotin生物素） 0.05~(Uug/L 邻'1萬B1 {Thii'iinineHC) 5~IOug,.L
[0010] 其余为双蒸水，培养液的pH范围是7. 5~8。
[0011] 所述的针杆藻是生长在淡水中的针杆藻。
[0012] 一种针杆藻的培养方法，包括下述步骤：
[0013] 1)将培养至对数期的针杆藻进行饥饿培养1~2d(培养液为不含氮、憐、娃、铁的 CSI培养基），备用。
[0014] 2)将经过饥饿培养的针杆藻3000~4000;r/min离屯、5~lOmin，弃上清后接种至 LXS培养液中，接种量为1~10Xl〇4cells/mL。25~30°C，光照强度为3000~50001X，光 暗比为12h~1地：lOh~12h，每隔化振摇锥形瓶一次。
[0015] 本发明与现有技术相比，具有W下优点：
[0016] 本发明所公开的培养液和培养方法，根据淡水针杆藻生长的营养盐、溫度、抑值等 的需求特性，达到促进纯种淡水针杆藻快速生长的目的。本发明中培养液搭配合理，可W有 效地促进针杆藻的快速分裂增殖，促进其更好地吸收利用各种营养物质，加快针杆藻细胞 的新陈代谢，提高其生产量。本发明中培养方法操作简单，针对性强，适应淡水针杆藻的快 速生长，因此本发明具备了广泛的市场前景，特别适合于在水产养殖领域推广应用。
【附图说明】
[0017]图1为实施例1中的针杆藻在LXS培养液和CSI培养液中的生长曲线示意图。
【具体实施方式】
[0018]本发明所述技术方案，如未特别说明，均为常规技术，所述试剂或原料，如未特别 说明，均来源于商业渠道。
[001引实施例1 :
[0020] -种淡水针杆藻培养液（本发明实施例或称LXS培养液），包括：
[0021] 4 水確酸巧（Ca(N〇3) .4&0) 1 洗mg/'L 硝酸巧（KN03) lOOmg/L 7 水硫酸镑（Μ拱O4.7H2O) 40mg/L 5 水P-甘油磯酸钢φ-Ν32glycerophosphate-5H2〇) 30mg/L 4-経己基脈嗦乙礎酸（IffiPES) 500mg/L
[0022] 9米媽疆藤執（N;i:SiO;.9H]〇J 15.血巧汇 6 水k化巧（Fe0.v6H:0) 4mg/L 乙二胺四之酸二钢CNa^EDTA) 4.5mg/L 4 水含氯化猛（Μηα2.4Η2〇) 0.25mg/L 7 水氯化粹（ZnCV7H2〇) 30ug/L 2 水合巧酸納（Ν32Μο04·2Η2〇) 24ug/L 6 水氯化钻（CoCk6H_，0) 12ug/L 维'Τ.禹BI:; (yi扣miηBI:) 0.1ug;L 维生素H(Biotin生物素） O.lug/L 维'1...南Bl(ThiiimineHC) lOiig-L
[0023] 其余为双蒸水。
[0024] 实施例2:
[00巧]一种淡水针杆藻培养方法，包括：
[0026] (1)按照实施例1所述配方配制LXS培养液，调节抑值为7. 5。放入灭菌锅中， 120°C，灭菌20min。灭菌结束后，放入4°C冰箱中备用。
[0027] (2)将针杆藻在CSI培养基（《HandbookofMicroalgalQilture》）中培养至 对数期，备用。
[0028] (3)将（2)中的针杆藻进行饥饿培养Id(培养液为不含氮、憐、娃、铁的CSI培养 基），备用。
[0029] (4)将经过饥饿培养的针杆藻4000r/min离屯、lOmin，弃上清后分别接种到装有 LXS培养液（试验组）和CSI培养液（对照组）的锥形瓶中，接种量为0.29X105cellsAiL， 然后用封口膜封口。
[0030] (5)将锥形瓶移入光照培养箱中，设定溫度为25°C，光照强度为30001X，光暗比为 12h:12h〇
[0031] (6)每隔化振摇锥形瓶一次，W上所有器皿均需灭菌，操作均在超净工作台中进 行。
[0032] (7)每2d取样于显微镜下观察计数。
[0033] 所述的针杆藻购自中科院水生生物研究所藻种库，编号为Syne化aFACHB-1131。
[0034] 细胞生长情况如表1和图1所示，试验组针杆藻在接种的第2d藻细胞开始 分裂，第4d进入对数期。生长速率一直递增到接种后的第lld，最大藻细胞密度达到 9. 15X10?cells/ml〇
[003引表1针杆藻细胞密度随时间的变化（Xl05cells/mU[0036]
[0037]对照组CSI培养基中的细胞生长趋势与试验组中基本一致，但细胞生长速率显著 低于试验组，在第lid达到最大细胞密度，仅有6. 16X105cells/ml。
[003引实施例3 :
[0039] -种淡水针杆藻培养方法，包括：
[0040] (1)按照实施例1所述配方配置好LXS培养液，调节抑值为8,放入灭菌锅中， 120°C，灭菌20min，灭菌结束后。放入4°C冰箱中备用。
[00川 似将针杆藻在CSI培养基中培养至对数期，备用。
[0042] (3)将（2)中的针杆藻进行饥饿培养Id(培养液为不含氮、憐、娃、铁的CSI培养 基），备用。
[0043] (4)将经过饥饿培养的针杆藻4000r/min离屯、lOmin，弃上清后分别接种到装有 LXS培养液（试验组）和CSI培养液（对照组）的锥形瓶中，接种量为0.33X105cellsAiL， 然后用封口膜封口。
[0044] (5)将锥形瓶移入光照培养箱中，设定溫度为将25°C，光照强度为30001X，光暗比 为1化：1化。
[0045] (6)每隔化振摇锥形瓶一次。W上所有器皿均需灭菌，操作均在超净工作台中进 行。
[0046] (7)每2d取样于显微镜下观察计数。
[0047] 所述的针杆藻为Syne化a FACHB-1131，购自中科院水生生物研究所藻种库。
[004引 经过lid培养，试验组细胞密度可达9. 01X105cells/ml。
[004引 实施例4:
[0050] -种淡水针杆藻培养方法，包括：
[0051] (1)按照实施例1所述培养液配方配置好LXS培养液，调节抑值为8,放入灭菌锅 中，120°C，灭菌20min。灭菌结束后，放入4°C冰箱中备用。
[0052] (2)将针杆藻在CSI培养基中培养至对数期，备用。
[0053] (3)将（2)中的针杆藻进行饥饿培养Id(培养液为不含氮、憐、娃、铁的CSI培养 基），备用。
[0054] (4)将经过饥饿培养的针杆藻4000r/min离屯、lOmin，弃上清后分别接种到装有 LXS培养液（试验组）和CSI培养液（对照组）的锥形瓶中，接种量为0. 33X105cells/mL， 然后用封口膜封口。
[00巧](5)将锥形瓶移入光照培养箱中，设定溫度为将30°C，光照强度为30001X，光暗比 为1化：1化；
[0056] (6)每隔化振摇锥形瓶一次。W上所有器皿均需灭菌，操作均在超净工作台中进 行。
[0057] (7)每2d取样于显微镜下观察计数。
[005引所述的针杆藻为Syne化aFACHB-l131，购自中科院水生生物研究所藻种库。
[0059]经过lid培养，试验组细胞密度可达8. 52X105cells/ml。
【主权项】
1. 一种淡水针杆藻培养液，包括： 4水硝酸钙 135~150mg/L 硝酸钾 90~100mg/L 7水硫酸镁 35~40mg/L 5水β-甘油磷酸钠 25~30mg/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 400~500mg/L 9水偏硅酸钠 150~200mg/L 6水氯化铁 3. 5~4mg/L 乙二胺四乙酸二钠 4~4.5mg/L 4水合氯化锰 0· 25~0· 35mg/L 7水氯化锌 25~30ug/L 2水合钼酸钠 20~24ug/L 6水氯化钴 7~12ug/L 维生素B12 0. 05~0.lug/L 维生素Η 0. 05~0.lug/L 维生素B1 5~10ug/L 其余为双蒸水，培养液的pH范围是7. 5~8。2. 利用权利要求1所述培养液培养针杆藻的方法，包括： 将经过饥饿培养的针杆藻3000~4000r/min离心5~10min，弃上清后接种至权利要求1 所述培养液中，25~30°C，光照强度为3000~50001x，光暗比为12h~14h: 10h~12h，每隔3h振 摇锥形瓶一次。
【专利摘要】本发明公开了一种淡水针杆藻培养液及培养方法，本发明所公开的培养液，配方组分简单易得，根据淡水针杆藻生长的营养盐、温度、pH值等的需求特性，可以有效地促进针杆藻的快速分裂增殖，促进其更好地吸收利用各种营养物质，加快针杆藻细胞的新陈代谢，提高其生产量，达到促进纯种淡水针杆藻快速生长的目的。将该培养液结合本发明提供的培养方法，培养方法操作简单，针对性强，适应淡水针杆藻的快速生长，具备广泛的市场前景，特别适合于在水产养殖领域推广应用。
【IPC分类】C12N1/12, C12R1/89
【公开号】CN105368714
【申请号】CN201510975086
【发明人】李晓莉, 李谷, 陶玲
【申请人】中国水产科学研究院长江水产研究所
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月22日