(d，J = 8. 4Hz，2H)，7. 62-7. 59 (d，J =8. 4Hz，2H) 6. 40-6. 32 (m，4H)，5. 60 (brs，1H)，4. 30 (m，4H) ·
[0040] 实施例6制备N-{7-甲氧基-6-[2-(1-吡咯-2-基）羟乙基]喹唑啉-4 基} -4-N- [ (4-硝基苯基）甲基]苯-1，4-二胺（化合物6)
[0041] 将2. 2g 4-氯-7-甲氧基-6-[(l-吡咯-2-基）羟乙基]喹唑啉（化合物3)，L 76g N-[ (4-硝基苯基）甲基]苯-1，4-二胺（化合物5)，溶解于45mL正丁醇，置于100mL圆底 烧瓶中，滴加〇. OlmL三氟乙酸，75°C油浴搅拌1. 5小时。冰浴冷却至室温，滴加碳酸钠溶液 调整pH到9,反应液用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗2次。分出有 机层在250mL三角瓶中加入无水硫酸钠干燥6小时，减压过滤。滤液减压浓缩至干，经柱层 析得到〇. 970g (产率26% )化合物6,为黄色粉末。
[0042] 对制备的化合物6进行ESI-MS、i-NMR标准，结果如下：
[0043] ESI-MS(m/z) :511[M+H]+; 匪R(300MHz，DMS0-d6, ppm) : δ 10. 70(s，1H)， 9· 24 (s，1Η)，8· 28 (s，1Η)，8· 22-8. 19 (d，J = 8· 7Hz，2Η)，7· 77 (s，1Η)，7· 66-7. 63 (d，J = 8.7Hz，2H)，7.31-7.28(d，J = 8.7Hz，2H)，7.12(s，lH)，6.65(s，lH)，6.58-6.55(d，J = 9. 0Hz，2H)，6. 43-6. 39(t，J = 6. 0Hz，1H)，5. 94-5. 92(t，J = 2. 4Hz，2H)，4. 45-4. 43(d，J = 6. 0Hz，1H)，4. 26-4. 21(t，J = 7. 8Hz，3H)，3. 92(s，3H)，3. 12-3. 09(t，J = 7. 8Hz，2H).
[0044] 实验例9化合物6抗肿瘤细胞增殖活性评价。
[0045] (1)受试样品：
[0046] 本发明的化合物6均用含0. 1 % DMS0的培养基配制成所需浓度。
[0047] (2)细胞株：
[0048] A549 (人非小细胞肺癌细胞，ATCC :CRM-CCL-185)、MCF-7 (人乳腺癌细胞，ATCC : HTB-22)、HT-29(人结肠癌细胞，ATCC :HTB-38)三株肿瘤细胞均购自美国标准菌种收藏所 (ATCC)〇
[0049] (3)主要仪器及材料
[0050] 超纯水仪：MILLIP0RE Direct-Q 3 ;
[0051] 高压灭菌锅：HVE-50, Hirayama 公司；
[0052] 数显恒温水浴锅：HH-4,国华电器有限公司；
[0053] 超净台：VS-1300-U洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；
[0054] 细胞孵育箱：HF151UVC02培养箱，上海力申公司；
[0055] 低温离心机：上海安亭科学仪器厂
[0056] 酶标仪：ELx800, Biotek 公司
[0057] 平板振荡器：ZD-9556,太仓市科教器材厂；
[0058] 96孔细胞培养板、25cm2培养瓶：Corning Costar公司；
[0059] 2mL 冻存管：Corning Costar 公司；
[0060] (4)主要试剂
[0061] DMEM 培养基：Gibco 公司；
[0062] PBS 缓冲液：Gibco 公司；
[0063] 胎牛血清：Gibco公司；
[0064] 0.25%膜酶溶液：办(31〇116公司；
[0065] MTT(四噻唑蓝）：Sigma公司，溶于PBS溶液中，制成5mg/mL的溶液，过滤除菌后 使用，避光保存；
[0066] 阿霉素（ADR):北京华丰联合技术有限公司。
[0067] DMS0 :二甲基亚楓，Sigma 公司；
[0068] (5)试验方法
[0069] 三种细胞均选用DMEM培养基。培养基中均含10%灭火的胎牛血清和80U ·ιΛ 1青 霉素和0· 08mg · mL 1链霉素。
[0070] 将生长状态良好、处于对数生长期的MCF-7、A549、HT-29细胞按1 X 104个/mL的 密度接种于96孔板，每孔100 μ 1。置于37°C、5% C02培养箱中培养12小时待贴壁。加药 细胞孔按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的溶于培养基的化合物6,每孔200 μ 1，空 白细胞孔加入等体积的培养基，对照细胞孔按预设的浓度梯度加入等体积溶于培养基的阿 霉素（ADR)，平行6孔。在37°C、5%C02培养箱中培养48小时后，每孔加入10μ1浓度为 5mg/mL的ΜΤΤ溶液，继续置于37。。、5% C02培养箱中培养4小时。小心吸出上清液，每孔 加入150 μ 1 DMS0溶解紫色残留物（甲瓒），平板振荡10分钟使沉淀全部溶解，于酶标仪上 测定〇· D.值f吸光度），波长570nm〇
[0071 ] 按照公式"相对生存率=(D含药-D空白）AD对照-D空白）X 100% "计算每一 个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率。
[0072] 实验平行重复3次，以抑制率对化合物浓度作图，计算本发明化合物6的IC5。（半 数有效抑制浓度）值。同时采用阿霉素（ADR)作为阳性对照药物。
[0073] (6)实验结果
[0074] 表1化合物6LU1504抗肿瘤细胞增殖活性（IC5Q± SD μ M)
[0076] 如表1所示，给出了化合物6抗肿瘤细胞增殖活性的测试结果，结果表明所制备的 新型喹唑啉衍生物对上述肿瘤细胞具有抑制作用，可用于制备抗肿瘤制剂。
【主权项】
1. 一种新型喹唑啉衍生物LU1504,其化学命名为N- {7-甲氧基-6- [2- (1-吡咯-2-基） 羟乙基]喹唑啉-4基}-4-N-[ (4-硝基苯基）甲基]苯-1，4-二胺，及该化合物的药学上 可接受的盐、溶剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物。2. 权利要求1所述的新型喹唑啉衍生物LU1504的制备方法，其特征在于，包括如下步 骤： 51 :在氮气保护下，将吡咯溶解于四氢呋喃，冰浴下缓慢滴加EtMgBr乙醚溶液，搅拌30 分钟~2小时，反应液0~60°C搅拌30分钟~2小时，0~60°C加入溴乙酸甲酯搅拌30分 钟~2小时，生成化合物（1)，即2-(1-吡咯-2-基）乙酸酯； 52 :在氮气保护下，将化合物（1)溶解于四氢呋喃，冰浴下边搅拌边分批加入LiAlH430 分钟以上，得到还原产物化合物（2)，即2-(1-吡咯-2-基）乙醇； 53 :在氮气保护下，将化合物（2)与4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇、PPh3溶解于四氢 呋喃，在冰浴下边搅拌边分批加入DTAD，反应6小时以上，生成化合物（3)，即4-氯-7-甲 氧基-6-[2-(1-吡咯-2-基）羟乙基]喹唑啉； 54 :将N-(4-氨基苯基）乙酰胺、1-溴甲基-4-硝基苯和碳酸钾以四氢呋喃溶解，60~ 120°C搅拌反应4~12小时，生成化合物（4)，即N-{[4-(4-硝基苯基）甲基]氨基苯基} 乙酰胺； 55 :以乙醇盐酸混合溶剂，加入化合物（4)，60~120°C搅拌3~12小时，进生成化合 物（5)，即N-[ (4-硝基苯基）甲基]苯-1，4-二胺； 56 :将化合物⑶和化合物（5)溶于正丁醇，滴加三氟乙酸，60~120°C搅拌反应1~ 6小时，生成化合物（6)，即N-{7-甲氧基-6-[2-(l-吡咯-2-基）羟乙基]喹唑啉-4 基}-4-N-[(4-硝基苯基）甲基]苯-1，4-二胺。3. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物LU1504的制备方法，其特征在于，步骤S1 中，EtMgBr乙醚溶液的浓度为3M，滴速为5~10ml/min，EtMgBr乙醚、溴乙酸甲酯、四氢呋 喃、吡咯的用量比为100~500mL: 20~50g: 250~1000ml: 20~50g;步骤S2中， LiAlH4的用量为每克化合物（1)加入0· 25~2g。4. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物LU1504的制备方法，其特征在于，步骤S3 中，所述的DTAD分3~6批加入，间隔2~4小时/次，其中，4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-醇、 PPh3、DTAD、化合物⑵的摩尔用量比为1 : 1 : 1 : 0. 8~1.4。5. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物LU1504的制备方法，其特征在于，步骤S4 中，N-(4-氨基苯基）乙酰胺、1-溴甲基-4-硝基苯和碳酸钾的摩尔用量比为1 : 1 : 0.3~ 3〇6. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物LU1504的制备方法，其特征在于，步骤S5 中，乙醇和盐酸的体积比为0. 5~2. 5。7. 根据权利要求2所述的新型喹唑啉衍生物LU1504的制备方法，其特征在于，步骤S6 中，化合物（5)、化合物（3)、三氟乙酸的摩尔用量比为1 : 1 : 0.01~0.2。8. -种药物组合物，包括上述权利要求1中所述的化合物和药学上可接受的载体。9. 权利要求1所述的化合物，或者权利要求8所述的药物组合物在制备药剂中的用途。10. 权利要求1所述的新型喹唑啉衍生物LU1504或者该化合物的药学上可接受的盐、 溶剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物在制备抗肿瘤剂中的 应用。11.权利要求1所述的新型喹唑啉衍生物LU1504或者该化合物的药学上可接受的盐、 溶剂化物或者药物前体或者立体异构体或者互变异构体或者代谢物与一种或多种抗癌药 剂结合在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种新型喹唑啉衍生物LU1504及其制备方法，其化学命名为N-{7-甲氧基-6-[2-(1-吡咯-2-基)羟乙基]喹唑啉-4基}-4-N-[(4-硝基苯基)甲基]苯-1，4-二胺。本发明的喹唑啉衍生物及其药学上可接受的盐、溶剂化物和水合物对MCF-7、A549、HT-29具有优秀的抗肿瘤体内外活性，在制备抗肿瘤药物上具有较好的应用前景。
【IPC分类】A61K31/517, C07D403/12, A61P35/00
【公开号】CN105399733
【申请号】CN201510875007
【发明人】卢光明, 张卓立, 潘璟
【申请人】中国人民解放军南京军区南京总医院
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月3日