一种稳定、抗干扰能力强的血清钾检测试剂及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及血清钾检测技术领域，特别涉及一种血清钾检测试剂，还涉及使用此 检测试剂的检测方法。
【背景技术】
[0002] 钾（potassium，K)是人体内维持细胞生理活动的主要阳离子，在保持机体的正 常渗透压及酸碱平衡、参与糖及蛋白代谢、保证神经肌肉的正常功能等方面具有重要作用。 钾离子大部分（98%)存在于细胞内，少量存在于细胞外液，且浓度恒定。正常人血清中含K+ 约4~5mmol/L。体内的钾离子经常不断地在细胞内与体液之间相互交换，以保持动态平 衡。血清钾、钠、氯测定是临床常见的组合检测项目之一，有助于水、电解质平衡和酸碱平衡 紊乱的判断。
[0003] 目前，钾离子检测方法主要有离子选择电极法（ISE)、火焰光度法和酶法。其中 离子选择电极法（ISE)和酶法在临床上最为常用。ISE法具有标本用量少，可与自动生化 分析仪组合，快速准确，重复性好等优点。但该法电极具有一定寿命，需要定期更换，费用较 高。而酶法的精密度和准确度可以与火焰光度法接近，且具有简便、精确、重复性好、特异性 强、血清用量少等优点，但存在稳定性较差，易受干扰等缺点。
[0004] 鉴于此，本发明在酶法的基础上优化反应体系，添加稳定剂聚乙二醇6000、甘露 醇、海藻糖、BSA、乙二醇等可有效提高试剂的稳定性；并且通过引入辅酶NADH再生系统，可 以有效降低NADH的氧化，大大增强试剂稳定性。优选的新型非离子表面活性剂烷基糖苷 (APG)的加入可防止反应体系浑浊，增强底物的稳定性，提高试剂的抗干扰能力。该试剂操 作简便快速，适用于自动化分析，是一种更加稳定、抗干扰能力强的血清钾（K)试剂。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种用于检测血清钾（K)的试剂及使用该试剂检测血清钾 含量的方法。该试剂盒采用酶法，可以有效检测血清钾的含量，抗干扰能力强，稳定性好等 优点。
[0006] 基本原理： 通过钾依赖性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP)的酶动力学反应检测钾， 其产物丙酮酸盐在乳酸脱氢酶（LDH)作用下与NADH反应生成NAD+，其在340nm的吸光值 下降与钾浓度呈比例。
[0007]
并且，本试剂引入辅酶NADH再生系统，通过添加少量的的甲酸脱氢酶，可以在不干扰 主体反应的前提下，将氧化态NAD+转化还原态NADH，使反应底物NADH在试剂存储过程中可 以始终保持稳定，显著提高了试剂的稳定性。
[0008]
本发明是通过以下步骤得到的： 一种血清钾检测试剂，包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组成如下： 试剂R1中含有 缓冲液........................................200mmol/L, 穴合齐U........................................14mmol/L, PEP...........................................4mmol/L, ADP...........................................3. 5mmol/L, 甲酉爱..........................................0. 2mmol/L, 甲酸脱氢酶.....................................100U/L， α-酮戊二酸....................................3mmol/L， NADH..........................................0· 35mmol/L， GLDH(谷氨酸脱氢酶）..............................12KU/L， 聚乙二醇 6000...................................10g/L， 乙二醇.........................................5ml/L， 甘露醇.........................................20g/L， 海藻糖.........................................l〇g/L, BSA............................................3g/L， PK(丙酮酸激酶）..................................2KU/L， 烷基糖苷（APG)...................................lg/L， 防腐齐U.........................................lml/L； 2)试剂R2的组分为： 缓冲液.........................................20mmol/L， 聚乙二醇 6000...................................10g/L， 乙二醇.........................................5ml/L， 甘露醇.........................................20g/L， 海藻糖.........................................l〇g/L, BSA.............................................3g/L， LDH(乳酸脱氢酶）..................................65KU/L， 烷基糖苷（APG)....................................lg/L， 防腐齐U..........................................lml/L。
[0009] 所述的血清钾检测试剂，试剂R1中缓冲液为25°C，pH为8. 2的Tris缓冲液。
[0010] 所述的血清钾检测试剂，试剂R2中缓冲液为25°C，pH为9. 0的Tris缓冲液。
[0011] 所述的血清钾检测试剂，所述防腐剂为Proclin300。
[0012] 所述的血清钾检测试剂来检测血清钾含量的检测方法，使用全自动生化分析仪利 用固定时间法进行测定，检测主波长为340nm。
[0013] 所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
[0014] 本发明的有益效果： 1) 优化反应体系并添加聚乙二醇6000、甘露醇、海藻糖、BSA、乙二醇等多种稳定剂，可 以显著改善了试剂的稳定性和抗干扰能力； 2) 采用新型非离子表面活性剂烷基糖苷（APG)的加入可防止反应体系浑浊，增强底物 的稳定性，提高试剂的抗干扰能力。
[0015] 3)引入辅酶NADH再生系统，通过添加少量的的甲酸脱氢酶，可以在不干扰主体反 应的前提下，将氧化态NAD+转化还原态NADH，使反应底物NADH在试剂存储过程中可以始终 保持稳定，显著提高了试剂的稳定性。
[0016] 4)试剂的准确度和稳定性良好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。
【附图说明】
[0017] 图1为两种试剂的相关性曲线图， 图2为两种试剂效期稳定性曲线图。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明： 实施例1 血清钾的检测试剂，包试剂R1和试剂R2 : 1)其R1的组成为： Tris(三羟甲基氨基甲烷）缓冲液（pH=8. 2,25°C) ............200mmol/L 穴合齐U............................................14mmol/L, PEP...............................................4mmol/L, ADP...............................................3. 5mmol/L, 甲酉爱..............................................0. 2mmol/L, 甲酸脱氢酶.........................................100U/L， α_ 酮戊二酸.......................................3mmol/L， NADH..............................................0· 35mmol/L， GLDH(谷氨酸脱氢酶）..................................12KU/L， 聚乙二醇6000.........................................10g/L， 乙二醇...............................................5ml/L， 甘露醇..............................................20g/L， 海藻糖............................................l〇g/L, BSA...........................