LC 分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254薄层板，展开剂为体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混 合液；
[0034] 2)取步骤1)TLC中Rf值为0·5的组分，合并共250mg，取230mg进行反相固相萃取 分离，采用3根瓦里安BondElutC18固相萃取柱（每根柱体积60ml)相互并联，Mediwax 12管或24管真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇-水混合液作为洗脱液，依次按100%水 -30%甲醇一70%甲醇一100%甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3~5个柱体积，收集各 梯度的洗脱液，得到100%水组分、30%甲醇组分、70%甲醇组分、100%甲醇组分；
[0035] 3)取步骤2)中得到的30%甲醇组分，浓缩至干，得到粗品lOOmg;
[0036] 4)取步骤3)中得到的粗品lOOmg，用甲醇配置成lmg/ml，采用HPLC进行纯 化；HPLC条件为：岛津高效液相色谱仪制备系统；固定相：HPLC半制备柱YMC0DS-A， 20X250mm，柱内径5μπι;流动相：50%甲醇；流速：8ml/min;溶液传输单元：LC-6AD;进样 器：SIL-10AP;进样量：1ml;检测器：光电二极管阵列检测器SPD-M20A;检测波长：210nm和 220nm;收集25min大峰出现时的洗脱液，浓缩，即得所述之黑麦草内酯25mg。
[0037] 将得到的黑麦草内酯用HPLC进行纯度分析：岛津NexeraX2高效液相色谱系统； 固定相：Shim_packXR-0DSIII，20X75mm，柱内径 1. 6μm;流动相：50% 甲醇；流速：0· 2ml/ min;柱温：40°C;进样量：0. 5μ1 ;检测器：光电二极管阵列检测器SPD-M20A;检测波长： 220nm。经检测，本实施例中得到的黑麦草内酯纯度为95%，HPLC分析谱图如图1所示。
[0038] 本实施例中得到的黑麦草内酯的MS数据：ESI源，分子离子峰为196. 2460,碎片峰 为196. 05,如图2所示。
[0039] 本实施例中得到的黑麦草内酯的NMR数据：
[0040] NMR (600MHz, MeOD)δ5. 75 (1H, S, H-3), 4. 21 (1H,m,H-6), 2. 42 (1H, dt,J =13. 6, 2.0Hz H-7a), 1. 97(1H, dt,J=14. 3), 1. 73 (3H, s, H-10), 1. 52 (1H, dd,J= 14. 3, 3. 6Hz,H-5b), L 46(3H, s,H-8), L 27(3H, s,H-9)。虫谱谱图如图3所示。
[0041]13CNMR(151MHz,MeOD)δ184. 3, 174. 3, 112. 6, 89. 1, 67. 28, 48. 1, 46. 16, 36. 9, 30. 8,27. 4,26. 7。13C谱谱图如图4所示。
[0042] 实施例2
[0043] 1)取湿重5kg的皱瘤海鞘，阴干，切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1. 25倍体积的乙 醇，置均质机中破碎后，置于5L烧杯中，浸提7d且浸提过程中每天超声振动提取lh以加速 提取，浸提液取出备用；重新加入1. 25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程中每天超声振动 提取lh以加速提取，浸提液取出备用；再次加入1. 25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程中 每天超声振动提取lh以加速提取，浸提液取出备用；三次得到的的浸提液相互合并，以旋 转蒸发仪蒸发回收溶剂，即得乙醇粗提物62g;向乙醇粗提物中加入甲醇直至溶剂呈无色， 过滤，除去不溶性杂质如盐类等，滤液用旋转蒸发仪蒸发回收溶剂并浓缩至25ml，得到粗提 物溶液；按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:6的比例量取正相硅胶进行柱层析；本实施 例之中，所述正相硅胶为SY01，100~200目，用量为300g;以二氯甲烷-甲醇混合液作为 洗脱液，依次按100%二氯甲烧一1 %甲醇一10%甲醇一50%甲醇一100%甲醇进行梯度 洗脱，每一梯度洗脱3~5个柱体积，分别收集每个柱体积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC分 离；所述TLC分离条件为：硅胶G254薄层板，展开剂为体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混合 液；
[0044] 2)取步骤1)TLC中Rf值为0.5的组分，合并共124mg，进行反相固相萃取分离，采 用2根瓦里安Bond ElutC18固相萃取柱（每根柱体积60ml)相互并联，Mediwax12管或 24管真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇-水混合液作为洗脱液，依次按100%水一30% 甲醇一70%甲醇一100%甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3~5个柱体积，收集各梯度的 洗脱液，得到100%水组分、30%甲醇组分、70%甲醇组分、100%甲醇组分；
[0045] 3)取步骤2)中得到的30%甲醇组分，浓缩至干，得到粗品51mg;
[0046] 4)取步骤3)中得到的粗品51mg，用甲醇配置成lmg/ml，采用HPLC进行纯化；HPLC 条件为：岛津高效液相色谱仪制备系统；固定相：HPLC半制备柱YMC0DS-A，20X250mm，柱 内径5μπι;流动相：50%甲醇；流速：8ml/min;溶液传输单元：LC-6AD;进样器：SIL-10AP; 进样量：1ml;检测器：光电二极管阵列检测器SPD-M20A;检测波长：210nm和220nm;收集 25min大峰出现时的洗脱液，浓缩，即得所述之黑麦草内酯10.lmg。
[0047] 将得到的黑麦草内酯用HPLC进行纯度分析，HPLC条件同实施例1;经检测，本实施 例中得到的黑麦草内酯纯度为95. 7%。
[0048] 本实施例中得到的黑麦草内酯的MS数据、NMR数据同实施例1。
[0049] 实施例3
[0050] 1)取湿重10kg的皱瘤海鞘，阴干，切碎，向切碎后皱瘤海鞘中加入1. 25倍体积的 乙醇，置均质机中破碎后，置于5L烧杯中，浸提7d且浸提过程中每天超声振动提取lh以加 速提取，浸提液取出备用；重新加入1. 25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程中每天超声振 动提取lh以加速提取，浸提液取出备用；再次加入1. 25倍体积的乙醇，浸提3d且浸提过程 中每天超声振动提取lh以加速提取，浸提液取出备用；三次得到的的浸提液相互合并，以 旋转蒸发仪蒸发回收溶剂，即得乙醇粗提物125g;向乙醇粗提物中加入甲醇直至溶剂呈无 色，过滤，除去不溶性杂质如盐类等，滤液用旋转蒸发仪蒸发回收溶剂并浓缩至50ml，得到 粗提物溶液；按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:6的比例量取正相硅胶进行柱层析；本 实施例之中，所述正相硅胶为SY01，100~200目，用量为600g;以二氯甲烷-甲醇混合液 作为洗脱液，依次按100%二氯甲烧一1 %甲醇一10%甲醇一50%甲醇一100%甲醇进行梯 度洗脱，每一梯度洗脱3~5个柱体积，分别收集每个柱体积的洗脱液，浓缩至干，进行TLC 分离；所述TLC分离条件为：硅胶G254薄层板，展开剂为体积比10:1的二氯甲烷-甲醇混 合液；
[0051] 2)取步骤1)TLC中Rf值为0. 5的组分，合并共247mg，进行反相固相萃取分离，采 用3根瓦里安BondElutC18固相萃取柱（每根柱体积60ml)相互并联，Mediwax12管或 24管真空固相萃取装置，湿法上样，以甲醇-水混合液作为洗脱液，依次按100%水一30% 甲醇一70%甲醇一100%甲醇进行梯度洗脱，每一梯度洗脱3~5个柱体积，收集各梯度的 洗脱液，得到100 %水组分、30 %甲醇组分、70 %甲醇组分、100 %甲醇组分；
[0052] 3)取步骤2)中得到的30%甲醇组分，浓缩至干，得到粗品107mg ;
[0053]4)取步骤3)中得到的粗品107mg，用甲醇配置成lmg/ml，采用HPLC进行纯 化；HPLC条件为：岛津高效液相色谱仪制备系统；固定相：HPLC半制备柱YMC0DS-A， 20X250mm，柱内径5μπι;流动相：50%甲醇；流速：8ml/min;溶液传输单元：LC-6AD;进样 器：SIL-10AP;进样量：1ml;检测器：光电二极管阵列检测器SPD-M20A;检测波长：210nm和 220nm;收集25min大峰出现时的洗脱液，浓缩，即得所述之黑麦草内酯21mg。
[0054] 将得到的黑麦草内酯用HPLC进行纯度分析，HPLC条件同实施例1;经检测，本实施 例中得到的黑麦草内酯纯度为94. 8%。
[0055] 本实施例中得到的黑麦草内酯的MS数据、NMR数据同实施例1。
[0056] 本领域普通技术人员可知，当本发明的技术参数在如下范围内变化时，可以预期 得到与上述实施例相同或相近的技术效果：
[0057]-种从皱瘤海鞘中分离黑麦草内酯的方法，包括：
[0058] 1)取皱瘤海鞘，用乙醇浸提得到乙醇粗提物；乙醇粗提物用甲醇溶解后过滤，滤 液浓缩得到粗提物溶液，按粗提物溶液与正相硅胶体积比为1:4~8的比例，用100~200 目的正相硅胶进行柱层析；以二氯甲烷-甲醇混合液作为洗脱液，且依次按100%二氯甲烷 -0. 5~1. 5%甲醇一8~12%甲醇一45~55%甲醇一100