一种用于粪便标本产单核李斯特菌的选择培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及检验微生物培养领域，具体设及一种用于粪便标本产单核李斯特菌的 选择培养基。
【背景技术】
[0002] 微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来 促进或抑制一定类型的生物体(如细胞或细菌等)而设计的培养基，利用运种培养基可W将 所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。产单核李斯特菌化isteria monocytogenes) 是一种兼性厌氧细菌，广泛分布在自然环境中，如±壤、污水、饲料、动物、健康人及各种生 食和即食食品中，包括生肉及熟肉制品、速冻米面食品、奶酪、蔬菜、沙拉和海产品等，可引 起人类李斯特菌病，通常是由于人们食用被该菌污染的食物而引起。感染后主要临床表现 为发热、上呼吸道感染、肺炎、腹泻、血流感染、脑膜炎，或经由孕妇阴部感染腹中胎儿、引发 脑膜炎，甚至死亡。临床症状上与流感相似，容易误诊。
[0003] 近年来，李斯特菌病已不罕见，在新生儿、妊娠妇女、40岁W上及免疫功能受损的 人群中均可发生，尤其是妊娠妇女感染李斯特菌的风险是普通人群的30~100倍。早期诊断 并早期治疗，可100%治愈。若诊断延误，病死率可达20~30%，因此作为确诊唯一依据的临床 细菌检查的正确与快速鉴定极为重要。目前，该菌属的鉴定金标准为PCR鉴定，但是PCR检测 设备要求和操作成本均较高，因此临床培养多用膜酪腺大豆琼脂(TSA-YE)。但是产单核李 斯特菌培养阳性率低，主要是临床培养过程中该菌容易被认为是污染的杂菌(类白喉杆菌） 而遭丢弃，且粪便标本中的大肠杆菌、类白喉杆菌等在目前的培养基上比产单核李斯特菌 生长更快，很快覆盖了培养基，产单核李斯特菌无法生长，结果延误诊疗时间。
【发明内容】
[0004] 本发明的技术任务是针对W上现有技术的不足，提供一种适合于粪便标本产单核 李斯特菌的选择培养基。
[0005] 本发明解决其技术问题的技术方案是:一种适合于粪便标本产单核李斯特菌的选 择培养基，其特征为，配制1000ml培养基的配方中含有： 酵母浸出粉5~8g; 牛肉粉6~lOg; 酪蛋白腺6~lOg; 琼脂15~20g; 葡萄糖3~5g; 氯化钢5~5.5g; 葡萄糖酸锋0.01~〇.〇5g; 憐酸二氨钢1~3g; 光谷甘肤0.1~〇.5g; 多粘菌素0.001~0.005g; 杆菌肤0.001~0.003g; 无菌马血蛋白20~50g; 蒸馈水加至1000ml。
[0006] 上述培养基的制备方法为:称取酵母浸出粉、牛肉粉、酪蛋白腺、琼脂、葡萄糖、氯 化钢、憐酸二氨钢，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入;灭菌葡萄糖酸 锋；灭菌光谷甘肤；灭菌多粘菌素；灭菌杆菌肤；无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到 1000ml后分装。
[0007] 其中：所述的牛肉粉、酪蛋白腺、葡萄糖提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、 氨基酸、多肤、核巧酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为产单核李斯特菌的繁殖 和生长提供均衡的营养元素;氯化钢维持均衡的渗透压;琼脂为培养基的凝固剂;葡萄糖酸 锋为营养剂，发明人发现，在培养基中加入一定浓度的锋离子，目标菌的生长状态好于对照 组，因此推论锋离子有助于该菌的生长;憐酸二氨钢为缓冲剂，多粘菌素抑制革兰氏阴性菌 的生长;杆菌肤(Bacitracin),实验室研究表明杆菌肤可W抑制革兰阳性细菌和阴性球菌、 肺炎双球菌、葡萄球菌、淋球菌、脑膜炎双球菌等杂菌的生长，但该浓度下由于对李斯特菌 属无抗菌抑菌作用，因此提高了产单核李斯特菌的分离率。通过实验将同一产单核李斯特 菌接种到2个TSA-YE培养基上，其中一个TSA-YE培养基添加0.01%灭菌光谷甘肤于，37°C下 培养，48小时后观察菌株，发现添加光谷甘肤的TSA-YE培养基有小的产单核李斯特菌菌落， 没有添加光谷甘肤的TSA-YE培养基未发现产单核李斯特菌菌落，光谷甘肤可W降低氧化还 原电势，有利于细胞生长、分化;无菌马血蛋白提供能量环境；丫-径基精氨酸为激活剂，可 W促进产单核李斯特菌对矿物质的摄取;洋芹素为抑菌剂；山英肉为山荣英科植物山荣英 的果实，现代医学研究表明，山英肉含山荣英较毛，山荣英裂武，铁、侣、铜、锋、棚、憐等21种 元素，苏氨酸、鄉氨酸、亮氨酸等14种氨基酸，维生素 A，葡萄糖、果糖、薦糖、熊果酸、没食子 酸、苹果酸、酒石酸等糖类和有机酸类，山英肉水提液是良好的营养强化剂，并且对金黄色 葡萄球菌、奈氏卡他球菌、结核杆菌、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、脊髓灰质炎病毒等均有不 同程度的抑菌作用。
[0008] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、产单核李斯特菌分离率高的特点。
【具体实施方式】
[0009] W下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0010]实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 6g;琼脂15g;葡萄糖4g;氯化钢5g;憐酸二氨钢Ig;光谷甘肤0.3g;葡萄糖酸锋O.Olg;多粘 菌素 O.OOlg;杆菌肤0.003g;无菌马血蛋白20g，蒸馈水加至1000ml。制备方法:称取酵母浸 出粉、牛肉粉、酪蛋白腺、琼脂、葡萄糖、氯化钢、憐酸二氨钢，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌 15min，冷却到45°C，加入灭菌葡萄糖酸锋;灭菌光谷甘肤;灭菌多粘菌素;灭菌杆菌肤;无菌 马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。
[0011]实施例2,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉6g;酪蛋白腺 8g;琼脂15g;葡萄糖3g;氯化钢5g;憐酸二氨钢3g;光谷甘肤O.lg;葡萄糖酸锋0.05g;多粘 菌素0.003g;杆菌肤O.OOlg; 丫 -径基精氨酸0.1 g;无菌马血蛋白40g，蒸馈水加至100〇1111。审。 备方法:称取酵母浸出粉、牛肉粉、酪蛋白腺、琼脂、葡萄糖、氯化钢、γ-径基精氨酸、憐酸二 氨钢，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌葡萄糖酸锋;灭菌光谷甘 肤;灭菌多粘菌素;灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。 [00 12]实施例3,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉8g;酪蛋白腺 6g;琼脂18g;葡萄糖5g;氯化钢5.5g;憐酸二氨钢2g;光谷甘肤0.5g;葡萄糖酸锋0.03g;多粘 菌素0.005g;杆菌肤0 . OOlg;洋芹素0.03g;无菌马血蛋白50g，蒸馈水加至1000ml。制备方 法:称取酵母浸出粉、牛肉粉、酪蛋白腺、琼脂、葡萄糖、氯化钢、憐酸二氨钢、洋芹素，混匀蒸 馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌葡萄糖酸锋;灭菌光谷甘肤;灭菌多粘 菌素;灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。
[001引实施例4,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉6g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 8g;琼脂18g;葡萄糖4g;氯化钢5g;憐酸二氨钢2g;光谷甘肤O.lg;葡萄糖酸锋0.03g;多粘 菌素0.005g;杆菌肤0.002g;无菌马血蛋白30g; 200g化山英肉水提液200ml;蒸馈水加至 1000ml。制备方法：（1)取40g山英肉加水煮沸30min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩 或者加水调整体积到浓度为200g/L，得山英肉水提液200ml; (2)称取酵母浸出粉、牛肉粉、 酪蛋白腺、琼脂、葡萄糖、氯化钢、憐酸二氨