一种粪便标本李斯特菌培养用培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及检验微生物培养领域，具体设及一种用于粪便标本李斯特菌培养的培 养基。
【背景技术】
[0002] 微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来 促进或抑制一定类型的生物体(如细胞或细菌等)而设计的培养基，利用运种培养基可W将 所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。李斯特菌化isteria monocytogenes)为革 兰阳性杆菌，是一种兼性厌氧细菌，广泛分布在自然环境中，如±壤、污水、饲料、动物、健康 人及各种生食和即食食品中，可引起人类李斯特菌病，李斯特菌是一种细胞内寄生菌，多数 感染李斯特菌病的健康人没有症状或有自限性的流感样症状和胃肠道症状，如头痛、发热、 寒战、肌肉疼痛、腹痛、腹泻、恶屯、、呕吐等。部分患者会发展为神经系统感染(如脑膜炎、脑 膜脑炎、脑干脑炎等）、败血症及局灶感染(如屯、内膜炎、关节炎、肝炎、皮炎等)和菌血症等。 神经系统的感染可能造成后遗症。孕妇感染后多无症状或症状轻微，但可导致流产、死胎、 早产及严重的新生儿感染。
[0003] 近年来李斯特菌感染患者呈上升趋势，在新生儿、妊娠妇女、40岁W上及免疫功能 受损的人群中均可发生，尤其是妊娠妇女感染李斯特菌的风险是普通人群的30~100倍。早 期诊断并早期治疗，可100%治愈。若诊断延误，病死率可达20~30%，因此作为确诊唯一依据 的临床细菌检查的正确与快速鉴定极为重要。目前，该菌属的鉴定金标准为巧光定量PCR鉴 定，但是PCR检测设备要求和操作成本均较高，因此临床检验手段主要是革兰染色法，但有 1/3的李斯特菌无法阳性检出，而且如果要辨别李斯特菌的种类就需要细菌培养，并就其菌 落形态特征进行鉴别。目前培养多用膜酪腺大豆琼脂(TSA-YE)。但是李斯特菌培养阳性率 低，仅为36%左右，主要是临床培养过程中该菌容易被认为是污染的杂菌而遭丢弃，且标本 中的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌等在目前的培养基上比李斯特菌生长更快，很快 覆盖了培养基，李斯特菌无法生长，结果延误诊疗时间。
【发明内容】
[0004] 本发明的技术任务是针对W上现有技术的不足，提供一种适合于粪便标本李斯特 菌培养的培养基。
[0005] 本发明解决其技术问题的技术方案是：一种粪便标本李斯特菌培养用培养基，其 特征为，配制1000ml培养基的配方中含有： 酵母浸出粉5~8g; 牛肉粉6~lOg; 酪蛋白腺6~lOg; 琼脂15~20g; 葡萄糖3~5g; 氯化钢5~5.5g; 酵母锋0.01~〇.〇5g; 憐酸二氨钢1~3g; 丫-?基精氨酸0.1~〇.5g; N-乙酷-D-葡萄糖胺0.01~0.05g; 杆菌肤0.001~0.003g; 无菌马血蛋白20~50g; 蒸馈水加至1000ml。
[0006] 其中：所述的牛肉粉、酪蛋白腺、葡萄糖提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、 氨基酸、多肤、核巧酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为李斯特菌的繁殖和生长 提供均衡的营养元素；氯化钢维持均衡的渗透压；琼脂为培养基的凝固剂;酵母锋为营养 剂，发明人发现，在培养基中加入一定浓度的锋离子，目标菌的生长状态好于对照组，因此 推论锋离子有助于该菌的生长，同时母体酵母含微生物必需氨基酸含量丰富、配比合理，具 有促进细菌繁殖的功效;憐酸二氨钢为缓冲剂;N-乙酷基-D-葡萄糖胺是营养强化剂，基础 实验证实，将同一李斯特菌菌株接种到2个TSA-YE培养基上，其中一个TSA-YE配方中加入N-乙酷-D-葡萄糖胺0.05g/L，37°C下大气条件下培养，48小时后观察菌株，发现添加 N-乙酷-D-葡萄糖胺的TSA-YE培养基有小的李斯特菌菌落，没有添加 N-乙酷-D-葡萄糖胺的TSA-YE 培养基未发现李斯特菌菌落，N-乙酷-D-葡萄糖胺促进细胞生长、分化，是李斯特菌的生长 因子;杆菌肤(Bacitracin),实验室研究表明杆菌肤可W抑制革兰阳性细菌和阴性球菌、肺 炎双球菌、葡萄球菌、淋球菌、脑膜炎双球菌等杂菌的生长，但该浓度下由于对李斯特菌属 无抗菌抑菌作用，因此提高了李斯特菌的分离率。T-径基精氨酸为激活剂，可W促进李斯 特菌对矿物质的摄取;无菌马血蛋白提供能量环境。
[0007] 此外，光谷甘肤可W降低培养基氧化还原电势，促进细胞生长、分化，是李斯特菌 的生长促进剂。苍术酬抑制大肠杆菌、肠炎沙口菌、金黄色葡萄球菌、沙口氏菌、铜绿假单胞 等细菌生长，但该浓度下对李斯特菌菌落的生长没有影响；山英肉为山荣英科植物山荣英 的果实，现代医学研究表明，山英肉含山荣英较毛，山荣英裂武，铁、侣、铜、锋、棚、憐等21种 元素，苏氨酸、鄉氨酸、亮氨酸等14种氨基酸，维生素 A，葡萄糖、果糖、薦糖、熊果酸、没食子 酸、苹果酸、酒石酸等糖类和有机酸类，山英肉水提液是良好的营养强化剂，并且对金黄色 葡萄球菌、奈氏卡他球菌、结核杆菌、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、脊髓灰质炎病毒等均有不 同程度的抑菌作用。
[0008] 本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、李斯特菌分离率高的特点。
【具体实施方式】
[0009] W下结合实际情况，对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0010]实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 6g;琼脂15g;葡萄糖4g;氯化钢5g;憐酸二氨钢Ig; 丫 -径基精氨酸0.3g;酵母锋0.0Ig;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.0 lg;杆菌肤0.003g;无菌马血蛋白20g，蒸馈水加至1000ml。制备方法:称 取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐酸二氨钢；γ -径基精氨酸;酵母 锋，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌Ν-乙酷-D-葡萄糖胺;灭菌杆 菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。
[0011]实施例2,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉6g;酪蛋白腺 8g;琼脂15g;葡萄糖3g;氯化钢5g;憐酸二氨钢3g; 丫 -径基精氨酸0.1 g;酵母锋0.05g;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.03g;杆菌肤O.OOlg;光谷甘肤0.1 g;无菌马血蛋白40g，蒸馈水加至 1000ml。制备方法:称取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐酸二氨钢； T-径基精氨酸;酵母锋，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌光谷甘 肤;灭菌N-乙酷-D-葡萄糖胺;灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后 分装。
[0012]实施例3,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉5g;牛肉粉8g;酪蛋白腺 6g;琼脂18g;葡萄糖5g;氯化钢5.5g;憐酸二氨钢2g; 丫 -?基精氨酸0.5g;酵母锋0.03g; N-乙酷-D-葡萄糖胺0.05g;杆菌肤O.OOlg;苍术酬0.003g;无菌马血蛋白50g，蒸馈水加至 1000ml。制备方法:称取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐酸二氨钢； 丫-径基精氨酸;酵母锋;苍术酬，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到45°C，加入灭 菌N-乙酷-D-葡萄糖胺;灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。 [00 1引实施例4,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉6g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 8g;琼脂18g;葡萄糖4g;氯化钢5g;憐酸二氨钢2g; 丫 -径基精氨酸0.1 g;酵母锋0.03g;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.05g;杆菌肤0.002g;无菌马血蛋白30g; 200g化山荣英肉水提液200ml;蒸 馈水加至1000ml。制备方法：（1)取40g山荣英肉加水煮沸30min，过滤，取滤液，根据滤液体 积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得