山荣英肉水提液200ml ;(2)称取酵母浸 出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐酸二氨钢；γ -径基精氨酸;酵母锋，溶于 步骤（1)所得的山荣英肉提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌Ν-乙酷-D-葡萄糖胺;灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。
[0014]实施例5,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉6g;牛肉粉6g;酪蛋白腺 8g;琼脂20g;葡萄糖3g;氯化钢5.5g;憐酸二氨钢3g; 丫 -?基精氨酸0.5g;酵母锋0.0 lg;N-乙酷-D-葡萄糖胺0.0 Ig;杆菌肤0.003g;光谷甘肤0.3g;苍术酬0.0 Olg;无菌马血蛋白40g， 蒸馈水加至1000ml。制备方法:称取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢； 憐酸二氨钢；T-径基精氨酸;酵母锋;苍术酬，混匀蒸馈水溶解，210°C，灭菌15min，冷却到 45°C，加入灭菌光谷甘肤;灭菌N-乙酷-D-葡萄糖胺；灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌 蒸馈水定容到1000ml后分装。
[001引实施例6,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉8g;牛肉粉8g;酪蛋白腺 lOg;琼脂20g;葡萄糖3g;氯化钢5.5g;憐酸二氨钢3g; 丫 -径基精氨酸0.5g;酵母锋0.0 lg; N-乙酷-D-葡萄糖胺0.0 lg;杆菌肤0.003g;光谷甘肤0.5g;无菌马血蛋白50g;浓度200g化的 山荣英肉水提液250ml;蒸馈水加至1000ml。制备方法：（1)取50g山荣英肉加水煮沸45min， 过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得山荣英肉水 提液250ml ;(2)称取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐酸二氨钢；丫-径基精氨酸;酵母锋，溶于步骤(1)所得的山荣英肉提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷却到 45°C，加入灭菌光谷甘肤;灭菌N-乙酷-D-葡萄糖胺；灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌 蒸馈水定容到1000ml后分装。
[0016]实施例7,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉8g;牛肉粉8g;酪蛋白腺 lOg;琼脂15g;葡萄糖4g;氯化钢5g;憐酸二氨钢3g; 丫 -?基精氨酸ο. 3g;酵母锋ο. 03g;N-乙 酷-D-葡萄糖胺0.03g;杆菌肤0.0 Olg;苍术酬0.005g;无菌马血蛋白20g;浓度200g化的山荣 英肉水提液300ml;蒸馈水加至1000ml。制备方法：（1)取60g山荣英肉加水煮沸60min，过滤， 取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L，得山荣英肉水提液 300ml; (2)称取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐酸二氨钢；丫-径基 精氨酸;酵母锋;苍术酬，溶于步骤（1)所得的山荣英肉提取液中混匀，210°C灭菌15min，冷 却到45°C，加入灭菌N-乙酷-D-葡萄糖胺;灭菌杆菌肤;无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容 到lOOOml后分装。
[0017]实施例8,配制1000ml培养基的配方中含有:酵母浸出粉8g;牛肉粉lOg;酪蛋白腺 6g;琼脂18g;葡萄糖3g;氯化钢5.5g;憐酸二氨钢2g; 丫 -径基精氨酸0.3g;酵母锋0.0 lg;N-乙酷-D-葡萄糖胺0.05g;杆菌肤0.00 Ig;光谷甘肤0.3g;苍术酬0.003g;无菌马血蛋白30g; 浓度200g化的山荣英肉水提液250ml;蒸馈水加至1000ml。制备方法：（1)取60g山荣英肉加 水煮沸60min，过滤，取滤液，根据滤液体积，采取浓缩或者加水调整体积到浓度为200g/L， 得山荣英肉水提液300ml; (2)称取酵母浸出粉;牛肉粉;酪蛋白腺;琼脂;葡萄糖;氯化钢;憐 酸二氨钢；丫-径基精氨酸;酵母锋;苍术酬，溶于步骤（1)所得的山荣英肉提取液中混匀， 210°C灭菌15min，冷却到45°C，加入灭菌光谷甘肤;灭菌N-乙酷-D-葡萄糖胺;灭菌杆菌肤； 无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馈水定容到1000ml后分装。
[0018] 所述山荣英肉水提液浓度200g/L指的是每升含有生药200g。
[0019] 本发明所得李斯特菌选择培养基用于粪便标本，具有检出可靠、李斯特菌分离率 高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。
[0020] 1对象与方法。
[002。 1.1培养基制备:实验组共设4组，分别为实施例1方案组;实施例2方案组、实施例6 方案组、实施例8方案组，对照组为膜酪腺大豆琼脂(TSA-YE)培养基，每升中含有：蛋白腺 17. Og;多价腺3. Og;氯化钢5. Og;憐酸氨二钟2.5g;葡萄糖2.5g;琼脂15.0。
[0022] 1.2粪便样本处理、培养方法：Π 诊或住院疑似李斯特菌病腹泻患者(①腹疼、腹泻 症状;②老人、孕妇或免疫缺陷背景;③或伴有感冒样症状、发热、寒战）113例，取患者新鲜 粪便，悬浮于5ml0.9%生理盐水，用接种环分区划线接种于实施例1方案组;实施例2方案组； 实施例6方案组;实施例8方案组和对照组培养基。接种好的培养基，35°C大气条件下保溫培 养4她，挑取细小菌落进行菌属鉴定。各样本编号送检PCR做分子生物学鉴定。
[0023] 1.3检出阳性标准:取出培养皿，依据《临床微生物学诊断与图解》进行目标菌选择 及鉴定:观察菌落生长情况，挑选目标菌涂片，革兰氏染色，显微镜镜检。判断最终结果金标 准为巧光定量PCR结果。
[0024] 2结果：113份患者粪便标本检出菌落经巧光定量PCR最后鉴定为李斯特菌阳性的 为15例。4化各组检出阳性、假阳性、阴性、假阴性菌株例数见下表，
上述结果可W看出，培养48小时后，各实施例组与对照组阳性检出率比较均具有明显 差异(P<0.05)，且各实施例组的假阴性率均低于对照组，具有极明显差异(P<0.001)。对照 组阳性检出结果与PCR检测结果比较，阳性检出率差异巨大^ 2=6.95，？<0.01)，而各实施例 组与PCR检测结果比较，阳性检出率差异无统计学意义(P〉0.05)。
[0025] W上结果表明，粪便标本经过本发明实施例培养基培养后，李斯特菌阳性率与PCR 检测差异无统计学差异，且分离率明显高于现有的培养基，普通TSA-YE培养基选择性不足， 粪便中杂菌迅速生长覆盖培养基影响李斯特菌的阳性生长，本发明培养基可W尽量准确的 菌株阳性率，李斯特菌检出可靠，阳性分离率高，从而缩短确诊时间。
【主权项】
1. 一种粪便标本李斯特菌培养用培养基，其特征在于配制1000ml培养基的配方中含 有： 酵母浸出粉5~8g; 牛肉粉6~10g; 酪蛋白胨6~10g; 琼脂15~20g; 葡萄糖3~5g; 氯化钠 5~5.5g; 酵母梓〇 · 〇 1~〇 · 〇5g; 磷酸二氢钠 1~3g; γ -羟基精氨酸〇. 1~〇.5g; N-乙酰-D-葡萄糖胺0.01~0.05g; 杆菌肽0.001~0.003g; 无菌马血蛋白20~50g; 蒸馏水加至1000ml。
【专利摘要】本发明公开了一种粪便标本李斯特菌培养用培养基。属于检验微生物培养领域，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉、牛肉粉、酪蛋白胨、琼脂、葡萄糖、氯化钠、酵母锌、磷酸二氢钠、γ-羟基精氨酸、N-乙酰-D-葡萄糖胺、杆菌肽、无菌马血蛋白，蒸馏水加至1000ml。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠，李斯特菌分离率高的特点。
【IPC分类】C12Q1/04
【公开号】CN105506056
【申请号】CN201610080207
【发明人】刘名霞
【申请人】刘名霞
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2016年2月5日