一种组合物及其应用、含有该组合物的稳定剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，特别设及一种组合物及其应用、含有该组合物的稳定 剂。
【背景技术】
[0002] 蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分子物质，易受外界条件的影响发生 变性。蛋白质稳定性与组成中的氨基酸种类有关系，最常见的是半脫氨酸，蛋白质对溶液 pH、空气中的氧等外界因素都较为敏感，容易发生结构的转变，影响活性。
[0003] 巧调憐酸酶(化1C i neur i η, CN)是目前所知唯--种依赖化2 YCaM (巧调素）的蛋白 憐酸酶，由A，B亚基W1:1的比例组成。A亚基(CNA)是催化亚基，B亚基(CNB)是调节亚基。CN 在免疫激活通路中发挥重要作用，示T细胞活化的关键没。CN作为大分子酶蛋白，易失活，不 稳定，而CNB作为该酶的调节亚基，能促进CNA的活性，且相对分子质量小，性质稳定。由研究 表明CNB能刺激T细胞和NK细胞增殖W及增强NK细胞的杀伤活性，增强巨隧细胞吞隧能力等 免疫功能，且重组人巧调憐酸酶B亚基（Recombinant human Calcineurin B subunit, rhCNB)是开发中的基因工程创新肿瘤药物。
[0004] rhCNB具有明显的杀伤肿瘤细胞的作用，单体是一种含有两个琉基结构的蛋白，在 生产、放置等过程中，易受溫度、水分、pH值、光照、氧化等因素影响形成二聚体、Ξ聚体等多 聚体结构，造成各组分比例不稳定，无法定量控制的特点。
[0005] 因此，提供一种能有效稳定重组人巧调蛋白憐酸酶B亚基组分比例的组合稳定剂 具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明提供一种组合物及其应用、含有该组合物的稳定剂。本发明为了 解决rhCNB各组份比例稳定可控的难题，完成药物临床申报稳定性考察，满足药物申报的要 求，通过大量的实验，得到了本发明中的稳定剂组合物，有效的解决了 rhCNB生产、胆存过程 中不稳定的问题。
[0007] 本发明提供了一种能够稳定rhCNB组分比例的稳定剂组合物，由无机盐、氨基酸、 糖类、多元醇、表面活性剂按一定比例组成的组合物，其中不同成分分别对rhCNB的单体、二 聚体、多聚体等组分起各自的稳定作用，并能形成协同与叠加，使rhCNB有效成份(含二聚体 和单体)纯度达99 % W上，其中二聚体稳定控制在98 % W上，杂质多聚体含量小于0.5 %，达 到生物药品本项指标国际先进水平。
[000引为了实现上述发明目的，本发明提供W下技术方案：
[0009] 本发明提供了一种组合物，包括氯化物、氨基酸、糖类或表面活性剂中的一种或两 者W上的混合物。
[0010] 在本发明的一些具体实施方案中，W质量份计，包括如下组分： 氣化物 0.犯~0.1份 義基酸 0.05~0.25份
[0011] 膽类 2如10份 泉巧活帷剂 0,1 ·-0.5份c>
[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，所述氯化物为氯化巧或氯化锋。
[0013] 在本发明的一些具体实施方案中，所述氨基酸为色氨酸或赖氨酸。
[0014] 在本发明的一些具体实施方案中，所述糖类为海藻糖、薦糖或甘露醇中的一种或 两者W上的混合物。
[0015] 在本发明的一些具体实施方案中，所述表面活性剂为非离子型表面活性剂。
[0016] 在本发明的一些具体实施方案中，所述非离子型表面活性剂为聚山梨醋-80。
[0017] 在本发明的一些具体实施方案中，W质量份计，包括如下组分： 氯化约或氯化辞 0.02~0.1份 色氨酸或赖氨酸 0.05~0.25份
[001引海藻搪 0.2~2份 篇糖 0.2~2份 甘露醇 1~10份
[0019] 聚山梨縣-80 化1~0.5紛
[0020] 在本发明的另一些具体实施方案中，W质量份计，包括如下组分： 氣化约 0.02~(U紛 色氨酸 0.05~0.25份 海藻糖 0.2~2份
[0021] 蕉糖 0.2~2份 甘露醇 1~10份 聚山梨醋-80 0.1~0.5份
[0022] 在本发明的另一些具体实施方案中，W质量份计，包括如下组分： 氯化舞 娘斗.1份 猶氨酸 0.05'、.0.25份 海藻糖 0.2~2份
[0023] 慕糖 0.2-2份 甘露醇 1~10份 聚山梨醋-80 々.1~0.5份
[0024] 本发明还提供了所述组合物在用于制备人巧调蛋白憐酸酶B亚基稳定剂中的应 用。
[0025] 本发明还提供了一种提高人巧调蛋白憐酸酶B亚基组分稳定性的稳定剂，包括所 述组合物和水。
[0026] 本发明还提供了一种提高人巧调蛋白憐酸酶B亚基组分稳定性的稳定剂的制备方 法，在本发明的一些具体实施方案中，包括如下步骤：
[0027] 步骤1:按配比称量氯化巧或氯化锋、色氨酸或赖氨酸、海藻糖、薦糖、甘露醇、聚山 梨醋-80;
[00%]步骤2:将氯化巧或氯化锋、色氨酸或赖氨酸、海藻糖、薦糖、甘露醇混合，再加入50 ~150份注射用水揽拌，制得混合液;再加入活性炭揽拌，过滤除炭，制得第一溶液；
[0029] 步骤3:取配方量的聚山梨醋-80,加入注射用水，再加入活性炭，揽拌，过滤除炭， 制得第二溶液；
[0030] 步骤4:将步骤2制得的第一溶液和步骤3制得的第二溶液混合，过滤除菌。
[0031] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤2中注射用水的溫度为20~60°C。
[0032] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤2中所述再加入50~150份注射用水揽拌的 转速为30~200巧m。
[0033] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤2中所述活性炭为活化的活性炭，所述活性 炭占所述混合液的体积质量分数为0.05%~0.5%。
[0034] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤2中所述再加入活性炭揽拌的时间为10~ 30min〇
[0035] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤3中所述用注射用水冲洗的次数为2~4次。
[0036] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤3中所述活性炭为活化的活性炭，所述活性 炭占所述混合液的体积质量分数为0.05%~0.5%。
[0037] 在本发明的一些具体实施方案中，步骤3中所述揽拌的时间为10~30min。
[0038] 在本发明的一些具体实施方案中，所述制备方法步骤4中所述过滤除菌为经0.2μπι 滤忍过滤除菌。
[0039] 在本发明的一些具体实施方案中，所述rhCNB(W蛋白质量计）与所述组合物或稳 定剂的质量比为1: 1。
[0040] 即：
[0041] 组合物或稳定剂是由氯化巧或氯化锋、色氨酸或赖氨酸、海藻糖、薦糖、甘露醇、聚 山梨醋-80共同组成，其配比如下：
[00创①氯化巧0.02~0.1份、色氨酸0.05~0.25份、海藻糖0.2~2份、薦糖0.2~2份、甘 露醇1~10份、聚山梨醋-800.1~0.5份、rhCNB蛋白1份。
[0043] ②氯化锋0.02~0.1份、赖氨酸0.05~0.25份、海藻糖0.2~2份、薦糖0.2~2份、甘 露醇1~10份、聚山梨醋-800.1~0.5份、rhCNB蛋白1份。
[0044] 本发明提供了一种组合物，包括氯化物、氨基酸、糖类或表面活性剂中的一种或两 者W上的混合物。本发明为了解决rhCNB各组份比例稳定可控的难题，完成药物临床申报稳 定性考察，满足药物申报的要求，通过大量的实验，得到了本发明中的稳定剂组合物，有效 的解决了 rhCNB生产、胆存过程中不稳定的问题。
[0045] 本发明提供了一种能够稳定rhCNB组分比例的稳定剂组合物，由无机盐、氨基酸、 糖类、多元醇、表面活性剂按一定比例组成的组合物，其中不同成分分别对rhCNB的单体、二 聚体、多聚体等组分起各自的稳定作用，并能形成协同与叠加，使RhCNB有效成分纯度达 99% W上，其中二聚体稳定在98% W上，杂质多聚体含量小于0.5%，达到生物药品本项指 标国际先进水平。
[0046] 加入本发明提供的组合稳定剂，在37°C条件下储存6个月，rhCNB组分比例和生物 活性没有明显变化，各项质量指标也无明显变化。
【附图说明】
[0047] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技