[0169] 此步反应为水解反应，由于中间体3与依维莫司同为大环内酯类化合物，具有酸不 稳定性，因此选择反应温度要及其苛刻。当反应温度高于0 °c时，反应杂质明显增加，反应温 度在-10°c时，反应速度适中，无明显杂质产生，故选择-15°c±5°c，-15°c作为该步反应的 最佳反应温度，又因滴加盐酸时会产生热量，因此滴加盐酸的温度控制在-25°C±5°C，避免 了因滴加时温度过高造成杂质的增加。
[0170] 5.为了优化依维莫司的纯化方法，设计了多组试验，针对正相、反相制备纯化以及 流动相的配比进行了严格的筛选。实验内容如下：
[0171] (1)关于正反相两体系分离西罗莫司与依维莫司的研究：
[0172] ①反相检测
[0173] I.样品：4.9mg依维莫司溶于lml乙腈中
[0174] 进样:l〇ul
[0175] 依维莫司反相检测色谱图如图1所示。
[0176] II.样品：西罗莫司，西罗莫司反相检测色谱图如图2所示。
[0177] 小结:反相上，西罗莫司保留时间与依维莫司相同。
[0178] ②正相检测：
[0179] I.样品：西罗莫司粗品4.6mg溶于lml乙腈中
[0180] 进样：l〇ul
[0181] 西罗莫司正向检测色谱图如图3所示。
[0182] II.样品：依维莫司粗品49mg溶于lml乙腈中
[0183] 进样：l〇ul
[0184] 依维莫司正向检测色谱图如图4所示。
[0185] III ·样品：西罗莫司粗品4.6mg溶于lml乙腈中，依维莫司粗品4.9mg溶于lml乙腈， 各取lOOul混合。
[0186] 进样：10ul，结果如图5所示。
[0187]小结:在正相体系中，西罗莫司与依维莫司可有效的分离，但在正相体系中依维莫 司与7-环异构体不能有效的分离。
[0188] (2)关于正反相两体系中依维莫司稳定性的研究：
[0189] ①反相制备收集的样品稳定性考察
[0190]样品：依维莫司粗品80mg溶于lml乙腈，过滤，上样量:lml(纯化图谱如图6)
[0191] 收集:90.2-93.8min 组分。
[0192] 收集样品在常温下每隔1小时进1针检测，检测图谱如图7-11所示，检验数据如表 1-5所示：
[0193]表1反相放置0.5h样品分析 [0194]
[0195]表2反相放置1.5h样品分析
[0196]
[0197]表3反相放置2.5h样品分析
[0198]
[0199]
[0200]表4反相放置4.5h样品分析 rn?m 1
[0202] 表5反相放置5.5h样品分析 「02031
[0204] ②正相制备收集的样品稳定性考察
[0205] 色谱柱：Hedera Si，9um，10mm*250mm
[0206] 检测波长：277nm 流速：3 · Oml/min
[0207] 柱温：15°C样品：lOOmg溶于lml乙酸乙酯中
[0208]使用正庚烷:乙酸乙酯(v/v) = 16:14的等度洗脱 [0209] 进样：1ml (纯化图谱如图12)
[0210] 收集:62.653-69.383min 组分
[0211] 收集样品在常温下每隔1小时进1针检测:检测图谱如图13-16所示，检验数据如表 6-9所示：
[0212] 表6正相放置0.5h样品分析 序号 保留时间 浓度 峰面积 峰分离度
[0213]
总计 100 23604377
[0214] 表7正相放置1.5h样品分析
[0215] 序号 保留时间 浓度 峰面积 峰分离度
[0216]
总计 100 9692462
[0217] 表8正相放置2.5h样品分析 序号保留时间 浓度 峰面积 峰分离度
[0218]
总计 100 6523271
[0219] 表9正相放置3.5h样品分析 序号保留时间 浓度 峰面积 峰分离度
[0220] 总计 WO
[0221] 小结：
[0222] 样品在正反相溶剂中，稳定性均较差。在正相溶剂中与反相体系中，目标组分均会 转化为保留时间靠后的7-环异构体，且产品在反相体系的转化速度大于在正相体系的转化 速度。
[0223] 综合以上纯化数据及产品稳定性数据总结得出，可完全通过正相制备纯化获得符 合质量标准的依维莫司，但通过一次正相制备可获得的产品质量收率仅50%。后又尝试对 部分未符合质量标准的产品进行了二次纯化，又可获得20%的产品。
[0224]最终选择使用正庚烷：乙酸乙酯（v/v) = 16:14的正相洗脱方法，作为最终的制备 纯化方法，对未符合标准的产品再进行二次纯化。
[0225] 本发明在优化过程中主要针对依维莫司的7-环异构体含量进行控制。柱层析法是 目前最简便的纯化方法，但无法控制7-环异构体含量，基本所有的柱层析法只能将7-环异 构体含量控制在〇.5%以内，无法达到国外原研药水平控制情况。而目前所用的最流行的纯 化方法为制备色谱纯化法，普遍情况可将7-环异构体含量控制在0.2 %以内，也无法达到原 研药所控制的标准。而利用本发明的纯化工艺，可将依维莫司7-环异构体含量控制在0.1% 以内，达到原研药的同等甚至更有水平。
[0226] 本发明的突出效益亦体现在大生产上，目前所能查阅到的相关资料中显示，普遍 纯化量在5g/次的上样量，无法满足生产需求，而本发明的优势在于每批粗品的上样量可达 至Ij20-30g，能够满足工业化生产使用。
[0227] 虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此 技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护 范围应该以权利要求书所界定的为准。
【主权项】
1. 一种依维莫司的制备方法，其特征在于，包括下列步骤： 1) ΚΞ乙胺为缚酸剂，将乙二醇在叔下基二甲基氯硅烷反应，获得叔下基二甲基径乙 氧基硅烷； 2) 将步骤1)获得的叔下基二甲基径乙氧基硅烷和Ξ氣乙酸酢反应，获得叔下基二甲娃 氧基Ξ氣甲横酸乙醋； 3) 将西罗莫司和步骤2)获得的叔下基二甲娃基Ξ氣甲横酸乙醋反应，获得40-氧-[2- (叔下基二甲基娃烷基)氧]乙基西罗莫司； 4) 将步骤3)获得的40-氧-[2-(叔下基二甲基娃烷基)氧]乙基西罗莫司在稀盐酸的作 用下获得依维莫司粗品； 5) 将步骤4)获得的依维莫司粗品经过制备液相纯化获得依维莫司；所述制备液相纯化 为两次正相制备色谱纯化。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括下列步骤： 1) 将乙二醇和Ξ乙胺用溶剂溶解，在-5 °C±5°C下滴加叔下基二甲基氯硅烷，升溫至20 °C±5°C进行反应，经萃取、减压蒸馈和纯化获得叔下基二甲基径乙氧基硅烷； 2) 将步骤1)获得的叔下基二甲基径乙氧基硅烷和缚酸剂溶解，然后与Ξ氣乙酸酢在- 20°C ±5°C下进行反应，纯化获得叔下基二甲娃氧基Ξ氣甲横酸乙醋； 3) 将西罗莫司和缚酸剂溶解，然后将步骤2)获得的叔下基二甲娃基Ξ氣甲横酸乙醋和 缚酸剂溶解后滴加至反应液中，升溫至60°C~65°C进行反应，经萃取、减压蒸馈和纯化获得 40-氧-[2-(叔下基二甲基娃烷基)氧]乙基西罗莫司； 4) 将步骤3)获得的40-氧-[2-(叔下基二甲基娃烷基）氧]乙基西罗莫司溶解，然后在- 25°C±5°C下滴加稀盐酸，在-15°C±5°C下进行反应，初步纯化后获得依维莫司粗品； 5) 将步骤4)获得的依维莫司粗品进行第一次正相制备液相纯化，收集杂质含量符合要 求的依维莫司，对杂质含量不合格部分的依维莫司再次进行浓缩，在相同条件下对杂质含 量不符合要求的样品进行第二次正相制备液相纯化，将最终符合质量标准的样品进行混 合，重结晶后获得依维莫司。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)所述溶剂，选自正己烧、正庚烧、石 油酸、环己烧中的一种或一种W上的混合液;步骤1)所述萃取，溫度控制在-5°C~10°C。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述溶解，采用的溶剂选自正己烧、 正庚烧、石油酸、环己烧中的一种或一种W上的混合液;步骤2)所述缚酸剂选自N，N-二异丙 基乙胺、Ξ乙胺、化晚、2,6-二甲基化晚中的一种或一种W上的混合液;步骤2)所述叔下基 二甲基径乙氧基硅烷、缚酸剂和Ξ氣甲横酸酢的摩尔投料比例依次为1:1.3:1.1。5. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)所述溶解，采用的溶剂选自苯、甲 苯、二甲苯、氯苯中的一种或一种W上的混合物;步骤3)所述缚酸剂，选自N，N-二异丙基乙 胺、Ξ乙胺、化晚、2,6-二甲基化晚中的一种或一种W上的混合液;步骤3)所述西罗莫司、叔 下基二甲基娃氧基Ξ氣甲横酸乙醋及缚酸剂的摩尔投料比例依次为1:6:10。6. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4)所述溶解，采用的试剂选自甲醇、乙 醇、异丙醇、四氨巧喃中的一种或一种W上的混合液;步骤4)所述40-氧-[2-(叔下基二甲基 娃烷基)氧]乙基西罗莫司和稀盐酸的摩尔投料比例为1:2。7. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤5)所述正相制备液相纯化，采用的洗 脱剂为正庚烧、正己烧、环己烧中的一种或几种与乙酸乙醋的混合溶液，采用规格为lOwn、 120A的娃球作为色谱柱填料，洗脱方式为等度洗脱。8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤5)所述正相制备液相纯化，采用的洗 脱剂为正庚烧和乙酸乙醋的混合溶液;所述正庚烧和乙酸乙醋的体积比为16:14。9. 根据权利要求2所述方法，其特征在于，步骤为： 1) 将乙二醇和Ξ乙胺用正己烧溶解，在-5 °C下滴加叔下基二甲基氯硅烷，升溫至20°C 进行反应，控制在-5 °C~10°C下进行萃取，经减压蒸馈和纯化后获得叔下基二甲基径乙氧 基硅烷;所述纯化，方式为减压蒸馈； 2) 将步骤1)获得的叔下基二甲基径乙氧基硅烷和N，N-二异丙基乙胺用正己烧溶解，然 后与Ξ氣乙酸酢在-20°C进行反应，在10°C下进行柱层析纯化后获得叔下基二甲娃氧基Ξ 氣甲横酸乙醋;所述叔下基二甲基径乙氧基硅烷、N，N-二异丙基乙胺和Ξ氣甲横酸酢的摩 尔投料比例依次为1:1.3:1.1; 3) 将西罗莫司和N，N-二异丙基乙胺用甲苯溶解，然后将步骤2)获得的叔下基二甲娃基 Ξ氣甲横酸乙醋和N，N-二异丙基乙胺用甲苯溶解后在滴加至反应液中，升溫至60°C进行反 应，经萃取、减压蒸馈和纯化获得40-氧-[2-(叔下基二甲基娃烷基)氧]乙基西罗莫司；所述 西罗莫司、叔下基二甲基娃氧基Ξ氣甲横酸乙醋及N，N-二异丙基乙胺的摩尔投料比例依次 为1:6:10;所述减压蒸馈时加入2，6-二甲基化晚来控制体系酸碱度； 4) 将步骤3)获得的40-氧-[2-(叔下基二甲基娃烷基)氧]乙基西罗莫司用甲醇溶解，然 后在-25°C下滴加稀盐酸，在-15°C下反应，初步纯化后获得依维莫司粗品；所述40-氧-[2- (叔下基二甲基娃烷基)氧]乙基西罗莫司和稀盐酸的摩尔投料比例为1:2; 5) 将步骤4)获得的依维莫司粗品采用体积比为16:14的正庚烧和乙酸乙醋混合溶液作 为洗脱剂，采用规格为1〇μπι、]20Α的娃球作为色谱柱填料，W等度洗脱的方式进行第一次 正相制备液相纯化，浓缩收集符合要求的部分，对不符合要求的部分进行第二次正相制备 液相纯化，浓缩收集后将两次产物合并，重结晶后获得依维莫司。10. 权利要求1-9所述任一方法在制备依维莫司中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种依维莫司的制备方法，属于医药技术领域。该方法包括侧链的合成及侧链与作为起始原料的西罗莫司发生取代反应、水解反应、两次正相制备液相纯化共5个工艺步骤，得到依维莫司。本发明方法成本低、收率高、操作简便、有利于实现产业化的依维莫司制备工艺。
【IPC分类】C07D498/18
【公开号】CN105566348
【申请号】CN201511030109
【发明人】袁淑杰, 杨新春, 于海涛, 齐岩, 孙磊, 刘铁城, 户巧芬, 曹翊杰
【申请人】哈药集团技术中心
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月31日