的范围内，式（1)所示的化合 物能够有效提高细菌的耐酸性。
[0040] 根据本发明，术语"氧胁迫"指的能够导致细菌生长受到限制的有氧条件，根据本 发明，所述氧胁迫的氧气浓度优选为l-3mg/L，更优选为1.5-2.5mg/L，在这样优选的范围 内，式(1)所不的化合物能够有效提尚细菌的耐氧性。
[0041 ]以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
[0042] 式（1)所示结构的化合物购自0mm Scientific公司货号为CS15-007。
[0043] MRS培养基配方：10g蛋白胨，10g牛肉膏，5g酵母浸粉，2g K2HP〇4，2g柠檬酸二铵，5g 乙酸钠，20g葡萄糖，0.58g MgS〇4 · 7H20,0.25g MnS〇4 · 4H20，lmL吐温80,加入蒸馏水至 1L。
[0044] 实施例1
[0045] 用于说明酸胁迫时式(1)化合物对双歧杆菌耐酸性的影响
[0046] (1)酸胁迫的验证
[0047] 从CGMCCNo. 2265 (BBMN68)种子培养液中接种1 %到MRS液体培养基中，37 °C厌氧培 养，达到对数中期（约6h)取菌液样品，用紫外可见分光光度计测定0D600(达到0.6以上），将 菌液等体积分成两份A、B、C、D，分别离心:8000rpm，5min;弃去上清液，分别用pH6.5、pH4.0、 pH2.5和pHl的MRS液体培养基洗菌体A、B、C、D，再次离心:8000rpm，5min;弃去上清液，将沉 淀A、B、C、D分别重悬在等体积的pH6.5、pH4.0、pH2.5和pHl的MRS液体培养基中，37°C厌氧培 养，在111、211、311、411分别取4、8、(：、0菌液，用稀释液进行10倍稀释，稀释到10- 7，选取10-5、10 _6、10-7稀释液用MRS固体培养基进行倾注法涂板。每个样品测定3个平行。将涂好的平板在 洁净工作台里凝固，然后倒置放在厌氧盒里并加入厌氧包，37°C厌氧培养48h，进行平板计 数。
[0048] 计数结果显示：随培养时间的延长，对照组(A pH6.5)的存活数逐渐升高，从3h开 始具有显著性差异;而pH4.0、pH2.5和pHl组的存活数随时间的延长逐渐降低，从分别在lh、 2h和4h开始具有显著性差异。lh、2h时，pH4.0组与对照组的存活数无显著性差异，但从3h开 始，PH4.0组的存活数显著低于对照组(如图1所示）；lh时，pH2.5组与对照组的存活数无显 著性差异，但从2h开始，pH4.0组的存活数显著低于对照组;从lh开始，pHl.O组的存活数显 著低于对照组。由此可以看出，pH4.0、pH2.5和pHl均能够对BBMN68的生长造成酸迫害。 [0049] (2)式(1)化合物对耐酸性的影响
[0050]从BBMN68种子培养液中接种1 %到MRS液体培养基中，37°C厌氧培养，达到对数中 期（约6h)取菌液样品，用紫外可见分光光度计测定0D600(达到0.6以上），将菌液等体积分 成12 份△4、84、04、04，厶2.5、82.5丄2.5、02.5，厶1、81、(：1、01，分别离心：800(^，511^11 ;弃去上 清液，A4、B4、C4、D4均用pH4.0的MRS液体培养基洗菌体，A2.5、B2.5、C2.5、D2.5均用pH2.5的 MRS液体培养基洗菌体，A1、B1、C1、D1均用pHl的MRS液体培养基洗菌体，再次离心：8000r， 511^11 ;弃去上清液，将沉淀44、84、04、04,42.5、82.5丄2.5、02.5 41、81、(：1、01分别重悬在等 体积的对应pH的MRS液体培养基中，B4、C4、D4，B2.5、C2.5、D2.5，Bl、Cl、D1分别加入3.78mM 式（1)所示的化合物，使每个pH组的终浓度分别达到0.378μΜ、3.78μΜ、37，8μΜ，A4、A2.5和A1 分别作为对照组，37°C厌氧培养，在111、211、311、411分别取各组菌液，用稀释液进行10倍稀释， 稀释到10Λ选取10- 5、10-6、10-7稀释液用MRS固体培养基进行倾注法涂板。每个样品测定3个 平行。将涂好的平板在洁净工作台里凝固，然后倒置放在厌氧盒里并加入厌氧包，37°C厌氧 培养48h，进行平板计数。
[0051 ] 实验结果表明，随培养时间的延长，pH4.0、pH2.5和pHl对照组及添加不同浓度式 (1)化合物组的存活数均逐渐降低。各时间点，添加不同浓度式（1)化合物组的存活数显著 高于对应的pH4.0、pH2.5和pHl对照组，但不同浓度式（1)化合物组之间存活数无显著性差 异。由此可见，酸胁迫时外源添加不同浓度式（1)化合物可显著性提高BBMN68在酸胁迫条件 下的存活数，但不同浓度的促进效果没有差异性，即这种促进作用没有浓度依赖性。由此可 知，式(1)化合物与BBMN68的耐酸性有关。pH4.0下的结果如图2所示。
[0052] (3)AI_2 的检测
[0053]取上述"(2)式（1)化合物对耐酸性的影响"中加入式（1)所示的化合物且培养1小 时后的C4菌液进行离心，离心条件为：12000 X g，5min;收集菌上清，用5M NaOH将pH调制 7.0;再用0.22μπι的水系滤膜过滤，收集滤液作为待测样品，保存于4°C冰箱待用。同时，从哈 氏弧菌BB170种子培养液中取菌液按照1 %接种量接种到AB培养基(Autoinducer Bioassay 培养基（L):NaCl 17.5g，MgS04.7H20 25.2g，酪蛋白氨基酸2g，加水到960mL。用3M NaOH调 节 pH到7.5，121°C 灭菌 15min，加入下列无菌试剂：1]?1(3?04.3!120化!17.0)1011^，0.謂1^-Arg 10mL，50%甘油20mL)，30°C180rpm需氧培养12h，按上述方法制备无菌上清，作为阳性 对照1。将双歧杆菌NCC2705(中国工业大学食品学院乳品功能实验室馈赠)种子培养液中取 菌液按照1 %接种量接种到MRS培养基中并37 °C下静置培养12h，并按照如上方法制备无菌 上清，作为阳性对照2。其中，AB培养基和MRS液体培养基按照上述方法制备无菌上清，作为 阴性对照。
[0054]用哈氏弧菌报告菌株检测AI-2的方法测定样品中AI-2的含量。具体方法如下：从 哈氏弧菌BB170种子培养液中取菌液按照1 %接种量接种到AB培养基，30°C 180rpm需氧培养 约14h(0D6QQnm=0.7~1.2)，将该BB170菌液稀释1:5000到新鲜的AB培养基中，作为BB170稀 释液，按9:1与上述制备的各待测样品混合，混合物总体积为5mL。混合物在30 °C 180rpm摇床 上培养，在〇_7h内，每隔lh取200μ!7孔到96孔化学发光检测板中，用化学发光检测仪测定各 样品发光的荧光强度，每个样品测定3个平行。结果如图7所示，由图7可以看出，本发明的菌 株和ΒΒ170以及NCC2705(该两株均为公知的能够产生ΑΙ-2的菌株)的荧光强度相当，由此可 以证明式(1)化合物转化为了 AI-2。
[0055] 实施例2
[0056] 用于说明酸胁迫时式(1)所示的化合物对双歧杆菌耐酸性的影响
[0057]按照实施例1的方法进行pH4组的酸胁迫实验，不同的是，所使用的双歧杆菌为青 春双歧杆菌CGMCC No.6270。
[0058] 结果显示，随培养时间的延长，pH4.0对照组及添加不同浓度式（1)化合物组的存 活数均逐渐降低。各时间点，添加不同浓度式（1)化合物组的存活数显著高于PH4.0对照组 (如图3所示），但提高程度显著低于实施例1中的。但同样的不同浓度式（1)化合物组之间存 活数无显著性差异。
[0059] 由此可见，酸胁迫时外源添加不同浓度式（1)化合物可显著性提高CGMCC No.6270 在酸胁迫条件下的存活数，但不同浓度的促进效果没有差异性，即这种促进作用没有浓度 依赖性。由此可知，式(1)化合物与CGMCC No. 6270的耐酸性有关。
[0060] 按照实施例1中的方法检测式（1)化合物转化为了 AI-2。
[0061 ] 对比例1
[0062]用于说明酸胁前时式(1)所示的化合物对双歧杆菌耐酸性的影响 [0063] 从BBMN68种子培养液中接种1 %到MRS液体培养基中，接种A、B、C、D四份，B、C、D分 别加入3.78mM式（1)化合物，使其终浓度分别达到0.378μΜ、3.78μΜ、37.8μΜ，Α作为对照组， 37°C厌氧培养，达到对数中期（约6h)取菌液样品，用紫外可见分光光度计测定0D600(达到 0.6以上），将菌液分别离心:8000r，5min;弃去上清液，均用pH4.0的MRS液体培养基洗菌体， 再次离心：8000r，5min;弃去上清液，将沉淀分别重悬在等体积的pH4.0的MRS液体培养基 中，37°C厌氧培养，在111、211、311、411分别取4、8、(：、0菌液，用稀释液进行10倍稀释，稀释到10 Λ选取10-5、10-6、10-7稀释菌液用MRS固体培养基进行倾注法涂