一种紫花苜蓿生物活性肽的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物来源生物活性肽的制备领域，尤其是一种紫花苜蓿生物活性肽的 制备方法。
【背景技术】
[0002] 紫花苜蓿系豆科，属于多年生草本植物，是世界上种植最广、栽培最早的牧草，具 有产量高、适口性好、营养丰富等特点所以被誉为"牧草之王"，在我国东北、华北、西北等地 区已经普遍种植。紫花苜蓿的氨基酸种类较为齐全且均衡，营养价值较高，是一种优良的植 物性蛋白资源。
[0003] 目前，国内外对于紫花苜蓿的研究主要集中在育种、种植、筛选及黄酮类化合物、 叶蛋白的提取等方面，现有技术中对紫花苜蓿生物活性肽的研究很少。其中，张勇等对碱性 蛋白酶水解苜蓿叶蛋白制备寡肽的最佳条件进行了研究，最佳条件下水解度为27.50%，寡 肽的平均肽链长度为3.64(中国饲料，2007，18:15-17);在中国发明专利申请公开说明书 CN104195204A中公开了一种紫花苜蓿多肽的制备方法，采用加热法获得紫花苜蓿粗蛋白， 再经乙醇浸提脱色脱腥，后用Protamex酶和FlavourzymelOOOL酶酶解紫花苜蓿粗蛋白，最 后经喷雾干燥得到紫花苜蓿多肽，多肽含量达70%~75%，所得的肽粉无苦涩感，可直接 服用。但是上述两种方法均是先从苜蓿草中提取出叶蛋白后再将其酶解进行多肽制备的， 叶蛋白提取率低，能耗大，此两种方法均存在工艺繁杂、生产成本高的缺点。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种工艺简便、生产成 本低、成品具有较强抗氧化活性的紫花苜蓿生物活性肽的制备方法。
[0005] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种紫花 苜蓿生物活性肽的制备方法，其特点是，其步骤如下： (1) 原料处理:取紫花苜蓿鲜草或干草，筛选去杂、清洗、沥干后投入粉碎机粉碎，粉碎 后按料水质量比1:9~1:11加水匀浆，得到原料液； (2) 酶解:将上述原料液栗入酶解罐，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH，并不断搅拌， 按加酶量800~1200U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶进行酶解，酶解工艺参数为： 酶解时间3~5 · 5h，酶解温度45~60 °C，酶解pH 6~7 · 5; (3 )灭酶:酶解结束后升温至90 °C以上，保持1 Omin，灭酶，冷却，对灭酶后的混合物进行 离心处理，得上清液，或将所述灭酶后的混合物过滤，得滤液； (4)真空浓缩:对上述清液或滤液抽入浓缩罐进行浓缩处理，浓缩温度为50~65°C，浓缩 至最终水分含量在40~60%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0006] (5)冷冻干燥:对上述紫花苜蓿生物活性肽膏进行冷冻干燥处理，干燥温度为-60 ~-40°C，干燥至最终水分含量在10%以下，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0007] 本发明所述的紫花苜蓿生物活性肽的制备方法中，进一步优选的技术方案或者技 术特征是： 1、在步骤(1)中：匀浆时原料与水的质量比为1:10。
[0008] 2、在步骤(2 )中：按加酶量900U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶进行酶， 酶解工艺参数为:酶解时间4h，酶解温度55 °C，酶解pH 6.5。
[0009] 3、在步骤(4)中：对上述上清液或滤液抽入浓缩罐进行浓缩处理，浓缩温度为55 °C，浓缩至最终水分含量为50%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0010] 4、在步骤(5)中：对上述紫花苜蓿生物活性肽膏进行冷冻干燥处理，干燥温度为-50°C，干燥至最终水分含量为8%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0011]与现有技术相比，本发明直接用胰蛋白酶对紫花苜蓿进行酶解，肽得率高，水解度 可达到32.56%，肽段分子量主要集中在lOOODa以下，而且制得的紫花苜蓿生物活性肽具有 较强的二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除能力;在制备过程中省去了提取粗蛋白及脱色 脱腥步骤，不仅简化了生产工艺，还进一步降低了生产成本，提升了产品的使用效价。本发 明获得的紫花苜蓿生物活性肽是植物天然提取物，呈淡绿色，有淡淡的青草香，风味倶佳， 同时具有较强的抗氧化活性，可在食品、保健品、化妆品及饲料加工等领域推广应用，而且 工艺简便、生产成本低，适合大规模工业化生产。
【附图说明】
[0012]图1为抗坏血酸(Vc)对DPPH ·清除能力的测定结果； 图2为采用本发明实施例4所述的方法制备得到的紫花苜蓿生物活性肽粉对DPPH ·清 除能力的测定结果。
【具体实施方式】
[0013] 以下参照附图，进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进 一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
[0014] 实施例1，一种紫花苜蓿生物活性肽的制备方法，其步骤如下： (1) 原料处理:取紫花苜蓿鲜草或干草，筛选去杂、清洗、沥干后投入粉碎机粉碎，粉碎 后按料水质量比1:9加水匀浆，得到原料液； (2) 酶解:将上述原料液栗入酶解罐，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH，并不断搅拌， 按加酶量800U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶进行酶解，酶解工艺参数为:酶解 时间3h，酶解温度45 °C，酶解pH 6; (3 )灭酶:酶解结束后升温至90 °C以上，保持1 Omin，灭酶，冷却，对灭酶后的混合物进行 离心处理，得上清液，或将所述灭酶后的混合物过滤，得滤液； (4)真空浓缩:对上述清液或滤液抽入浓缩罐进行浓缩处理，浓缩温度为50°C，浓缩至 最终水分含量为40%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0015] (5)冷冻干燥:对上述紫花苜蓿生物活性肽膏进行冷冻干燥处理，干燥温度为-60 °C，干燥至最终水分含量为10%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0016] 实施例2,一种紫花苜蓿生物活性肽的制备方法，其步骤如下： (1)原料处理:取紫花苜蓿鲜草或干草，筛选去杂、清洗、沥干后投入粉碎机粉碎，粉碎 后按料水质量比1:11加水匀浆，得到原料液； (2)酶解:将上述原料液栗入酶解罐，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH，并不断搅拌， 按加酶量1200U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶进行酶解，酶解工艺参数为:酶解 时间5.5h，酶解温度60 °C，酶解pH 7.5; (3 )灭酶:酶解结束后升温至90 °C以上，保持1 Omin，灭酶，冷却，对灭酶后的混合物进行 离心处理，得上清液，或将所述灭酶后的混合物过滤，得滤液； (4)真空浓缩:对上述清液或滤液抽入浓缩罐进行浓缩处理，浓缩温度为65°C，浓缩至 最终水分含量为60%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0017] (5)冷冻干燥:对上述紫花苜蓿生物活性肽膏进行冷冻干燥处理，干燥温度为-40 °C，干燥至最终水分含量为6%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0018] 实施例3,一种紫花苜蓿生物活性肽的制备方法，其步骤如下： (1) 原料处理:取紫花苜蓿鲜草或干草，筛选去杂、清洗、沥干后投入粉碎机粉碎，粉碎 后按料水质量比1:10加水匀浆，得到原