一种比率硫化氢化学剂量计及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于检测技术领域，具体设及一种比率硫化氨化学剂量计及其制备方法W 及在生理条件下检测硫化氨的应用。
【背景技术】
[0002] 硫化氨化2S)是一种无色、具有典型的臭鸡蛋气味的气体，几个世纪W来，一直被 认为是一种毒性的化学污染物。近些年来，大量的实验研究表明，也S是继MKCO之后被发现 的第=种生物体内源性产生的气体信号化合物，它在调节细胞内外氧化还原电位及其他与 人类健康和疾病相关的信号过程方面发挥着重要作用。如调制血压，调解神经递质，调节炎 症反应，抑制氧化应激反应等。此外，细胞内也S水平的改变还被认为与一些疾病有关联，如 唐氏综合症，阿尔茨海默氏症疾病，糖尿病和肝硬化。因此，发展生理条件下对也S检测的有 效方法对学术研究与临床应用是有重要意义的。
[0003] 目前已发展的比率硫化氨化学剂量计大多数都是W信号强度的增大或减小作为 响应信号。运种基于单一波长下光信号绝对强度变化的化学剂量计有着自身不可克服的缺 点，即在定量分析时易受到多种因素的影响，如绝对浓度和分布，待测试体系的抑值、溫度 和极性，检测仪器的稳定性等，而使分析结果的准确度下降。
【发明内容】
[0004] 针对上述现有技术的不足，本发明提供了一种比率硫化氨化学剂量计及其制备方 法和应用，该化学剂量计结构新颖，抗其他离子干扰能力强，检测快速、准确。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0006] -种比率硫化氨化学剂量计舰化1-甲基-2-(4-硝基）苯乙締基化晚盐舰化1-甲 基-2-(4-硝基)苯乙締基化晚盐，其化学结构式如下所示：
[0007]
[000引所述比率硫化氨化学剂量计舰化1-甲基-2-(4-硝基）苯乙締基化晚盐的制备方 法，包括W下步骤：
[0009] (1)将舰化1,2-二甲基化晚盐和4-硝基苯甲醒按一定比例加入到正下醇溶液中；
[0010] (2)加赃嗦，在回流条件下反应，得舰化1-甲基-2-(4-硝基)苯乙締基化晚盐。
[0011] 优选的，所述步骤（1)中舰化1，2-二甲基化晚盐和4-硝基苯甲醒按摩尔比1:2-1: 2.5;
[0012] 优选的，所述步骤（1)中的4-硝基苯甲醒与正下醇溶液的质量体积比为0.302:20-0.378:25；
[0013] 优选的，所述步骤（1)中的4-硝基苯甲醒与所述步骤（2)中的赃嗦的质量比为 0.378:0.025-0.302:0.01；
[0014] 优选的，所述步骤(2)中回流反应时间为30-50分钟。
[0015] 本发明的比率硫化氨化学剂量计的合成方程式，如下所示：
[0016]
[0017] 进一步的，本发明公开了上述比率硫化氨化学剂量计在生理条件下检测细胞内硫 化氨中的应用。
[0018] -种检测细胞内硫化氨的方法，步骤为：
[0019] (1)将上述比率硫化氨化学剂量计溶解于二甲基甲酯胺(DMF)溶剂中，配成储备液 储存待用；
[0020] (2)将步骤(1)中的储备液加入含有细胞组织的PBS缓冲液进行测试。
[002。 优选的，步骤(2)中所述PBS缓冲液的抑为7.4。
[0022] 本发明的有益效果为：
[0023] (1)本发明的比率硫化氨化学剂量计与硫化氨发生亲核加成反应，其339nm处吸光 度降低，244nm处出现新的吸收峰且吸光度增强，A244nm/A339nm与硫化氨浓度呈良好的线性关 系，具有良好的比率化学剂量计特性，实现在生理条件下对细胞内硫化氨的快速、准确检 测。
[0024] (2)本发明的比率硫化氨化学剂量计对硫化氨选择性高，对其他生物活性小分子 的抗干扰能力强。
[0025] (3)本发明的比率硫化氨化学剂量计合成方法简单，产率较高，适于工业化生产。
【附图说明】
[0026] 图1是在含IOiiM比率硫化氨化学剂量计的PBS缓冲溶液(pH7.4)中进行的出S紫外 滴定实验图，图中横坐标为波长，纵坐标为吸光度；
[0027] 图2是A244nm/A339r?与出S浓度的线性关系图，图中横坐标为出S浓度，纵坐标为A244nm/ A339皿的比值；
[0028] 图3是比率硫化氨化学剂量计相对于生物体内常见活性小分子的选择性实验。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
[0030] 实施例1
[0031] 称取0.235g舰化1，2-二甲基化晚盐和0.3IOg 4-硝基苯甲醒于50ml圆底烧瓶中， 加入20ml正下醇，加0.0 lg赃嗦，混合溶液加热至回流，反应40min。化C检测反应完成后，冷 却至室溫，有大量固体析出，减压抽滤，正下醇重结晶，得0.230g橘红色固体。产率为 62.5%。
[0032] 烙点测定:mp:239-242°C
[0033] 红外光谱测定：TR 化 Br，cm-i )3346，2997，1635，1616，1567，1516，1457，1：M9
[0034] 核磁共振氨谱测定：Ih NMR(400M监，DMSO): S (卵m): 9.02(d，J = 6. OHz，IH)，8.60 (m，2H)，8.36(d，J = 8.細z，2H)，8.16(d，J = 8.細z，2H)，8.08(d，J=16Hz，lH)，8.03(m，lH)， 7.86(d，J = 16Hz，lH)，4.45(s，3H)。
[0035] 实施例2
[0036] 称取0.2350g舰化1，2-二甲基化晚盐和0.3875g 4-硝基苯甲醒于50ml圆底烧瓶 中，加入25ml正下醇，加0.025g赃嗦，混合溶液加热至回流，反应30min。化C检测反应完成 后，冷却至室溫，有大量固体析出，减压抽滤，正下醇重结晶，得〇.242g橘红色固体。产率为 65.8%。
[0037] 烙点测定:mp:239-242°C
[0038] 红外光谱测定：TR 化 Br，cm_i )3346，2997，1635，1616，1567，1516，1457，1：349
[0039] 核磁共振氨谱测定：Ih NMR(400M监，DMSO): S (卵m): 9.02(d，J = 6. OHz，1H)，8.60 (m，2H)，8.36(d，J = 8.細z，2H)，8.16(d，J = 8.細z，2H)，8.08(d，J=16Hz，lH)，8.03(m，lH)， 7.86(d，J = 16Hz，lH)，4.45(s，3H)。
[0040] 实施例3
[0041 ] 称取0.2350g舰化1,2-二甲基化晚盐和0.355g 4-硝基苯甲醒于50ml圆底烧瓶中， 加入22ml正下醇，加0.01?赃嗦，混合溶液加热至回流，反应30min。化C检测反应完成后，冷 却至室溫，有大量固体析出，减压抽滤，正下醇重结晶，得〇.235g橘红色固体。产率为 63.9%。
[0042] 烙点测定:mp:239-242°C
[0043] 红外光谱测定：TR 化 Br，cm-i )3346，2997，1635，1616，1567，1516，1457，1：349
[0044] 核磁共振氨谱测定：Ih NMR(400M监，DMSO): S (卵m): 9.02(d，J = 6. OHz，1H)，8.60 (m，2H)，8.36(d，J = 8.細z，2H)，8.16(d，J = 8.細z，2H)，8.08(d，J=16Hz，lH)，8.03(m，lH)， 7.86(d，J = 16Hz，lH)，4.45(s，3H)。
[0045] 效果实验1
[0046] 取实施例1中得到的比率硫化氨化学剂量计溶解于DMF溶剂中配成储备液，吸取一 定量储备液添加到PBS缓冲溶液(pH7.4)中，使比率硫化氨化学剂量计在PBS缓冲溶液中的 浓度为1 OyM。加入不同体积的化2S(0.01M)水溶液，化2S体积分别为0，50化，100化，150化， 200化，300化，400化，450化，500化，550化，600化，700化，进行NasS紫外滴定测试，测试效果 如图1所示，在NasS体积0~70化L(浓度为0~700iiM)的范围内紫外吸收强度变化非常明显， 其33化m处吸光度逐渐降低，244皿处出现新的吸收峰且吸光度逐渐增强，且A244nm/A339nm与 出S浓度(0-700山〇呈良好的线性关系，如图2所示。线性回归方程为:A244nm/A339nm=0.0012c 化2S，iiM)+0.1784，R2 = 0.987。可说明本比率硫化氨化学剂量计具有良好的比率特征，可用 于对出S的检测，且检测准确、快速。
[0047] 效果实验2
[0048] 取实施例1中得到的比率硫化氨化学剂量计溶解于DMF溶剂中配成储备液，吸取一 定量储备液添加到PBS缓冲溶液(pH7.4)中，使比率硫化氨化学剂量计在PBS缓冲溶液中的 浓度为1〇測。分别加入无机分子片、化 2+、1护、5〇42-、胸-、(：1-，^及氨基酸及多肤小分子6111、 Pro、Leu、切S、GSH，测定波长244nm和339nm吸光度的比值变化，测试结果如图3所示，比率硫 化氨化学剂量计对出S选择性高，而对其他生物活性分子有较强的抗干扰能力。
[0049]上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对发明保护范围 的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需 要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种比率硫化氢化学剂量计碘化1-甲基-2-(4-硝基）苯乙烯基吡啶盐碘化l-甲基-2-(4-硝基)苯乙烯基吡啶盐，其化学结构式如下所示：2. 权利要求1所述化学剂量计的制备方法，其特征是，包括以下步骤： (1) 将碘化1，2-二甲基吡啶盐和4-硝基苯甲醛按一定比例加入到正丁醇溶液中； (2) 加哌嗪，在回流条件下反应，得所述化学剂量计。3. 如权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1)中碘化1，2_二甲基吡啶盐和 4-硝基苯甲醛按摩尔比1:2-1:2.5。4. 如权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1)中的4-硝基苯甲醛与正丁醇 溶液的质量体积比为〇. 302:20-0.378:25。5. 如权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1)中4-硝基苯甲醛与所述步骤 (2)中哌嗪的质量比为 0 · 378:0 · 025-0 · 302:0 · 01。6. 如权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述步骤（2)中回流反应时间为30-50分 钟。7. 权利要求1所述比率硫化氢化学剂量计在生理条件下检测细胞内硫化氢中的应用。8. 权利要求1所述比率硫化氢化学剂量计检测细胞内硫化氢的方法，其特征是，步骤 为： (1) 将上述比率硫化氢化学剂量计溶解于二甲基甲酰胺缓冲溶液中，配成储备液储存 待用； (2) 将步骤(1)中的储备液加入含有细胞组织的PBS缓冲液进行测试。9. 如权利要求8所述检测细胞内硫化氢的方法，其特征是，所述步骤(2)中PBS缓冲液的 pH为7.4。
【专利摘要】本发明公开了一种比率硫化氢化学剂量计及其制备方法和应用，比率硫化氢化学剂量计1-甲基-2-(4-硝基)苯乙烯基吡啶盐碘化1-甲基-2-(4-硝基)苯乙烯基吡啶盐，其结构式如下：本发明比率硫化氢化学剂量计的制备方法为将碘化1,2-二甲基吡啶盐和4-硝基苯甲醛按一定比例加入到正丁醇溶液中，再加入哌嗪，在回流条件下反应，得所述化学剂量计。本比率硫化氢化学剂量计具有良好的比率化学剂量计特性，能够实现在生理条件下对硫化氢的快速、准确检测，同时对硫化氢选择性高，对其他生物活性小分子的抗干扰能力强。本比率硫化氢化学剂量计合成方法简单，产率较高，适于工业化生产。
【IPC分类】C07D213/26, G01N31/16, G01N21/33
【公开号】CN105669533
【申请号】CN201610099281
【发明人】丁静, 葛海燕, 葛燕青
【申请人】泰山医学院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月23日