(I)微藻采用单针藻菌株Monoraphidium sp.FXY-10，利用kuhl培养基，按1g L—1的量加入葡萄糖作为碳源，黄腐酸的浓度为80mg L—S然后将上述藻液在25°C、无光照的条件下培养，培养单针藻到达对数生长期后期，此时藻细胞浓度达到6.628g L—1，利用光照培养基稀释到2.3g L—1作为光照培养阶段的种子液。
[0024](2)自养培养阶段，以kuhl作为培养，调整pH值为6.8?7.0。将黄腐酸溶解于超纯水中并配置成100mg L—1的母液，黄腐酸在培养基中的浓度为5mg L—S然后将上述藻液在25°C、光强35001UX、冷光灯连续光照及黄腐酸的诱导下进行培养，每2天定期取样测量生物量和油脂含量，与对照相比其细胞量有所增加，但其油脂含量增加了5%。
[0025]实施例2
[0026](I)微藻采用单针藻菌株Monoraphidium sp.FXY-10，利用kuhl培养基，按1g L—1的量加入葡萄糖作为碳源，黄腐酸的浓度为80mg L—S然后将上述藻液在25°C、无光照的条件下培养，培养单针藻到达对数生长期后期，此时藻细胞浓度达到6.628g L—1，利用光照培养基稀释到2.3g L—1作为光照培养阶段的种子液。
[0027](2)自养培养阶段，以kuhl作为培养，调整pH值为6.8?7.0。将黄腐酸溶解于超纯水中并配置成100mg L—1的母液，黄腐酸在培养基中的浓度为25mg L—S然后将上述藻液在25°C、光强35001UX、冷光灯连续光照及黄腐酸的诱导下进行培养，每2天定期取样测量生物量和油脂含量，发现微藻的细胞量无明显变化，与对照相比其油脂含量增加了 10-15%左右。
[0028]实施例3
[0029](I)微藻采用单针藻菌株Monoraphidium sp.FXY-10，利用kuhl培养基，按1g L—1的量加入葡萄糖作为碳源，黄腐酸的浓度为80mg L—S然后将上述藻液在25°C、无光照的条件下培养，培养单针藻到达对数生长期后期，此时藻细胞浓度达到6.628g L—1，利用光照培养基稀释到2.3g L—1作为光照培养阶段的种子液。
[0030](2)自养培养阶段，以kuhl作为培养，调整pH值为6.8?7.0。将黄腐酸溶解于超纯水中并配置成100mg L—1的母液，黄腐酸在培养基中的浓度为125mg L—S然后将上述藻液在25°C、光强35001x、冷光灯连续光照及黄腐酸的诱导下进行培养，每2天定期取样测量生物量和油脂含量，发现微藻的细胞量无明显变化，与对照相比其油脂含量增加了 10%左右。[0031 ] 实施例4
[0032](I)微藻采用单针藻菌株Monoraphidium sp.FXY-10，利用kuhl培养基，按1g L—1的量加入葡萄糖作为碳源，黄腐酸的浓度为80mg L—S然后将上述藻液在25°C、无光照的条件下培养，培养单针藻到达对数生长期后期，此时藻细胞浓度达到6.628g L—1，利用光照培养基稀释到2.3g L—1作为光照培养阶段的种子液。
[0033](2)自养培养阶段，以kuhl作为培养，调整pH值为6.8?7.0。将黄腐酸溶解于超纯水中并配置成100mg L—1的母液，黄腐酸在培养基中的浓度为625mg L—S然后将上述藻液在25°C、光强35001x、冷光灯连续光照及黄腐酸的诱导下进行培养，每2天定期取样测量生物量和油脂含量，发现藻细胞量有一定的增加，与对照相比其油脂含量提高了 5%左右。
[0034]最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法，包括以下步骤: 步骤1、制备基于黄腐酸的异养和自养培养基，具体为:异养培养阶段，选择kuhl培养基作为单针藻的基本培养基，分装300ml进入500ml的三角瓶中，按1g L—1的量加入葡萄糖作为碳源，调整pH值为6.8?7.1，加入80mg L-1的黄腐酸，自养培养阶段，选择kuhl培养基作为单针藻的基本培养基，调整pH值为7.0，在500ml的三角瓶中装入200ml的培养基，加入0、5、.25、125、625mg L—1 的黄腐酸; 步骤2、接入产油单针藻进行异养-自养培养，具体为:高压高温灭菌20min，接入产油单针藻，异养培养阶段，藻细胞的初始浓度控制在16个ml—1;自养培养阶段，接种量为2.3g L-1，后进行摇瓶培养，光照强度为35001uX，培养温度为250C，摇床转速为150r min-1; 步骤3、制备生物柴油，将终培养液离心富集，转速为9000r min—1，时间为6min。湿细胞在-70°C下冷冻过夜，后进行抽真空冷冻干燥。添加干藻粉样品2倍质量的石英砂研磨20min后用氯仿-甲醇(2:1，v/v)进行油脂提取，有机溶剂重复提取3次后收集有机相浓缩称重。上述提取油脂加2mL 3%硫酸-甲醇进行甲酯化制备得到生物柴油。
【专利摘要】本发明公开了一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法，首先在异养培养条件下，利用黄腐酸刺激细胞快速生长，当藻细胞生长到对数生长期后期，此时细胞浓度达到6.63g？L-1，离心弃去上清液，作为第二阶段所需的种子液。用纯水配成1000mg？L-1的黄腐酸母液，将其添加到kuh1培养基中使黄腐酸浓度为5、25、125、625mg？L-1。然后将上述所得种子液加入含有不同浓度黄腐酸的kuh1培养基中，使其初始浓度为2.3g？L-1。然后将上述藻液连续光照培养，每2天定期取样测量生物量和油脂含量。本发明方法简单可行，成本低廉，并大幅缩短了培养时间并且油脂含量有较显著地提高，对于微藻生物柴油生产的工业化具有重要意义。
【IPC分类】C12P7/64, C12N1/12, C12R1/89
【公开号】CN105671095
【申请号】CN201610108789
【发明人】余旭亚, 车绕琼, 赵鹏, 徐军伟, 李涛
【申请人】昆明理工大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月27日