一种水稻育种方法
【专利摘要】本发明公开了一种水稻育种方法，包括如下步骤：用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有OsMADS57蛋白的编码基因和OsABC1?2基因的DNA后，用冷乙醇?40℃下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA；将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得混合液；取表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirD1、VirD2或VirE2溶液，依次加入所得混合液、脂质体混合后，加入缓冲液中，4℃放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入水稻中，选择变异材料进行育种。本发明通过适当增加株高、增加穗粒数、增加粒重，适当减少分蘖，注重个体与群体的协调，增加了抗倒能力，使群体产量达到了最大。
【专利说明】
一种水稻育种方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及水稻育种领域，具体一种水稻育种方法。
【背景技术】
[0002]水稻是最重要的粮食作物之一，养活了全世界一半以上的人口。随着人口的增长和生活水平的提高，人们对稻米无论从产量还是品质上均提出越来越高的要求。据推算，至2025年，全球人口将超过80亿，以稻米为主食的人口数量将增至35亿。按最保守的估计，由于人口增长而导致稻米需求量的增加至少达3亿吨。水稻产量的提高，依靠扩大种植面积的潜力已很有限。由于受水资源和耕地面积的限制，加上经济发展和城市化的推进，不少产稻国家的水稻种植面积实际上已有所下降。为此，今后将主要依赖于单位面积产量的提高来进一步提尚水稻广量。
[0003]粒形性状包括粒长、粒宽、粒厚、粒重和长宽比等，是水稻产量的重要构成因子，而植物株型是影响作物产量的重要因素之一，特别对水稻作物而言。目前知道水稻的分蘖数目、分蘖角度、植株高度、叶夹角、水稻穗子的大小和水稻小穗分支多少共同决定了水稻株型，而水稻的分蘖数和穗子的形状又是决定水稻产量的最重要因素。对于水稻分蘖发育而言，分蘖期是水稻营养生长的最主要时期，包括从分蘖芽的分化到幼穗的形成。一般水稻品种，生长环境条件(温度、水分、营养状况)及其种植密度也会影响分蘖的发育。生长周期长的水稻品种一般比生长周期短的水稻分蘖要少一些。水稻分蘖包括一级分蘖和二级分蘖。根据分蘖结实的情况，分蘖又分为有效分蘖和无效分蘖两种。有效分蘖的多少是决定水稻产量重要因素之一。
【发明内容】
[0004]为解决上述问题，本发明提供了一种水稻育种方法，通过适当增加株高、增加穗粒数、增加粒重，适当减少分蘖，注重个体与群体的协调，增加了抗倒能力，使群体产量达到了最大。
[0005]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0006]—种水稻育种方法，包括如下步骤；
[0007]S1、冰上操作，将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至100yg/yl；
[0008]S2、用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有0sMADS57蛋白的编码基因和0sABCl-2基因的DNA后，用冷乙醇_40°C下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA;
[0009]S3、将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1.2yg/yL的混合液；
[0010]S4、取步骤SI所得溶液中的一种或几种共2.Ιμ?，依次加入含6-8μ1的步骤S3所得的混合液，6_9μ1脂质体混合后，加入30_40μ1的缓冲液中，4 °C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入水稻中，选择变异材料进行育种。
[0011]其中，所述缓冲液包含10-18mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸，0.5-0.7mmol/L二氨基乙烷四乙酸，10-15mmol/L氧化钠、0.035yg.yl^-0.0TSyg.μΓ1甲基磺酸乙酯、10-20mmo I/LpH值为8.0的乙二胺四乙酸。
[0012]其中，质粒DNA保护剂包括氢氧化铝溶胶保护剂、磷酸钙保护剂和TWeen20保护剂。
[0013]其中，所述氢氧化铝溶胶保护剂、磷酸钙保护剂和TWeen20保护剂的按体积比为3:2:1。
[0014]本发明具有以下有益效果:
[0015]通过适当增加株高、增加穗粒数、增加粒重，适当减少分蘖，注重个体与群体的协调，增加了抗倒能力，使群体产量达到了最大。
【具体实施方式】
[0016]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0017]以下实施例中，所使用的质粒DNA保护剂包括氢氧化铝溶胶保护剂、磷酸钙保护剂和Tween20保护剂按体积比为3: 2: I混合所得。
[0018]实施例1
[0019]S1、冰上操作，将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至100yg/yl；
[0020]S2、用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有0sMADS57蛋白的编码基因和0sABCl-2基因的DNA后，用冷乙醇_40°C下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA;
[0021 ] S3、将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1.2ug/yL的混合液；
[0022]S4、取步骤SI所得溶液中的一种或几种共2.Ιμ?，依次加入含6μ1的步骤S3所得的混合液，6μ1脂质体混合后，加入30μ1的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入水稻中，选择变异材料进行育种，其中，所使用的缓冲液包含lOmmol/L三轻甲基氨基甲烧-盐酸，0.5mmol/L二氨基乙烧四乙酸，10mmol/L氧化钠、0.035yg.μΓ1甲基磺酸乙酯、10-20臟01/14)!1值为8.0的乙二胺四乙酸。
[0023]实施例2
[0024]S1、冰上操作，将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至100yg/yl；
[0025]S2、用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有0sMADS57蛋白的编码基因和0sABCl-2基因的DNA后，用冷乙醇_40°C下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA;
[0026]S3、将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1.2ug/yL的混合液；
[0027]S4、取步骤SI所得溶液中的一种或几种共2.Ιμ?，依次加入含8μ1的步骤S3所得的混合液，9μ1脂质体混合后，加入40μ1的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入水稻中，选择变异材料进行育种，其中，所使用的缓冲液包含ISmmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸，0.7mmol/L二氨基乙烷四乙酸，15mmol/L氧化钠、0.075yg.μΓ1甲基磺酸乙酯、20mmo I /LpH值为8.0的乙二胺四乙酸。
[0028]实施例3
[0029]S1、冰上操作，将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至100yg/yl；
[0030]S2、用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有0sMADS57蛋白的编码基因和0sABCl-2基因的DNA后，用冷乙醇_40°C下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA;
[0031 ] S3、将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1.2ug/yL的混合液；
[0032]S4、取步骤SI所得溶液中的一种或几种共2.Ιμ?，依次加入含7μ1的步骤S3所得的混合液，7.5μ1脂质体混合后，加入35μ1的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入水稻中，选择变异材料进行育种，其中，所使用的缓冲液包含14mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸，0.6mmoI/L二氨基乙烷四乙酸，12.5mmoI/L氧化钠、0.05yg.μΓ1甲基磺酸乙酯、15mmo Ι/LpH值为8.0的乙二胺四乙酸。
[0033]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种水稻育种方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、冰上操作，将表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirDl、VirD2、VirE2浓度分别调整至ΙΟΟμg/μ?； 52、用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有0sMADS57蛋白的编码基因和OsABCl-2基因的DNA后，用冷乙醇_40°C下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA; 53、将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得外源质粒DNA的浓度为1.2yg/yL的混合液； 54、取步骤SI所得溶液中的一种或几种共2.Ιμ?，依次加入含6-8μ1的步骤S3所得的混合液，6_9μ1脂质体混合后，加入30_40μ1的缓冲液中，4°C放置2小时后，取出，通过花粉管通道法将目的基因导入水稻中，选择变异材料进行育种。2.根据权利要求1所述的一种水稻育种方法，其特征在于，所述缓冲液包含1-1Smmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸，0.5-0.7mmo I /L二氨基乙烷四乙酸，I O-15mmo I /L氯化钠、0.03 5μg.Ur1-O-OTSyg.“1—1甲基磺酸乙酯、10-20臟01/1^!1值为8.0的乙二胺四乙酸。3.根据权利要求1所述的一种水稻育种方法，其特征在于，质粒DNA保护剂包括氢氧化铝溶胶保护剂、磷酸钙保护剂和Tween20保护剂。4.根据权利要求3所述的一种水稻育种方法，其特征在于，所述氢氧化铝溶胶保护剂、磷酸钙保护剂和Tween20保护剂的体积比为3:2:1。
【文档编号】A01H5/00GK105969793SQ201610303747
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】何懿
【申请人】广西兆和种业有限公司