用于鉴定萱草属植物遗传群体结构的引物组、试剂盒及方法

用于鉴定萱草属植物遗传群体结构的引物组、试剂盒及方法
【专利摘要】本发明提供一种用于检测萱草属(Hemerocallis L.)植物遗传多态性的引物组，属于分子生物学领域。所述引物组选自由34对引物对构成的群组：所述34对引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1至SEQ ID No.68所示。上述引物组还可用于萱草属植物遗传群体结构的鉴定。采用本发明所提供的引物组和鉴定方法，可在萱草属植物的任一生长阶段采样，并进行遗传分类鉴定，具有周期短、限制少、准确性高等优点。
【专利说明】
用于鉴定宣草属植物遗传群体结构的引物组、试剂盒及方法
技术领域
[0001] 本发明属于分子生物学领域，具体设及一种用于鉴定宣草属植物遗传群体结构的 引物组、试剂盒及方法。
【背景技术】
[0002] 黄花菜化日111日1'〇。日1113(^付;[]1日)又名金针菜，俗名金针花，为百合科多年生草本植 物，原产于中国南部及日本，其根、叶、茎、花在东亚地区作为食品和传统的药品已有几千年 的历史。黄花菜鲜甜味美，華素兼优，在中国医学3000多年的食疗历史中，黄花菜被列为常 用食疗食品之一。中医认为黄花菜具有平肝养血、消肿利尿、抗菌消炎、止血、镇痛、通乳、健 胃和安神的功能，能治疗肝炎、黄痘、大便下血、感冒、频疾、尿路感染、头晕、耳鸣、屯、惇、腰 痛、水肿、缺乳、关节肿痛等多种病症。黄花菜营养丰富，含有糖类、蛋白质、维生素、无机盐 及多种人体必需的氨基酸。黄花菜属高蛋白、低热值、富含维生素及矿物质的蔬菜。在现代 生活中，黄花菜与香茹、木耳、冬算一起被称为蔬菜类中的四大珍品。选育优质黄花菜品种， 可使性状更稳定，增加产量，营养更丰富，富含花粉、糖类、蛋白质、氨基酸、Ca、P、Fe等矿物 质，胡萝l·素、硫胺素、核黄素等维生素类;抗逆行增强，对病虫害有极强的抵御能力，既耐旱 又耐溃、既耐肥又耐瘡薄、耐盐碱，不需特殊管理，能在路边、沟边及荒地生长，其野生性很 强，综合品质优良等特点。
[0003] 现有技术领域中，分子标记的种类大概包括:RFLP、RAPD、AFLP、SNP、SSR。
[0004] EST化xpressed Sequence Tags)即表达序列标签，指从C DNA文库中随机挑取单 克隆测序所获得的序列片段。序列长度一般约为60-500bp，由于cDNA的5'端或3'端的有限 序列可特异性地代表一个基因，故称为"表达序列标签"。表达序列标签化ST)作为表达基因 所在区域的分子标签因编码DNA序列高度保守而具有自身的特殊性质，与来自非表达序列 的标记(如RAPD、SSR、AFLP等)相比，更有可能突破家系与种的限制。因此，EST标记在亲缘关 系较远的物种间具有更重要的意义。
[0005] EST技术的基本原理是:基因表达遵从中屯、法则，即遗传信息由DNA序列经转录、剪 接后到mRNA分子，mRNA分子由5'-UTR(5'-un1:ranslatedregion，5'非编码区）、编码区 (Coding sequence,简称CDS,为最大的开放阅读框0RF)、3'-UTR(3'region，3'非编码区）和 poly A四部分组成。任何一个基因的5 ' -UTR和3 ' -UTR都是特定的，即每条cDNA的5 '或3 '的 部分序列可特异性地代表某个基因在生物体中的表达情况。由于所测定的cDNA来源于 mRNA，因此，每个EST均代表了所采样品特定发育时期和生理状态下的基因组DNA中一个表 达基因的部分转录序列。由此可W表明，EST的数目可W反映某个基因的表达情况，一个基 因的拷贝数越多，其表达越丰富，测定的相应EST序列就越多，从而通过对生物体EST分析可 W获得生物体内基因的表达种类和丰度。Craig Venter为EST技术的发展做出了不懈努力， 而自动化测序技术将EST技术从结构基因组学扩展到功能基因组学。
[0006] 然而目前，在黄花菜中开发出一种有效的EST-SSR分子标记引物，用于检测宣草属 植物的遗传多态性及遗传结构，在本领域仍属空白。

【发明内容】

[0007]本发明基于本领域的上述空白，提供了一种基于黄花菜材料EST-SSR分子标记的 引物组，它们可用于检测不同宣草属植物间的遗传多态性及遗传结构。
[000引本发明的技术方案如下：
[0009] 用于检测宣草属化emerocallis L.)植物遗传多态性的引物组，其特征在于，所述 引物组选自由下述引物对构成的群组：
[0010] sau00003F/sau00003R；sau00006F/sau00006R；sau00008F/sau00008R； sau00009F/sau00009R;
[0011] sau00010F/sau00010R；sau00029F/sau00029R；sau00042F/sau00042R； sau00045F/sau00045R；
[0012] sau00047F/sau00047R；sau00048F/sau00048R；sau00052F/sau00052R； sau00055F/sau00055R;
[0013] sau00063F/sau00063R；sau00080F/sau00080R；sau00095F/sau00095R； sau00102F/sau00102R;
[0014] sau00104F/sau00104R；sau00109F/sau00109R；sau00120F/sau00120R； sau00121F/sau00121R；
[0015] sau00124F/sau00124R；sau00132F/sau00132R；sau00135F/sau00135R； sau00137F/sau00137R；
[0016] sau00138F/sau00138R；sau00141F/sau00141R；sau00143F/sau00143R； sau00144F/sau00144R；
[0017] sau00150F/sau00150R；sau00160F/sau00160R；sau00164F/sau00164R； sau00171F/sau00171R；
[001 引 sau00172F/sau00172R；sau00180F/sau00180R；
[0019] 上述引物对的核巧酸序列如沈Q ID No. 1至沈Q ID No.68所示。
[0020]用于鉴定宣草属植物遗传群体结构的试剂盒，其特征在于，包括所述的引物组。 [0021 ]所述试剂盒还包括用于PCR反应和/或电泳的常规试剂。
[0022] 用于鉴定宣草属植物遗传群体结构的方法，其特征在于，采用所述的引物组或所 述的试剂盒进行如下步骤：
[0023] (1)采用所述引物组中的每对引物对分别对待鉴定宣草属植物材料群体中的每个 材料的基因组DNA进行PCR扩增；
[0024] (2)凝胶电泳检测所述PCR扩增的产物；
[0025] (3)根据STRUCTURE软件要求的格式对上述电泳条带进行统计；
[0026] (4)将上述统计结果输入STRUCTURE软件进行分析，得出似然值LnP(D)达到最大值 时或Δ K达到最大值时对应的K值，即为确定所述待鉴定宣草属植物材料群体所包含的遗传 群体数目；
[0027] 所述ΔΚ计算公式如下：
[0028] AK=m[ lUK+l)-化化)+L(K-1) I ]/s|L(K)
[0029] 上述公式中，Uk)为每个Κ的对数值，s为标准差，m为平均值。
[0030] 所述PCR扩增的反应体系为：0.2化/化的所述基因组DM做为扩增模板，2 XTaq PCR 1曰816础1如.化1/41，0.5皿〇1/1的所述引物对，其余为双蒸水。
[0031] 所述PCR扩增的反应程序为：94°C，3min; W94°C45s，68~58°Clmin，72°Clmin为 1 个循环，6个循环；W94°C30s，58~50°(：1111111，72°(：1111111为1个循环，9个循环；^941：3〇3,50 °C 30s，72°C Imin 为 1 个循环，20 个循环；72°C 5min; 4°C 保存。
[0032] 所述电泳指，采用8%非变性聚丙締酷胺凝胶，于180V恒功率电压下，电泳分离150 ~180分钟，然后银染显色。
[0033] 所述STRUCTURE软件要求的格式指，每个材料对应的条带大小依次编号记录，相同 大小的条带记为同一编号。
[0034] 所述方法在鉴定宣草属植物材料所属遗传群体中的用途，特征在于:将多种已知 遗传群体分类的宣草属植物材料与待测宣草属植物材料组合起来作为所述待鉴定宣草属 植物材料，进行步骤（1) - (4 )，通过STRUCTURE软件分析所确定的已知材料和待测材料的遗 传群体分类结果来确定待测材料所属的的遗传类群。
[0035] 本发明首先采用已知黄花菜品种进行转录组测序，找到相关的SSR位点，初步筛选 设计192对引物，在192对引物中得到34对引物对构成本发明所述的用于鉴定宣草属 化emerocallis L.)植物遗传群体结构的引物组，采用所述引物组对待测宣草属植物材料 的基因组DNA进行PC則寸，扩增效果好，背景清晰，条带差异明显和便于统计带型，如图5所 /J、- 〇
[0036] 根据本发明的实施，上述34对引物对中的任意一对、多对或全部组成的引物组来 来检测宣草属植物材料的遗传多态性。
[0037] 进一步地，采用上述％对引物对可用来鉴定不同宣草属植物之间的遗传群体结 构，具体步骤和原理如下：用上述34对引物对中的每对引物，分别扩增每个待测宣草属植物 的基因组DNA，所得的电泳条带，按照每个泳道的条带大小位置，分别记下编号，相同大小位 置的条带记为同一编号，例如，第1泳道出现杂合带型，即一大一小两条带，则记为1，2;第2 泳道仅出现一条与1泳道大带型位置一样的纯和带型，则记为1，1;第3泳道仅出现一条与1 泳道小带型位置一样的纯和带型，则记为2,2。依次记录下每对引物扩增的每个待测材料的 电泳条带数据，即形成STRUCTURE软件要求的数据文件，将该数据文件输入STRUCTURE软件， 进行统计分析:在该软件的分析过程中出现最大似然值时或A K达到峰值时，则此时对应得 到的K值即为多个待测材料所分属的遗传亚群数目；上一步得到分析结果中，上述K值对应K 种不同颜色，不同颜色对应不同遗传亚群;每个材料对应的分析结果由不同比例的1-K种颜 色填充，因此可W通过某种颜色所占比例直观看出，不同遗传亚群对该材料的遗传背景影 响程度，即该材料中不同遗传亚群所占的遗传背景份额。
[0038] 进一步地，本发明的上述方法还可W用于检测某种材料的遗传群体归属。将已知 遗传群体分类的宣草属植物材料的基因组DNA与待测宣草属植物材料的基因组DNA-起进 行上述扩增、电泳、ST抓CTURE标准统计、ST抓CTURE软件分析步骤，通过所述待测材料在 STRUCTURE软件中的显示结果是否落入已知材料所属的类群来判断待测材料的具体遗传类 群。
[0039] 采用本发明所提供的引物组、试剂盒和/或方法鉴定宣草属植物遗传群体结构，不 仅能直观显示供试材料分属的类群数目，而且还能直观看出供试材料所含遗传背景的所占 份额，更重要的是，能对未知遗传类群的宣草属植物进行遗传分类，最终确定其所属的遗传 类群。本发明在分析宣草属植物遗传结构时选用STRUCTURE软件进行数据分析，分析结果可 直观看出供试材料分属类群及所含遗传背景占的份额，能通过数据比例直观看出不同遗传 亚群对某种具体材料的遗传背景影响程度。
[0040]采用本发明所提供的方法，可在宣草属植物的任一生长阶段采样，并进行遗传分 类鉴定，具有周期短、限制少、准确性高等优点。
【附图说明】
[0041 ]图1为转录组测序实验流程图。
[0042] 图2为K值的变化趋势。
[0043] 图3为ΔΚ随k值的变化趋势。
[0044] 图4为Κ = 2时，不同材料的分类结果，图中的序号与表1的材料序号相对应。
[0045] 图5为本发明所述引物组中的某些引物的电泳图。
【具体实施方式】
[0046] W下结合具体实施实例进一步阐述本发明，需要说明的是，实例仅用于解释本发 明而不限制本发明的范围。本发明未特别说明的实验试剂均为本领域常规试剂，或采用本 领域常规方法配制而得，可商购获得，规格为实验室纯级即可。
[0047] 生物材料的来源说明
[0048] 本发明实施例1所用到的转录组测序样品：大同黄花，W及实施例3所用到的116株 宣草属植物均为现有已知品种，均可商购获得，其来源说明如下表1所示。
[0049] 表1供试材料信息
[(Κ)加 ]
[0化1 ]
[0化2]
[0版3] 试剂与耗材
[0054]用于DNA提取的2 X CTAB溶液配方如下表2所示：
[0化5]
[0化6]
[0057]其中β-琉基乙醇、氯仿：异戊醇（24:1)、70%乙醇、无水乙醇及异丙醇（需冷藏）。 Tris、邸TANa2、化 C1、CTAB、20 %PVP 需提前灭菌。
[005引电泳所需的丙締酷胺凝胶母液(29:1)配方如下:丙締酷胺(C3也NO) 29g，N，N ' -亚甲 基双丙締酷胺(C化Q02N2)lg，dd也0溶解后定容至100m L。
[0化9] 丙締酷胺凝胶的配方如下：5*Τ邸:Tri巧4g，棚酸化浊〇3)27.5g，邸TA-Na23.7224g， 力时d也0溶解后定容至1000m L。
[0060]引发剂（10%APS):过硫酸锭Ig，加 dd也ο溶解后定容至10m L。
[0061 ]银染过程中用到的试剂配方如下：
[0062] 固定液:888m L蒸馈水+100m L无水乙醇+20m L冰乙酸，揽拌均匀。
[0063] 渗透液:0.?硝酸银定容至1L蒸馈水中，充分溶解并揽拌均匀。
[0064] 显色液:37.5g氨氧化钢+10m L甲醒定容于2.化蒸馈水中充分溶解并揽拌均匀。
[0065] 上述试剂均为国产分析纯，可商购获得。
[0066] 实施例1、本发明所述的引物组
[0067] 本发明选用黄花菜的地方品种"大同黄花"作为样本，送至北京百迈克生物科技有 限公司进行转录组测序，获得一系列EST-SSR引物序列用于筛选符合要求的引物对。
[006引1.转录组测序
[0069] 转录组测序实验流程包括样品检测、文库构建及其质量控制和上机测序。实验流 程如图1所示。
[0070] 2.EST-SSR 引物筛选
[0071] 测序结果显示可识别的SSR共5517个，对应每个SSR标记设计引物，在设计的引物 中，根据特征标记筛选了 192对引物进行合成。用宣草属中H.cihina Baroni、'冲里花'、 '东庄黄花'、H.coreana化kai、H.f lava L.和'金娃娃'6个材料对合成的引物进行多态性 筛选，得到34对多态性SSR引物，运34对引物对构成了本发明所述的用于鉴定宣草属 化emerocallis L.)植物遗传群体结构的引物组，它们的引物名称与序列如下表3所示。
[0072] 表3 34对EST-SSR引物序列
[0073]
[00巧]上述引物对的序列分别对应序列表中的SEQ ID No. 1至SEQ ID No.68。
[0076] 本实施例提供的引物组可W选自上述34对引物对中的任意1对、任意2对，任意3 对、......、任意10对、任意11对、......、任意15对、......、任意20对、......、任意25对、......任意 30对、任意31对、任意32对、任意33对，或者全部34对。采用全部34对进行宣草属遗传群体结 构分析，数据更充分、分析效果更为准确。
[0077] 实施例2、本发明所述的试剂盒及制备方法
[0078] 本实施例提供一种用于鉴定宣草属植物遗传群体结构的试剂盒，该试剂盒包括实 施例1所述的引物组，即序列如SEQ ID No. 1至SEQ ID No.68所示的34对引物对。
[0079] 本实施例还提供所述试剂盒的制备方法，包括在标有鉴定宣草属植物遗传群体结 构的用途的包装盒内放入实施例1所述34条引物对，和/或，组装所述试剂盒的试剂包括实 施例1所述34条引物对。
[0080] 进一步地，所述制备方法还包括，在标有鉴定宣草属植物遗传群体结构的用途的 包装盒内放入用于PCR反应和/或电泳的常规试剂，和/或，组装所述试剂盒的试剂还包括用 于PCR反应和/或电泳的常规试剂。
[0081] 实施例3、用所述引物组或试剂盒进行宣草属植物遗传群体结构鉴定
[0082] 采用实施例1所述的引物组和/或实施例2所述的试剂盒对116个现有已知的宣草 属植物进行遗传群体结构鉴定，过程如下：
[0083] 1.基因组DNA提取过程及检测方法
[0084] 采用CTAB法提取供试材料的基因组DNA，一般选择供试材料的新鲜嫩叶作为DNA提 取部位。
[0085] 用1 %琼脂糖凝胶进行电泳检测JDNA的质量，用Thermo Scientific Nano Drop 2000C分光光度计检测DNA样品浓度。
[00化]2.PCR扩增反应
[0087] 所述PCR扩增的反应体系如下：0.2化/化的所述基因组DNA做为扩增模板，2 X Τ39Μ38?θΓΜ?χ0.3^/μ^0.5(皿ol/L)AiL的所述引物对，其余为双蒸水。
[0088] 在本实施例中，PCR反应体系具体为10化，包含2.化L的模板DNA，2X化qMasterMix 3.0化，5皿〇1 · L-1的引物1. Oul (上、下游引物混合工作液），d地2〇4化。2 X TaqMasterMix购 自中科瑞泰(北京)生物科技有限公司，含有染料。
[0089] PCR采用梯度PCR(即touchdown PCR)，具体程序为：预变性（94°C，3min)，变性（94 °C，45s)，退火(68~58°C，Imin)，延伸（72°C，Imin)，6个循环;变性(94°C，30s)，退火(58~ 501：，1111111)，延伸（721：，1111111)，9个循环;变性(94°(：，303)，退火（50°(：，303)，延伸（72°(：， Imin)，20个循环；延伸（72°C，5min)，，10°C保存PCR产物。因为不同的EST-SSR引物的退火 溫度不同，故退火溫度设为68~50°C。
[0090] 3.PCR产物检测
[0091] PCR产物用8%的非变性聚丙締酷胺凝胶电泳进行检测。电泳过程中，PCR产物的上 样量为2.5~化L，缓冲液为0.5 XT肥，电压180V，电泳150~ISOmin，银染参考张军等(2000) 的程序并照相保存。
[0092] 8%非变性聚丙締酷胺凝胶配方及用量（100ml体系）参照表2-4,配置过程中需要 注意TEM抓和10%APS起到促凝作用，使用时需要现用现加。此外，室溫升高时两者的促凝作 用加快，用量需要适当减少。
[0093] 4.数据的统计与分析
[0094] 4.1带型统计方法
[00M]带型按照STRUCTURE要求的格式进行统计，具体为，按照带型依次编号记录，相同 带型记为同一编号。例如，按照图5中显示的条带，其中14份材料(此处编号只为示例，与表1 序号不同）的带型统计如下， 序号 带型 I 1 2 (注：巧料1为杂合带型，读作12) % 1 I (注：材料2为纯合带型，读作11) 3 1 1 (注；材料3与材料2带型相同，读作1 1) 4 1 2 (注：材料4与材料1带型相同，读作1 2) 5. 1 1 6 1 ,2
[0096] 7 1 3 (往：此处只是部分材料扩増结果，带型3 3在其他部分出现） 8 13 9 0 Q 10 I 3 II I I 12 2 2 13 1 2 14 I 2
[0097] 4.2群体结构分析
[0098] 利用STRUCTURES. 3.4软件估算供试材料的群体结构。对供试材料进行基于数学模 型的类群划分。将上一步按照STRUCTURE要求的格式统计好的带型数据输入 STRUCTURES.3.4软件，根据计算结果中K值对应的似然值化nP(D)值)进行作图，最后，依据 最大似然值原则确定合适的K值。如果似然值随K值增大持续增大，则根据Δ K来确定合适的 K值。
[0099] 似然值(LnP(D)值）（是STRUCTURE软件运行直接得出的。）
[0100] ΔΚ计算公式如下：
[0101] AK=m[ lUK+l)-化化)+L(K-1) I ]/s|L(K)
[0102] 公式中，Uk)为每个Κ的对数值，s为标准差，m为平均值。
[0103] 利用ST抓CTURE软件将116份供试材料进行基于数学模型的群体结构划分。在Κ = 1-10时，随着Κ值的增大，似然值(Ln P(D))也持续增大（图2)，因而，无法依据最大似然值的 原则确定合适的K值。所W，依据Evanno等(2005)提出的方法，根据AK确定亚群数目。如图 2，在K = 2时Δ K有显著的峰值，由此将供试的116材料划分为2个亚群:亚群I，亚群II(图3)。
[0104] 本实施例中所采用的116份供试材料中，大部分均为已知遗传类群的材料，分属宣 草亚群和黄花菜亚群，因此，在鉴定未知遗传类群的宣草属植物材料时，可用其DNA与上述 已知材料的DNA-起进行上述实验步骤，在STRUCTURE软件的显示分类结果中，直观得出未 知材料所属的遗传类群。
[0105] 图3中10、14、21、……36、9、40共计75份材料(红色部分)为亚群I ;3、8、11、……97、 111、4共计41份材料(绿色部分)为亚群11(图3中序号与表1中序号相对应）。
【主权项】
1 ·用于检测萱草属(Hemerocallis L.)植物遗传多态性的引物组，其特征在于，所述引 物组选自由下述引物对构成的群组： sau00003F/sau00003R；sau00006F/sau00006R；sau00008F/sau00008R；sau00009F/ sau00009R；sau00010F/sau00010R；sau00029F/sau00029R；sau00042F/sau00042R； sau00045F/sau00045R；sau00047F/sau00047R；sau00048F/sau00048R；sau00052F/ sau00052R；sau00055F/sau00055R；sau00063F/sau00063R；sau00080F/sau00080R； sau00095F/sau00095R；sau00102F/sau00102R；sau00104F/sau00104R；sau00109F/ sau00109R；sau00120F/sau00120R；sau00121F/sau00121R；sau00124F/sau00124R； sau00132F/sau00132R；sau00135F/sau00135R；sau00137F/sau00137R；sau00138F/ sau00138R；sau00141F/sau00141R；sau00143F/sau00143R；sau00144F/sau00144R； sau00150F/sau00150R；sau00160F/sau00160R；sau00164F/sau00164R；sau00171F/ sau00171R;sau00172F/sau00172R;和/或sau00180F/sau00180R; 上述引物对的核苷酸序列如SEQ ID No. 1至SEQ ID No.68所示。2. 用于鉴定萱草属植物遗传群体结构的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引 物组。3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于PCR反应和/或电泳的常规试 剂。4. 用于鉴定萱草属植物遗传群体结构的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物 组或权利要求2或3所述的试剂盒进行如下步骤： (1) 采用所述引物组中的每对引物对分别对待鉴定萱草属植物材料群体中的每个材料 的基因组DNA进行PCR扩增； (2) 凝胶电泳检测所述PCR扩增的产物； (3) 根据STRUCTURE软件要求的格式对上述电泳条带进行统计； (4) 将上述统计结果输入STRUCTURE软件进行分析，得出似然值LnP(D)达到最大值或Δ K达到最大值时对应的K值，即为确定所述待鉴定萱草属植物材料群体所包含的遗传群体数 目； 所述Δ K计算公式如下： AK=m[ |L(K+1)-2L(K)+L(K-1) | ]/s|L(K) 上述公式中，L(k)为每个K的对数值，s为标准差，m为平均值。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为:0.2yL/yL的所 述基因组DNA做为扩增模板，2XTaq PCR MasterMix 0.3yLAiL，0.5ymol/L的所述引物对， 其余为双蒸水。6. 根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，、所述PCR扩增的反应程序为：94°C， 3min;以94°C45s，68~58°C lmin，72°C lmin为 1 个循环，6个循环；以94°C30s，58~50°C lmin， 72°C lmin为1个循环，9个循环；以94°C30s，50°C30s，72°C lmin为1个循环，20个循环；72°C 5min;4°C 保存。7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述电泳指，采用8%非变性聚丙烯酰胺凝 胶，于180V恒功率电压下，电泳分离150~180分钟，然后银染显色。8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述STRUCTURE软件要求的格式指，每个材 料对应的条带大小依次编号记录，相同大小的条带记为同一编号。9.权利要求4-8任一所述的方法在鉴定萱草属植物材料所属遗传群体中的用途，特征 在于:将多种已知遗传群体分类的萱草属植物材料与待测萱草属植物材料组合起来作为所 述待鉴定萱草属植物材料，进行步骤（1)-(4)，通过STRUCTURE软件分析所确定的已知材料 和待测材料的遗传群体分类结果来确定待测材料所属的的遗传类群。
【文档编号】C12Q1/68GK106011251SQ201610399561
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月7日
【发明人】李森, 史青青, 陈志峰, 侯非凡, 冀芳芳, 张宁, 王金耀, 亢秀萍, 邢国明
【申请人】山西农业大学