一种水体改良微生态制剂的制作方法
【专利摘要】本新型微生态制剂的完整配方包括的细菌种类：类芽孢杆菌（Paenibacillus?sp.）、桥石短芽孢杆菌(Brevibacillus?choshinensis)、芽孢杆菌（Bacillus?sp.）和酿酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae），以及各细菌含量比例为1:1:1:1。本发明优点是：（1）为环境保护以及水产养殖开发出一种抑制蓝藻生长的新型制剂；（2）本微生态制剂用于抑制蓝藻生长，可以有效的提高水体质量，除去水体气味，改善土壤质量等。（3）其形态是液体浓缩液，易溶于水，使用方法为按照将新型制剂按1:32的浓度溶于待处理的水体中。
【专利说明】一种水体改良微生态制剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种新型微生物制剂，具体是发明了一种液体细菌、真菌产品，能够有效抑制蓝藻的生长，能够有效改善水体质量。
【背景技术】
[0002]蓝藻是单细胞原核生物，又叫蓝绿藻、蓝细菌，但不属于细菌，也不是绿藻。蓝藻是一类藻类的统称，其标志便是单细胞、没有以核膜为包裹的细胞核。是一类革兰氏阴性菌，含有色素，能够进行光合作用。
[0003]在一些营养丰富的水体中，蓝藻常于夏季大量繁殖，并在水面形成一层蓝绿色而有腥臭味的浮沫，称为“水华”，大规模的蓝藻爆发，被称为“绿潮”(和海洋发生的赤潮对应)。绿潮引起水质恶化，严重时耗尽水中氧气而造成鱼类的死亡。更为严重的是，蓝藻中有些种类(如微囊藻)还会产生微囊藻毒素(microcystins,简称MCs),大约50%的绿潮中含有大量MCs。MCs除了直接对鱼类、人畜产生毒害之外，也是肝癌的重要诱因。目前水产养殖以及环境保护中主要采用活性碳净水器对被污染水源进行净化，用除草剂以及每隔3-4周定期对池塘换水，或者将池塘划分为小区域等传统方法来降低蓝藻大量繁殖所带来的危害。但是处理效果不佳，并容易带来二次污染。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的问题是创造一种新型的水体改良微生态制剂。该制剂能够有效的抑制蓝藻生长，去除水体的异味，改善水体质量，提高生态环境质量。
[0005]本发明主要通过以下技术方案实现:
本新型微生态制剂的完整配方包括的细菌种类:类芽孢杆菌sp.)、桥石短芽抱杆菌{Brevibacillus choshinensis')、H_^HBacillus sp.)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),以及各细菌含量比例为1:1:1:1。本微生态制剂用于抑制蓝藻生长，可以有效的提高水体质量，除去水体气味，改善土壤质量等。其形态是液体浓缩液，易溶于水，使用方法为将新型制剂按1:32的的浓度溶于待处理的水体中。
[0006]该新型微生态制剂为液体制剂，具体制备方法包括以下步骤:
(1)菌种的保存与活化
类芽孢杆菌iPaenibacillus sp.)于4 °C保存于含15%甘油的TSB培养基中。TSB培养基的配方:称取30g Tryptic Soy Broth (TSB)培养基粉加入1000ml蒸馏水中，混匀。高压灭菌后备用。菌种用微量移液器移取IOW菌液接种于3-5ml的液体牛肉膏蛋白胨培养基中，PH ^ 7.0-7.2 ；200rmp/min摇床培养，30°C，18-20小时。桥石短芽孢杆菌(Bre vi bad Ilus choshinensis')、HW^m^acillus sp.)的保存于培养方法同类芽抱杆|if {Paenibacillus sp.)。
[0007]酿酒酵母(<^/'611^51/<361)于4°(1|保存于含15%甘油的YPD培养基中。YPD培养基的配方:称取49g Yeast Peptone Dextrose Agar (YPD)培养基粉加入1000ml蒸馏水中，混匀，高压灭菌后备用。
[0008](2)种子液的制备
按照0.05%-0.5%的比例(体积百分比)向含牛肉膏蛋白胨液体培养的250ml锥形瓶内加入步骤(1)制备的接种液，30°C，200 rmp/min摇床培养21_24h，得到菌液，其中含类芽孢杆菌iPaenibacillus sp.)浓度不小于5 X 109CFU/ml。桥石短芽孢杆菌(Bre vi bad Ilus choshinensis')、HW^m^acillus sp.)的保存于培养方法同类芽抱杆HPaenibaciIIus sp.)。酿酒酵母cereFisiaeO加入含有 YPD 的培养基中培养48-72h，其余步骤同上。
[0009](3)发酵培养 方法一:
将步骤(2)所得的细菌种子液按照1-10%比例(体积百分比)接入肉汤培养基中，再在28-34°C、摇床转速为170-210rpm/min的条件下培养22-25小时，得到个菌株制剂。
[0010]将将步骤(2)所得的酿酒酵母种子液按照1-10%比例(体积百分比)接入YPD培养基中，再在28-34°C、摇床转速为170-210rpm/min的条件下培养22-25小时，得到个体菌株制剂。
[0011]将步骤(2)所得的酿酒酵母种子液按照1-10%比例(体积百分比)接入YPD培养基中，再在28-34°C、摇床转速为170-210rpm/min的条件下培养22-25小时，得到个体菌株制剂。
[0012]方法二:
将步骤(2)所得的细菌种子液按照菌悬液混合液:糖浆:蒸馏水=1:1:20的比例(体积百分比)培养，再在28-34°C、摇床转速为170-210rpm/min的条件下培养22-25小时，得到菌株混合制剂。
[0013]4、微生态制剂的配制
在无菌条件下，将方法一所得的菌株制剂综合在一起，各细菌含量比例为1: 1: 1: 1，制成制剂，灌装。
[0014]本品为液体，易溶于水。
[0015]【具体实施方式】:
下面结合实施例进一步阐述本发明。
[0016]A:采用平板稀释法验证本新型微生态制剂抑制蓝藻生长。
[0017]可以简述一下，MIC测定过程。按照1:32体积稀释溶解本新型制剂制成原液，然后采用两倍稀释法，进一步稀释原液，与培养基混匀，倒平板。在制好的平板上接种蓝藻细菌，培养一周，观察蓝藻生长情况，随着浓度降低，发现蓝藻生长的越旺盛，高浓度没有长，原液也没有长，得到的结论是该新型微生态制剂可抑制蓝藻生长。
[0018]B:采用肉汤微量释法验证本新型微生态制剂抑制蓝藻生长，去除水体异味。
[0019]按照1:32体积稀释溶解本新型制剂制成原液，然后采用两倍稀释法，进一步稀释原液，分别移取到20ml的试管中，向试管接种蓝藻细菌，培养一周，观察蓝藻生长情况，随着浓度降低，发现蓝藻生长的越旺盛，高浓度没有长，原液也没有长，水体异味也随着蓝藻减少而降低，得到的结论是该新型微生态制剂可抑制蓝藻生长并能去除水体异味。
【权利要求】
1.一种抑制蓝藻生长的有益菌共生共荣组成的新型微生物制剂，该新型制剂的完整配方包括的细菌种类:类芽孢杆菌（Paenibacillus sp.)、桥石短芽孢杆菌{Bre vibadiluschoshinensis)、HW^:miacillus sp.)和酿酒酵母(feccAaro焊ces cereFisiae),各细菌含量比例为1:1:1:1。
2.根据权利要求1所述的一种抑制蓝藻生长的有益菌组成的新型微生物制剂，其特征在于本新型制剂用于抑制蓝藻生长，去除水体异味，改善水体质量。
3.根据权利要求1所述的一种抑制蓝藻生长的有益菌组成的新型微生物制剂，其特征在于:本制剂为液体，易溶于水，使用方法为按照将新型制剂按1:32的的浓度溶于待处理的水体中。
【文档编号】C02F3/34GK103589666SQ201310505225
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月24日 优先权日:2013年10月24日
【发明者】邹立扣, 吴国艳, 郭莉娟, 何雪梅, 程琳, 王旭熙, 李蓓, 龙梅, 高兰惠 申请人:四川农业大学