本发明属于水产饲料领域，涉及牛磺酸复合制剂在石斑鱼饲料中的应用，具体涉及石斑鱼饲料中使用石斑鱼用牛磺酸复合制剂降低石斑鱼体脂沉积，提高机体抗氧化能力的作用。
背景技术：
随着我国集约化、工厂化水产养殖的迅速发展，各种不利的养殖环境条件和因子成为影响养殖鱼类正常生长的重要制约因素。目前水产养殖生产中因养殖环境条件改变使养殖鱼类处于应激状态而引起机体代谢机能低下、生产性能下降，甚至病害等现象发生，其中，最具代表性的一种病征是一种营养代谢性疾病——脂肪肝。病鱼表现为生长速度、免疫力下降，易受病原感染而爆发疾病；此外，病鱼的抗应激能力也下降，抗高温、高氨氮等不利环境因子应激的能力较弱，时有大量死亡的病例报告，造成很大经济损失。虽经多年防控实践，但因缺乏对其发生机制的深入了解而不能有效遏制其发生。水产养殖中，高脂低蛋白饲料对维持养殖环境与保护生态资源意义重大，是目前水产饲料发展的趋势，但高脂饲料的应用加剧了养殖鱼类脂肪肝的发生，成为脂肪肝发生的主要诱因，因此，开发有效的鱼类脂肪肝防控技术对于促进鱼类健康养殖具有积极意义。
牛磺酸的化学名为2-氨基乙磺酸，是一种β含硫氨基酸，是动物体内不参与蛋白质合成的含量最多的游离氨基酸，也是一种具有多种生物活性功能的氨基酸，对于维持机体正常的生理功能起着至关重要的作用。目前牛磺酸全球总产量达5万吨，我国生产量在4万吨左右，主要用在功能性食品添加剂和传统医药领域，如乳制品、饮料、保健品、医药品、化妆品等，用途广泛。目前，虽然已有牛磺酸复合制剂出现，但主要是作为降血脂、降血糖等临床应用。
在水产养殖中，牛磺酸是大多数养殖鱼类的一种条件性必需氨基酸。饲料中补充适量牛磺酸可以促进大菱鲆、真鲷、斜带石斑鱼、罗非鱼和牙鲆等鱼类的生长，当饲喂牛磺酸缺乏的饲料时，黄鰤鱼、五条鰤、石斑鱼、罗非鱼的生长变得迟缓，黄鰤鱼还出现绿肝综合征。海水鱼依赖牛磺酸的程度一般高于淡水鱼。目前牛磺酸主要是作为营养物质添加到饲料中以满足养殖鱼类正常生长发育需要，如外源补充牛磺酸可减轻因植物蛋白源大比例替代鱼粉而引起的饲料适口性下降、牛磺酸含量不足等问题。此外，牛磺酸还用于仔鱼生物饵料(如卤虫、轮虫)的营养强化培养。然而，人们对牛磺酸的生物活性功能之于养殖鱼类的生长发育、保健的作用仍缺乏深入了解，难以有效指导水产养殖生产，在使用上还缺乏一定的盲目性，进一步研究牛磺酸对养殖鱼类的生物学功能对开发高效安全的水产饲料和饲料添加剂，促进水产养殖持续健康发展具有积极意义。
近年来，人们对牛磺酸在水产饲料中的应用进行了有益探索，提出了各种技术解决方案。
公开号为CN104012799A的发明专利申请公开了牛磺酸在制备低鱼粉青鱼用饲料中及制备青鱼用抗拥挤应激剂中的应用，通过在低鱼粉(鱼粉5-10％)饲料中添加0.1％～0.4％的牛磺酸，可使肉食性鱼类饲料中鱼粉含量降低10％左右，并且可以提高鱼类的抗拥挤应激能力，其饲料成本可降低300元/吨以上。
公开号为CN104171648A的发明专利申请公开了一种促进鱼类肝脏健康的饲料添加剂，按质量百分数100％计，由以下组分组成：胆汁酸15～20％，牛磺酸10～15％，β-葡聚糖10～15％，甘露寡糖8～12％，L-肉碱5～8％，胆碱6～10％，其余为填充物。本发明的促进鱼类肝脏健康的饲料添加剂的添加量为饲料总质量的0.1～0.2％。该发明能够减少脂肪在鱼类肝脏中的积累，提高鱼类肝脏转运脂肪的能力，减轻肝脏代谢负担，改善鱼体健康状况和促进生长。
公开号为CN1281149C的发明专利申请公开了一种石斑鱼诱食剂及其制备方法，该诱食剂的成分组成按重量比为：动物蛋白酶解物干粉70-85％、核苷酸2-10％、含硫化合物0.4-3％、复合氨基酸5-15％、甜菜碱2-20％、色素0.5-5％和抗氧化剂0.1-0.5％。该诱食剂能有效地吸引水产养殖动物摄食饲料，提高饲料利用率，促进生长，增强疾病抵抗力，提高成活率。
已公开的相关专利主要以牛磺酸与免疫增强剂或中草药配伍来改善鱼体肝功，增强免疫功能，但因这类产品过多强调了免疫促进作用，没有考虑其免疫增强时效性，应用时需要采取相应的措施才能取得一定效果，使用技术难度大，操作复杂，长期连续使用还可能引起免疫抑制的潜在风险。
综上所述，目前提出了一些将牛磺酸作为饲料添加剂用于促进养殖鱼类摄食与生长或增强机体免疫功能的技术方案，这些技术方案在一定程度上解决了现有技术的不足，但是，牛磺酸作为生物活性物质在鱼类的抗氧化和降脂等方面的作用还未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种配方简单、使用安全、能降低石斑鱼体脂沉积、提高机体抗氧化能力的石斑鱼用牛磺酸复合制剂。
为了实现本发明目的，本发明所述的能降低石斑鱼体脂沉积、提高机体抗氧化能力的石斑鱼用牛磺酸复合制剂由以下重量份的原料组成：牛磺酸30-70份、丙氨酰谷氨酰胺10-40份、维生素C多聚磷酸酯2-6份、维生素E 1-5份、玉米淀粉4-19份。
作为优选，所述的石斑鱼用牛磺酸复合制剂由以下重量份的原料组成：牛磺酸40-70份、丙氨酰谷氨酰胺10-30份、维生素C多聚磷酸酯2-4份、维生素E 1-3份、玉米淀粉4-15份。
更为优选，所述的石斑鱼用牛磺酸复合制剂由以下重量份的原料组成：牛磺酸66份、丙氨酰谷氨酰胺20份、维生素C多聚磷酸酯3份、维生素E 2份、玉米淀粉9份。
所述石斑鱼用牛磺酸复合制剂的用量为饲料重量的1-2％。
本发明所述牛磺酸是中枢神经系统发育和再生的必需营养物质，有利于神经细胞的增殖、存活以及神经轴突的延长；牛磺酸还参与糖类、脂类及蛋白质代谢，促进脂肪消化吸收，胰腺β细胞释放胰岛素，促进糖酵解，行驶信号分子作用，促进细胞生长和增殖。牛磺酸可作为内源性细胞保护剂和抗氧化剂，稳定细胞膜，维持细胞钙离子稳定和渗透压调节，清除机体活性氧或增强机体抗氧化酶系统功能，维持胰岛β细胞分泌功能和肝细胞结构和功能的正常，并通过维持肝内谷胱甘肽水平而发挥去毒保肝及预防脂肪肝的作用，保证体内糖代谢和脂质代谢的正常，预防高血脂、高血糖，动脉粥样硬化引发的一系列组织细胞代谢紊乱和结构损伤。此外，牛磺酸还可降低炎性因子水平，减轻炎性反应。
本发明所述丙氨酰谷氨酰胺是2-氨基-5-羧基戊酰胺与谷氨酸作用生成的一种二肽，其溶解性好，稳定性高，在体内能够迅速降解为谷氨酰胺，发挥谷氨酰胺的营养生理作用，可作为养殖动物生产中谷氨酰胺的有效替代品。作为谷氨酰胺的供体，丙氨酰谷氨酰胺为肠道粘膜细胞代谢细胞发育提供能量，维持肠道粘膜上皮结构的完整性，维持肠道免疫功能，改善肠道健康；可通过维持和增加细胞内的谷胱甘肽的水平，增强机体抗氧化能力，稳定细胞膜结构，维持脏器的正常功能；可促使淋巴细胞、巨噬细胞的分化增殖，增加细胞因子的产生，改善机体代谢状况和免疫功能。
维生素C多聚磷酸酯是维生素C的衍生物，是维生素C的一种稳定型产品，在动物体内经酶解析出游离维生素C，发挥维生素C特有的营养生理功能，是在畜牧业和水产业应用中的一种理想的营养物质添加剂。维生素C可促进胶原蛋白的生物合成，维持骨骼和牙齿稳固，还可有效清除组织细胞内的自由基，阻止脂质过氧化产生的危害，保护肝脏解毒能力和维持细胞完整性及正常代谢功能。维生素C有利于组织创伤口的愈合，促进酪氨酸和色氨酸的代谢，促进胆固醇排泄，预防动脉硬化，增强机体对外界环境的抗应激能力和免疫力。
维生素E是一种脂溶性维生素，又名生育酚，既是一种营养物质，又是一种天然的抗氧化剂。维生素E可维持正常胰岛β细胞结构和功能，提高机体胰岛素敏感性，有效地调节血脂和血糖，同时维生素E能减轻机体细胞免受自由基的毒害，改善脂质代谢，预防冠心病、动脉粥样硬化。
玉米淀粉用作上述生物活性物质的载体。
丙氨酰谷氨酰胺主要参与肠粘膜细胞的能量代谢，为肠粘膜细胞提供能量，维持肠细胞的正常代谢功能，而牛磺酸主要参与脂类代谢，促进脂肪消化吸收，并作为渗透压调节剂维持正常的鱼体组织细胞结构和功能，因此，肠粘膜细胞结构与功能的稳定有利于牛磺酸、维生素C和维生素E的吸收和转运，同时有利于牛磺酸在肠道内与胆汁酸结合，促进脂肪的消化和吸收。维生素C和维生素E进入体内后进一步发挥其各自的营养生理功能，维持正常的新陈代谢。
本发明首次使用牛磺酸与丙氨酰谷氨酰胺、维生素C多聚磷酸酯和维生素E进行配伍，不仅能改善肠道功能，促进营养物质消化吸收，而且能有效改善包括鱼类肝组织在内的多种组织的代谢功能，增强鱼体蛋白质、脂肪和糖代谢，改善细胞内环境，促进细胞生长和增殖，降低脂肪在组织中堆积，保护细胞代谢产生的各种自由基对鱼体组织细胞的损害，从而维持鱼体代谢稳态。
本发明具有以下有益效果：
1、在石斑鱼饲料中使用本发明所述的石斑鱼用牛磺酸复合制剂，可促进石斑鱼生长，并可以有效地降低鱼体脂肪沉积及降低肝脂含量；
2、在石斑鱼饲料中使用本发明所述的石斑鱼用牛磺酸复合制剂，可以有效地提高鱼体抗氧化能力。
3、本发明所述的石斑鱼用牛磺酸复合制剂为粉剂，制备时，只需按配方称取原料，再混匀即可。该制剂在饲料中的添加比例为1-2％，配制饲料时，直接添加，无需再对饲料配方做特别调整，操作简单。
通过实施例2的验证试验可得本发明所述的石斑鱼用牛磺酸复合制剂具有促进石斑鱼生长和饲料转化效率、降低肝体比、降低石斑鱼体脂和肝脂沉积、可明显提高斜带石斑鱼肝脏和血浆中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、血清抗氧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及总抗氧化能力，同时明显降低丙二醛含量的效果。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：石斑鱼用牛磺酸复合制剂制备
原料见表1；
表1各石斑鱼用牛磺酸复合制剂所用原料表(重量份)
制备方法：按配伍称取各原料，放入搅拌机中充分混合均匀，即得各石斑鱼用牛磺酸复合制剂。
实施例2：
表2为基础饲料配方及营养成分表。
表2基础饲料配方及营养成分表
配制试验饲料时，分别以1％、1.5％、2％的比例添加石斑鱼用牛磺酸复合制剂(用石斑鱼用牛磺酸复合制剂3配制)，同时相应减少表2中微晶纤维素的比例。
以酪蛋白和明胶(4:1)作为蛋白源，鱼油、豆油和大豆卵磷脂作为脂肪源，以玉米淀粉作为淀粉源，以结晶纤维素作为填充剂，配制一种不含牛磺酸复合制剂的基础饲料(对照料)，然后，将石斑鱼用牛磺酸复合制剂按1％、1.5％、2％比例添加到基础饲料中同时相应减少表2中微晶纤维素的比例，配制成两种不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂添加比例的试验料(饲料1、饲料2、饲料3)：酪蛋白、明胶和虾粉用粉碎机粉碎后过60目筛网，根据饲料配方混合原料，加水适量水拌匀，用双螺杆制粒机制成2.5mm的颗粒饲料。斜带石斑鱼幼鱼在水族箱中暂养2周后，挑选健康无病、大小基本一致的幼鱼随机分配到12个有循环水装置的养殖桶内(150L)，每桶20尾。将12个圆桶随机分成4个处理组，每组3个重复。
每天在8:30和18:30投喂，每次投喂至饱食。每次投喂半小时后用虹吸法收集剩料，随后清污，清污后用新鲜过滤海水补足箱内排掉的海水。养殖过程中，每天观察和记录斜带石斑鱼的摄食和行为活动，养殖周期56d。养殖期间用增氧泵持续增氧，自然光照。养殖期间水温25-31℃，溶氧量保持在5.9mg/L以上。
养殖试验结束后，分别所有养殖桶中试验鱼称重，以计算增重率、饲料系数，称重后放回养殖桶内稳定24h。从每桶取6尾鱼，丁香酚麻醉，称重，尾静脉取血，全血4℃过夜，离心(3000r/min离心10min)，取血清保存于-80℃冰箱，用于测定生化指标。将采完血的试验鱼解剖，取肝脏，称重，置于冻存管，用液氮速冻后，再在-80℃冻存，用于测定生化指标。另从每桶取5尾鱼合并为一个全鱼样本，并装入自封袋，-20℃保存，用于体成分的测定。实验结果见表3。
表3饲料中不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂添加剂量对斜带石斑鱼生长性能的影响表
同一列数字上标字母不同表示差异显著(P<0.05)。
表3为摄食含不同剂量石斑鱼用牛磺酸复合制剂的饲料后斜带石斑鱼生长试验结果。由表3可见，饲料1组、饲料2组、饲料3组石斑鱼增重率大于对照料组，可见，对照料组生长速度明显慢于饲料1、饲料2组和饲料3组。饲料1组、饲料2组和饲料3组的饲料效率高于对照料组，而对照料组的肝体比明显高于饲料1、饲料2组和饲料3组。结果表明添加石斑鱼用牛磺酸复合制剂能明显促进石斑鱼生长和饲料转化效率，降低肝体比。
饲料水分采用干燥法(105℃)测定，粗蛋白质采用FOSS公司Kjeltec8400型自动定氮仪测定，粗脂肪采用索氏抽提法测定，灰分采用灼烧法(550℃)测定。
全鱼称重后用绞肉机绞碎，置于玻璃器皿中，70℃干燥箱干燥，置于室内，48h后称重，用粉碎机粉碎制备成全鱼风干样品。鱼体常规成分测定方法同饲料常规成分测定方法。肝糖元(mg/g肝湿重)用碱消化法测定，试剂盒由南京建成生物工程研究所生产采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。肝脂(肝湿重，％)采用氯仿-甲醇提取法测定。实验结果见表4。
表4饲料中不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂添加剂量对斜带石斑鱼鱼体成分、肝糖原和肝脂含量的影响表
同一列数字上标字母不同表示差异显著(P<0.05)。
表4为摄食含不同剂量石斑鱼用牛磺酸复合制剂的饲料后斜带石斑鱼体成分、肝糖原及肝脂含量结果。由表4可见，饲料中添加石斑鱼用牛磺酸复合制剂可明显提高体蛋白质含量而降低体脂肪含量，对鱼体水分和灰分没有影响；饲料中添加不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂水平不影响鱼体成分。饲料中添加不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂可明显降低鱼肝脂含量，但是牛磺酸复合制剂添加组肝脂含量差异不明显。说明饲料中添加牛磺酸复合制剂有利于降低石斑鱼体脂和肝脂沉积。
血浆和肝脏组织中总抗氧化能力采用ABTS法测定，超氧化物歧化酶活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，过氧化氢酶活性采用可见分光光度法测定，谷胱甘肽过氧化物酶活性采用DTNB法测定，丙二醛含量采用TBA法测定。实验结果见表5、表6。
表5饲料中不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂添加剂量对斜带石斑鱼肝脏抗氧化能力的影响表
同一列数字上标字母不同表示差异显著(P<0.05)。
表5为摄食含不同剂量石斑鱼用牛磺酸复合制剂的饲料后斜带石斑鱼肝脏抗氧化能力结果。由表5可见，饲料中添加石斑鱼用牛磺酸复合制剂可明显提高斜带石斑鱼肝脏超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及总抗氧化能力，同时明显降低丙二醛含量。
表6饲料中不同石斑鱼用牛磺酸复合制剂添加剂量对斜带石斑鱼血清抗氧化能力的影响表
同一列数字上标字母不同表示差异显著(P<0.05)。
表6为摄食含不同剂量石斑鱼用牛磺酸复合制剂的饲料后斜带石斑鱼血清抗氧化能力结果。与表5的结果类似，饲料中添加石斑鱼用牛磺酸复合制剂明显促进血清抗氧化酶活性、总抗氧化能力，同时降低血清丙二醛含量。
石斑鱼用牛磺酸复合制剂1、石斑鱼用牛磺酸复合制剂2、石斑鱼用牛磺酸复合制剂4、石斑鱼用牛磺酸复合制剂5与石斑鱼用牛磺酸复合制剂3同样具有促进石斑鱼生长和饲料转化效率、降低肝体比、降低石斑鱼体脂和肝脂沉积、可明显提高斜带石斑鱼肝脏和血浆中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、血清抗氧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及总抗氧化能力，同时明显降低丙二醛含量的效果。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。