高活性海洋酵母干粉的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及海洋酵母干粉制备领域，特别是涉及一种高活性海洋酵母干粉的制备方法。
【背景技术】
[0002]目前的海洋酵母大部分为在液态培养液中冷冻保存，存在难于保存，以及投入海参养殖水体中活性菌成活率低的弊病，使养殖用户在使用上不方便。
【发明内容】
[0003]基于上述现有技术所存在的问题，本发明提供一种高活性海洋酵母干粉的制备方法，能制备活性比例高，生长繁殖块，避免液态培养液难于保存以及投入养殖水体中活性菌成活率低的弊病，使养殖用户在使用上更方便，用在海水养殖中生长效果明显。
[0004]为解决上述技术问题，本发明提供一种高活性海洋酵母干粉的制备方法，包括以下步骤:
[0005]以满足海参养殖筛选试验的一种海洋酵母菌为原种，采用酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基，将原种经斜面和摇床做成种子液，将所述种子液接入种子罐，再将所述种子罐中的所述种子液接入发酵生产罐中进行培养，将培养出的海洋酵母发酵液用离心机浓缩成海洋酵母浓缩液，将所述海洋酵母浓缩液加入保护剂后通过喷雾干燥塔喷成干粉，即得到高活性海洋酵母干粉。
[0006]本发明的有益效果为:该方法通过发酵生产罐生产出海洋酵母发酵液，用离心机浓缩，然后用喷雾干燥塔加入保护剂后，喷成干粉，这样海洋酵母干粉活性菌比例达80%以上，避免液态培养液难于保存以及投入养殖水体中活性菌成活率低的弊病，使养殖用户在使用上更方便，效果更显著。由于原料菌种是满足海参养殖筛选试验的一种海洋酵母菌，菌体富含蛋白质、肝糖、不饱和脂肪酸、动物幼体生长激素等，利用该菌体制备的干粉既可以净化水质，又可作饵料使用，能有效促进海参生长和一定的病害防止。海洋酵母投入水体中可以复活生长繁殖、生长代谢，可以净化水中的氨氮、硫化氢等有害物质，使养殖池池底保持清洁，养殖池有自净能力，可长期不换水，对海参苗生长有明显效果。
【具体实施方式】
[0007]下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
[0008]本发明实施例提供一种高活性海洋酵母干粉的制备方法，该方法制备的海洋酵母干粉活性比例高，生长繁殖块，海参养殖中生长效果明显，具体包括以下步骤:
[0009]以满足海参养殖筛选试验的一种海洋酵母菌为原种，采用酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基，将原种经斜面和摇床做成种子液，将种子液接入种子罐，再将种子罐中的种子液接入发酵生产罐中进行培养，将培养出的海洋酵母发酵液用离心机浓缩成海洋酵母浓缩液，将海洋酵母浓缩液加入保护剂后通过喷雾干燥塔喷成干粉，即得到高活性海洋酵母干粉。该高活性海洋酵母干粉的菌数不少于80亿每克，其中活性菌不少于80%。
[0010]上述方法中，作为原种的满足海参养殖筛选试验一种海洋酵母为:
[0011]采用汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)菌或从鲜活海参肠道中提取的一种海洋酵母菌，将酵母菌接入斜面，斜面长好后上摇床做成发酵酵母菌液，将发酵酵母菌液用于海参养殖筛选试验(可用250升塑料槽，30立方米大池，进行海参养殖筛选试验)，按每5天投1ppm发酵酵母菌液，不换水，其它按正常养殖模式管理，若养殖15天海参苗成活率达95%，增重率30%，则该海洋酵母菌满足要求能作为原种留用，作为原种的菌种可用液体石蜡或冷冻干燥保藏法长期保存，以备使用。
[0012]从鲜活海参肠道中提取的一种海洋酵母菌，可按下述方式提取:
[0013]取鲜活海参肠道5厘米(或其它海洋生物(如海水黑鱼，芽鲆等肠道5厘米)放Λ 10ml已灭菌酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基中，另加土霉素10毫克和青霉素10毫克，摇床温度30°C，每分钟170转，3天后划线分离，当单菌落酵母菌长出后，用平板分离提纯三次，得到一种海洋酵母菌。
[0014]上述方法中，采用酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基，将原种经斜面和摇床做成种子液包括:
[0015]酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基由按重量比为:酵母膏0.5、蛋白胨1、葡萄糖2和海水100混合而成；
[0016]将保存于冷冻干燥保藏法冻干粉或液体石蜡中的海洋酵母菌原种接入斜面培养基(斜面培养基为酵母膏蛋白胨葡萄糖琼脂海水海洋酵母培养基，由按重量比为酵母膏
0.5、蛋白胨1、葡萄糖2、琼脂2和海水100混合而成)中，在30°C温度条件下培养48小时；将培养好的斜面菌种洗脱入装有酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基的容器中上摇床，摇床速度为每分钟170转，在30°C温度条件下培养72小时，制成种子液。
[0017]上述方法中，将种子液接入种子罐为:
[0018]种子液按重量5%接入种子罐，30°C温度条件下培养72小时，种子罐搅拌转速为120转每分钟，充气为每小时0.15立方米，种子罐中采用酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基。
[0019]上述方法中，再将种子罐中的种子液接入发酵生产罐中进行培养为:
[0020]将种子罐的种子液按重量5%接入发酵生产罐中，30°C温度条件下培养72小时，发酵罐搅拌转速为120转每分钟，充气为每小时5立方米，发酵生产罐的罐压为0.045MPa，发酵生产罐灭菌温度为121°C灭菌30分钟；发酵生产罐的培养基pH值为5.5，该培养基按重量比组成为:葡萄糖2、固体发酵大豆蛋白4、酵母膏0.5、尿素0.14、磷酸二氢钾0.015、硫酸镁0.01、硫酸亚铁0.008、豆油0.1和海水100 ；
[0021]其中，固体发酵大豆蛋白的制备步骤如下:
[0022]采用下述重量配比的原料:大豆蛋白100、水60、玉米粉14、麸皮8和EM菌液5 ;其中，EM菌液的总菌数大于或等于20亿/毫升，EM菌液内的各菌种上种子罐的菌液按重量比为:枯草芽孢杆菌液2、地衣芽孢杆菌液2、巨大芽孢杆菌液2、蜡状芽孢杆菌液2、保加利亚乳杆菌液5、乳酸杆菌液5、酿酒酵母菌液2、假丝酵母菌液2、径阳链霉菌液I和黑曲霉菌液I ;EM菌液各菌种的菌液上种子罐后再接入发酵罐培育生产，种子罐与发酵罐的培养基相同，该培养基的按重量比组成为:蛋白胨2、黄腐酸4.9、酵母膏4、硫酸铵2、味精0.95、氯化钾0.85、香菇粉2、磷酸二氢钠3.2、轻质碳酸钙15.1、红糖55.9，豆油I和水1000 ；
[0023]将原料用微波杀菌机灭菌，工具及衣物用紫外灯和臭氧机消毒，水用次氯酸钠消毒，各原料搅拌均匀后装入发酵饲料袋中，袋口密封，挤出空气，温度30°C培养20天，即得到固体发酵大豆蛋白。
[0024]上述方法还包括:当发酵生产罐发酵48小时后向发酵生产罐内补充发酵生产罐培养基的补料步骤，补料量为培养基总重量的一半，72小时菌数大于或等于20亿/ml得到发酵生产罐培养出的海洋酵母发酵液。
[0025]上述方法中，将培养出的海洋酵母发酵液用离心机浓缩为:将培养出的海洋酵母发酵液用机械离心机离心浓缩为每毫升菌数100亿的海洋酵母浓缩液。
[0026]上述方法中，将浓缩液加入保护剂后通过喷雾干燥塔喷成干粉为:
[0027]以脱脂奶粉、海藻糖、淀粉，甘油和轻质碳酸钙作为保护剂；
[0028]将浓缩液与脱脂奶粉、海藻糖、淀粉、甘油，轻质碳酸钙按重量比为4:1:1:0.5:
0.5:2混合后，用喷雾干燥塔喷雾，喷雾干燥塔空气进口温度为130°C，出口温度为60°C，SP得到高活性海洋酵母干粉。
[0029]下面结合具体实施例对本发明的制备方法作进一步说明。
[0030]本发明的制备方法包括以下步骤:
[0031]I)选择原种；原种采用满足海参养殖筛选试验的汉逊德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)菌或从鲜活海参肠道中提取的一种海洋酵母菌，以从鲜活海参肠道中提取的一种海洋酵母菌为例，取鲜活海参肠道5厘米放入10ml已灭菌酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基(由0.5克酵母膏、I克蛋白胨、2克葡萄糖和100毫升海水混合而成)中，另加土霉素10毫克，青霉素10毫克，摇床温度30°C，搅拌速度为170转/分，3天后划线分离，当单菌落酵母菌长出后，用平板分离提纯三次，再用摇床做出发酵酵母菌液，把发酵酵母菌液用250升塑料槽，30立方米大池进行海参养殖筛选试验，若每5天投1ppm菌液，不换水，其余按常规养殖方法管理，养殖15天海参苗成活率达95%，增重率30%此菌种可以留用，满足条件可作为原种，将菌种用液体石蜡或冷冻干燥保藏法长期保存；
[0032]2)将保存于冷冻干燥保藏法冻干粉或液体石蜡中原种海洋酵母接入斜面培养基(由0.5克酵母膏、I克蛋白胨、2克葡萄糖、2克琼脂和100毫升海水混合而成)中，在温度300C的条件下培养48小时；将长好的斜面菌种洗脱入容量为500ml并装有10ml酵母膏蛋白胨葡萄糖海水海洋酵母培养基的三角烧瓶中上摇床，在温度30°C的条件下培养72小时，摇床速度为每分钟170转；
[0033]3)将摇床摇好的种子液按重量5%接入20升种子罐，30°C的温度条件下培养72小时，搅拌转速为120转每分钟，通气量0.15立方米每小时，种子罐培养基为酵母