专利名称：快速Feulgen染色方法
技术领域：
本发明属于生物细胞、组织染色技术领域，特别涉及一种快速Feulgen染色方法。
背景技术：
在常规的细胞涂片、组织印片、冷冻切片、快速石蜡切片或滴片的病理诊断过程中，单凭病理细胞、组织的形态判断其良恶性状态遇到困难时，细胞核DNA含量的测量和倍体分析可提供重要参考。为此，要求细胞核DNA的Feulgen染色法能满足临床快速病理诊断的要求。
根据细胞核DNA细胞化学染色的原理，染色过程中的盐酸水解和Schiff’s试剂染色两项操作步骤是非常关键和重要的。细胞核DNA经盐酸水解，使其脱氧戊糖和嘌呤之间的糖苷键断开，戊糖端形成醛基，与Schiff’s试剂结合生成紫红色化合物。传统的Feulgen染色法使用1N的盐酸，在60℃的条件下水解细胞核DNA一小时，水解结果不稳定，染色效果较差，已被十多年前的改良Feulgen染色法所替代，即室温条件下，使用5N的盐酸水解和Schiff’s试剂染色各约一小时左右，取得了良好的染色效果，并广泛用于细胞核DNA含量的定量分析。然而，这些方法的完整染色时间达两个多小时，不适合临床快速病理诊断应用。所以，不断有人作缩短Feulgen染色时间的尝试。龚志锦等在室温下用7N、8N盐酸水解细胞核DNA的Feulgen染色法，取得了较好染色效果，染色时间缩短至45～50分钟。凌玉琴等应用微波炉处理的Feulgen染色法，极大地缩短了染色时间。但是，染色过程中对微波炉输出功率的准确性要求很高，染色效果不稳定，Feulgen染色液也只能一次性使用。因此，其在临床诊断方面的应用受到极大的限制。
发明内容
为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的目的在于提供一种快速、简便、稳定、易于自动化操作的Feulgen染色方法，该方法具有良好的染色效果，大大缩短了染色时间。
本发明的目的通过下述技术方案实现一种快速Feulgen染色方法，包括如下步骤将细胞涂片、组织印片、冷冻切片、石蜡切片或滴片等先放入4～6N盐酸水解3～10min，再放入Schiff’s试剂中染色8～15min，自来水冲洗2～5min，蒸馏水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脱水，封片。
为了更好地实现本发明，所述盐酸和Schiff’s试剂均须先预热达50～70℃，所述整个盐酸水解过程和Schiff’s试剂染色过程均在50～70℃的温度进行。
所述盐酸和Schiff’s试剂可以反复多次使用而不需任何处理。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果本发明采用4～6N盐酸水解过程和Schiff’s试剂染色过程都在50～70℃恒温箱内进行，操作简单，染色效果稳定，染色时间缩短到不足20分钟，既满足临床快速诊断要求，也适合进行细胞核DNA含量与倍体的定量分析，而且4～6N盐酸溶液和Schiff’s试剂可以反复多次使用。如果与自动染片机结合，整个Feulgen染色过程可由机器自动完成，适合试剂或染色机生产厂家研发新的染色机和染色试剂盒进行推广。
图1为快速Feulgen染色法染肝细胞核涂片图。
图2为10只小鼠肝细胞涂片的DNA含量直方图。
具体实施例方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1生后30天昆明小白鼠10只，制备肝细胞悬液涂片，室温干燥，4％多聚甲醛固定3min。每只小鼠的肝细胞涂片按下述方法进行Feulgen染色5N盐酸和Schiff’s试剂放入60℃的恒温箱中预热至60℃，固定后的肝细胞涂片先放入5N盐酸水解5min，再放入Schiff’s试剂中染色10min，自来水冲洗3min，蒸馏水漂洗3次，快速梯度乙醇脱水，封片。5N盐酸和Schiff’s试剂均须先预热达60℃，整个盐酸水解过程和Schiff’s试剂染色过程均在60℃的温度下进行。
按柯勒照明要求调整LEICA LB显微镜光源，在物镜(20×NA0.5)与黑白摄像机之间插入535/35的带通滤光片，按TIGER细胞图像分析仪(已用显微测微台尺和中国计量科学院出产的标准密度片标定其几何标尺和吸光度值)测量吸光度的要求校正系统基准，随机摄取肝细胞涂片上聚焦的肝细胞核图像(每只小鼠不少于10帧，细胞核总数不少于500个)，按TIGER细胞图像分析仪测量吸光度的操作要求，测量单个肝细胞核的DNA总量，以面积积分吸光度(IA)表述。
如图1所示，肝细胞涂片内肝细胞单个核分布均匀，大小差异明显，染色深，呈紫红色，核内结构清晰，背景着色淡。图2为2c、4c、8c肝细胞单个核的DNA总量均值直方图，其CV值均＜10％，各倍体肝细胞单个核的DNA含量均值的比值均接近于2或4，呈明显的倍数关系。
实施例2本发明快速Feulgen染色方法，包括如下步骤4N盐酸和Schiff’s试剂放入50℃的恒温箱中预热至50℃，将肝组织印片先放入4N盐酸水解3min，再放入Schiff’s试剂中染色8min，自来水冲洗2min，蒸馏水漂洗2次，快速梯度乙醇脱水，封片。整个盐酸水解过程和Schiff’s试剂染色过程均在50℃的温度下进行。4N盐酸溶液和Schiff’s试剂可以反复多次使用而不需任何处理。
实施例3本发明快速Feulgen染色方法，包括如下步骤6N盐酸和Schiff’s试剂放入70℃的恒温箱中预热至70℃，将肝组织冷冻切片先放入6N盐酸水解10min，再放入Schiff’s试剂中染色15min，自来水冲洗5min，蒸馏水漂洗3次，快速梯度乙醇脱水，封片。所述整个盐酸水解过程和Schiff’s试剂染色过程均在70℃的温度下进行。6N盐酸溶液和Schiff’s试剂可以反复多次使用而不需任何处理。
权利要求
1.一种快速Feulgen染色方法，其特征在于包括如下步骤将细胞涂片、组织印片、冷冻切片、石蜡切片或滴片先放入4～6N盐酸水解3～10min，再放入Schiff’s试剂中染色8～15min，自来水冲洗2～5min，蒸馏水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脱水，封片。
2.根据权利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述盐酸和Schiff’s试剂均先预热达50～70℃。
3.根据权利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述盐酸水解过程和Schiff’s试剂染色过程在50～70℃的温度进行。
4.根据权利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述盐酸和Schiff’s试剂能反复使用。
全文摘要
本发明公开了一种快速Feulgen染色方法，该染色方法将细胞涂片、组织印片、冷冻切片、滴片或石蜡切片等先放入4～6N盐酸水解3～10min，再放入Schiff’s试剂中染色8～15min，自来水冲洗2～5min，蒸馏水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脱水，封片。该Feulgen染色方法快速、简便、稳定、易于自动化操作，具有良好的染色效果，大大缩短了染色时间。
文档编号G01N1/30GK1837772SQ20061003489
公开日2006年9月27日 申请日期2006年4月10日 优先权日2006年4月10日
发明者夏潮涌, 金日男 申请人:暨南大学