专利名称：大组织标本切片快速制作方法
技术领域：
本发明涉及一种标本处理方法，尤其涉及一种大组织标本切片快速制作方法。
技术背景在医学领域为观察细胞、组织生理、病理形态变化的常常需要制作石蜡切片，在制作石 蜡切片前需要对组织标本进行处理。由于通常的石蜡切片比较小， 一般在2.5CmX1.5cmX O.lcm以内，结合显微镜下观察组织结构有一定的局限性。如果采用大组织切片则便于观察， 更易作出准确判断。但大切片的制作过程周期长，难度大，不易作出高质量切片，而要制作 大切片则必须先进行大组织标本的处理，但传统的大组织标本处理方法周期长，制作效果差， 不易加工出满足要求的大切片。 发明内容本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种方法简单，处理过程迅速，能够满足制 作大组织切片要求的大组织标本切片快速制作方法。 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案-1) 采用10%的甲醛溶液对厚度小于4mm标本进行固定；固定时间按照公式t-V大 /VS*Z*FS/10，其中，t为组织固定时间，V大为大组织的体积，Vs为常规取材的体积，其为 0.1X0.2X0.1的常量，Z为1.1是甲酸穿透组织厚度最初lmm所述时间数，F为组织取材厚 度3-5mm, g为1.2是甲醛在组织固定式的扩散速度；2) 脱水，选用梯度乙醇，其浓度从70%开始至无水乙醇位置，脱水时间按照公式tw水时间 -V脱W脱s'Z股'F脱g脱，其中，Z股为乙醇穿透组织最初lmm所示时间，其值为2; F脱为组 织取材厚度3-5mm， ％为乙醇扩散速度其值取t股水时间的一半；V股大为脱水大组织的体积；3) 透明，采用氯仿或二甲苯进行透明处理，透明时间按照t透明时间- (V透大/V透s'Z透'F透 g透)/Z透，其中，Z透为二甲苯穿透组织lmm厚度所需时间是1.2， F透取材厚度3-5mm， 8透 是二甲苯扩散速度是5; V^为透明大组织的体积；4) 浸蜡，浸蜡温度在50-60'C，用量公式为S石锘用s-V浸X (40-50)，及组织体积的40-50 倍；浸蜡时间公式为t娜时间- (V默y5) X4; V授大为浸蜡大组织体积；5) 进行包埋；6) 切片.7) 染色:完成大组织标本切片的快速制作。所述步骤l)中，在自动脱水机加热状态下，取t的]/io值应用。所述步骤2)中，梯度乙醇的浓度分别为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无 水乙醇I、无水乙醇II、无水乙醇川；同时在自动脱水机加热状态下脱水时，取t脱水时间的]/2 应用，再根据取值具体分配在梯度乙醇中的各个时间。所述步骤3)中，透明剂为氯仿或二甲苯溶液；并可采用脱水时间+2=组织透明时间作为 标准；透明剂用三缸。所述步骤4)中，浸蜡时间还可按照组织厚度4mm计，需4小时，即组织厚lmm,需 浸蜡时间为1小时。所述步骤l)、步骤2)、步骤3)中，甲醛、乙醇和透明剂的用量为大组织体积的50-150倍o所述步骤5)中，包埋是用蜂蜡与石蜡按照3: 7比例组成混合蜡。 所述步骤6)中，切片厚度5-7um。本发明通过对各个步骤时间的精确控制，解决大组织标本材料因对处理时间掌握不好， 造成无法进行切片加工的问题，同时也大大縮短了整个加工的时间。1. 縮短制作时间，使制作时间由15天縮短为24小时；2. 用自动脱水机处理，减少了人工操作带来的差异性；3. 使标本制作程序化，合理化；4. 可有效防止标本制作过程中发生变形；5. 减少误差，使组织的处理趋于精确；6. 有利于降低试剂对环境的污染程度；7. 试剂可多次重复使用，并与常规标本制作工作不冲突。8. 克服了用微波处理标本时间不宜被掌握，标本处理程度失当，极易造成空气污染等技 术难题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。1) 采用10%的甲醛溶液对厚度小于4mm标本进行固定；固定时间按照公式t=V大 /V,Z*Fg/10，其中，t为组织固定时间，V大为大组织的体积，Vs为常规取材的体积，其为 0.1X0.2X0.1的常量，Z为1.1是甲醛穿透组织厚度最初lmm所述时间数，F为组织取材厚 度3-Smm, 8为1.2是甲醛在组织固定式的扩散速度；2) 脱水，选用梯度乙醇，其浓度从70%开始至无水乙醇位置，脱水时间按照公式t股水时间 =VRVVKs'ZK*Fjtt，其中，Z股为乙醇穿透组织最初lmm所示时间，其值为2; F股为组 织取材厚度3-5mm,、为乙醇扩散速度其值取t股水》 的一半；V駄为脱水大组织的体积；3) 透明，采用氯仿或二甲苯进行透明处理，透明时间按照t透明时间- (V透大/V透s.Z透.F透 、)/Z透，其中，Z透为二甲苯穿透组织lmm厚度所需时间是1.2， F透取材厚度3-5'mm， 8透 是二甲苯扩散速度是5; Va力为透明大组织的体积；4) 浸蜡，浸蜡温度在50-6(TC，用量公式为S石瞎用fV浸X (40-50)，及组织体积的40-50 倍；浸蜡时间公式为t浸維时间- (V浸大/S) X4; V浸大为浸蜡大组织体积；5) 进行包埋；6) 切片.7) 染色，完成大组织标本切片的快速制作。所述步骤l)中，在自动脱水机加热状态下，取t的3/10值应用。所述步骤2)中，梯度乙醇的浓度分别为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无 水乙醇I、无水乙醇H、无水乙醇III;同时在自动脱水机加热状态下脱水时，取t ,的3/2 应用，再根据取值具体分配在梯度乙醇中的各个时间。所述步骤3)中，透明剂为氯仿或二甲苯溶液；并可采用脱水时间+2=组织透明时间作为 标准；透明剂用三缸。所述步骤4)中，浸蜡时间还可按照组织厚度4mm计，需4小时，即组织厚lmm，需 浸蜡时间为l小时。所述步骤l)、步骤2)、步骤3)中，甲醛、乙醇和透明剂的用量为大组织体积的50-150倍。所述步骤5)中，包埋是用蜂蜡与石蜡按照3: 7比例组成混合蜡。 所述步骤6)中，切片厚度5-7um。权利要求
1.一种大组织标本切片快速制作方法，其特征是，它的步骤为1)采用10％的甲醛溶液对厚度小于4mm标本进行固定；固定时间按照公式t-V大/Vs·Z·Fg/10，其中，t为组织固定时间，V大为大组织的体积，Vs为常规取材的体积，其为0.1×0.2×0.1的常量，Z为1.1是甲醛穿透组织厚度最初1mm所述时间数，F为组织取材厚度3-5mm，g为1.2是甲醛在组织固定式的扩散速度；2)脱水，选用梯度乙醇，其浓度从70％开始至无水乙醇位置，脱水时间按照公式t脱水时间＝V脱大/V脱s·Z脱·F脱g脱，其中，Z脱为乙醇穿透组织最初1mm所示时间，其值为2；F脱为组织取材厚度3-5mm，g脱为乙醇扩散速度其值取t脱水时间的一半；V脱大为脱水大组织的体积；3)透明，采用氯仿或二甲苯进行透明处理，透明时间按照t透明时间＝(V透大/V透s·Z透·F透g透)/Z透，其中，Z透为二甲苯穿透组织1mm厚度所需时间是1.2，F透取材厚度3-5mm，g透是二甲苯扩散速度是5；V透大为透明大组织的体积；4)浸蜡，浸蜡温度在50-60℃，用量公式为S石蜡用量＝V浸×(40-50)，及组织体积的40-50倍；浸蜡时间公式为t浸蜡时间＝(V浸大/5)×4；V浸大为浸蜡大组织体积；5)进行包埋；6)切片；7)染色，完成大组织标本切片的快速制作。
2. 如权利要求1所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤l)中，在自 动脱水机加热状态下，取t的]/10值应用。
3. 如权利要求l所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤2)中，梯 度乙醇的浓度分别为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇I、无水乙醇II、无 水乙醇lll;在自动脱水机加热状态下脱水时，取t^,的V^应用，再根据取值具体分配在梯 度乙醇中的各个时间。
4. 如权利要求1所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤3)中，透 明剂为氯仿或二甲苯溶液；并可采用脱水时间+2=组织透明时间作为标准。
5. 如权利要求1所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤4)中，浸 蜡时间还可按照组织厚度4mm计，需4小时，即组织厚lmm，需浸蜡时间为l小时。
6. 如权利要求1-5中任一所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤1)、 步骤2)、步骤3)中，甲醛、乙醇和透明剂的用量为大组织体积的50-150倍。
7. 如权利要求1所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤5)中，包 埋是用蜂蜡与石蜡按照3: 7比例组成混合蜡。
8. 如权利要求l所述的大组织标本切片快速制作方法，其特征是，所述步骤6)中，切 片厚度5-7um。
全文摘要
本发明公开了一种大组织标本切片快速制作方法。它方法简单，处理过程迅速，能够满足制作大组织切片要求。其过程为1)采用10％的甲醛溶液对厚度小于4mm标本进行固定；2)脱水，选用梯度乙醇；3)透明，采用氯仿或二甲苯进行透明处理；4)浸蜡；5)进行包埋；6)切片；7)染色，完成大组织标本切片的快速制作。
文档编号G01N1/28GK101324493SQ20081013880
公开日2008年12月17日 申请日期2008年7月29日 优先权日2008年7月29日
发明者孙兰萍, 孙晓荣, 孙翔宇, 张朝蓬, 李新科 申请人:孙翔宇