专利名称：一种用于固相实验的u型板的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种用于固相实验的u型板。
背景技术：
抗人球蛋白实验在红细胞系统中是检査红细胞不规则抗体的一种有用的检测方法。本 实验分为直接和间接两种。直接实验主要检查红细胞上是否有不规则抗体，而间接实验是 检查血清中有无游离的不规则抗体。
不规则抗体指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，即抗A抗B以外的 血型抗体， 一般因为输血、妊娠等发生同种免疫而产生，多属于IgG类抗体。它是一种 7S球蛋白，分子量小，分子长度只250A 与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中只能 与红细胞结合而不出现肉眼可见的凝集反应，因而也被称为不完全抗体。此类抗体必须通 过特殊的方法如抗人球蛋白法、聚凝胺法、酶法，才能使致敏细胞发生凝集反应，从而检 出此类抗体。
如果受血者体内存在有临床意义的抗体，就会破坏输入的含有相应抗原的红细胞，发 生溶血性输血反应，影响红细胞输注的疗效，重者危及患者生命。孕妇体内如含有不规则 抗体，则会引起新生儿溶血病，产生核黄疸等其他严重影响新生儿发育的综合症，给家庭 和社会带来沉重的负担，甚至引起新生儿死亡。因此，开展不规则抗体筛査是十分必要的。
进行交叉配血时，只进行盐水介质交叉配血会漏检不完全抗体，这将严重威胁输血安全。
欧美等许多发达国家己将不规则抗体筛査作为常规检测，在我国，卫生行政部门还没 有相关的要求。临床上，医院及血站仅是对少数患者进行抗体筛检。对献血者的抗体筛检 更是空白，存在极大的安全隐患。
现在血型血清学上广泛应用的抗人球蛋白试验为试管法。此方法属于血凝试验，包括三个步骤
1. 致敏抗体与检测细胞一起孵育，抗体Fab段与检测细胞上的相应表位发生免疫 反应，抗体结合检测细胞，但不出现凝集。
2. 洗涤以除去反应体系中的未结合抗体。 一般采用离心法。如果洗涤不彻底，残 留的游离抗体会消耗后一步加入的抗人球蛋白，减弱检出效果。
3. 加入抗人球蛋白试剂，离心。观察凝集强度。 现有抗人球蛋白试验方法存在下列不足
1. 使用新鲜红细胞，而新鲜红细胞的最大缺点是保存期短，常常因为产品过期造成 浪费。
2. 操作过程繁琐，每次只能检测少量的标本，很难开展大量样本的检测。
3. 技术要求高， 一般由实验室高年资技术人员操作或示范，技术普及难度大。
4. 结果判读存在主观性，不同操作人员可能会判读出不同的结果，难以标准化。
5. 观察结果时间短，实验结果无法保存， 一旦出现医疗纠纷难以判定责任。
6. 实验过程为手工操作，难以自动化。
现在应用的固相法红细胞抗体检测试剂一般采用普通96孔U型板，通常为U型底， 在进行检测时，将待检血清与固定在板底部的红细胞孵育，经过洗涤以除去游离抗体，然 后加入指示红细胞(抗人IgG包被的红细胞)，离心后观察结果。此处洗涤的过程非常关 键，既要洗涤除去游离抗体，又不能破坏板底所铺的红细胞单层，因此只能手工洗涤或采 用专用洗板机。因此，现有的固相微孔板方法依然存在操作繁琐，效率低下并易出现假阴 性检测结果的缺点。
发明内容
本实用新型的目的是克服上述试管法及固相微孔板法的缺点，提供一种高通量、操作 简便、检测精度高的用于固相实验U型板。 结合附图，说明如下-
一种用于固相实验的U型板，包括作为分离腔的一个U型腔体1，它还包括一个反应腔，所说的反应腔为底部设有数个微孔3的能封闭套装在U型腔体1上的U型腔体2。 所述的U型腔体1的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔体1内置有高密度
介质隔离液，高密度介质隔离液的界面低于所述U型腔体2的底端。 本实用新型的工作原理是
作为分离腔的U型腔体1底部包被有抗人球蛋白。如果红细胞上结合有不完全抗体，
就会被包被在反应板底部的抗人球蛋白捕获，形成铺层结构。未结合不完全抗体的红细胞，
则会在离心力的作用下聚集在U型板的尖底部，形成红细胞扣。
作为分离腔的U型腔体1内填充高密度介质隔离液。所填充的高密度介质隔离液的密 度介于红细胞密度与血浆密度之间。在离心力的作用下，红细胞可以穿过隔离液到达结合 区，而血浆则分布于隔离液之上，不会进入隔离液，也不会与板底部结合区包被的抗人球 蛋白结合。
由聚丙乙烯或聚苯乙烯制成的底部带有数个微孔的U型腔体2作为反应腔。红细胞与 血浆加入此腔中并在此腔中孵育反应，从而与其下方的分离腔隔离。反应完毕，在离心力 作用下，红细胞穿过小孔进入分离腔，血浆仍停留在反应腔或在隔离液上方。
本实用新型的有益效果采用本实用新型U型板，具有操作简便、检测精度高、便于
实现自动化批量实验。
图1为一种用于固相实验的U型板的结构图； 图2为一种用于固相实验的U型板的俯视图。
1.作为分离腔的U型腔体2.作为反应腔的U型腔体 3.微孔具体实施方式
以下结合附图及实施例对本实用新型作进一步详细阐述。
一种用于固相实验的U型板，包括作为分离腔的一个U型腔体1，它还包括一个反 应腔，所说的反应腔为底部设有数个微孔3的能封闭套装在U型腔体1上的U型腔体2。 所述的U型腔体2的底部设有5~9个微孔3，孔径为0.3 0.5mrn。所述的U型腔体1的内径6.8mm、外径8.0mm、高12mm。
所述的U型腔体2的内径5.7mm、外径7.7mm、高12mm。
所述的U型腔体1的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔体1内置有高密度
介质隔离液，高密度介质隔离液的界面低于所述U型腔体2的底端。
所述的高密度介质隔离液为pH7.2， O.OIM磷酸盐缓配方冲液配制的25%蔗糖与10%
泛影葡胺等体积混合液，高密度介质隔离液的密度介于红细胞密度与血浆密度之间。 用于检测红细胞抗体的U型板制备方法如下-
1. 在作为分离腔的U型腔体1的底部包被抗人球蛋白。
用pH9.6， 0.05M碳酸盐缓冲液将纯化的抗人球蛋白配制成10ug/ml浓度，加入到U 型腔体l中，置4。C冰箱中包被过夜，次日取出，用含有0.05%吐温的pH7.2， O.OIM磷酸 盐缓冲液洗涤4次，扣干，置-20'C备用。
2. 隔离液的填充。
在包被好的U型腔体1中加入隔离液pH7.2， 0.01M磷酸盐缓配方冲液配制的25y。 蔗糖与10%泛影葡胺等体积混合液。
3. 安装作为反应腔的底部设有数个微孔的U型腔体2。 将U型腔体2紧密卡在U型腔体1上端，然后用热合封口机封口。 本实用新型可用于红细胞、血小板、白细胞等血液细胞抗体的检测及细菌、病毒病原
微生物和可深性蛋白抗原抗体的检测。 实施例1
本实用新型用于固相实验的U型板的应用。 一.不完全抗体交叉配血
向主侧反应孔中加入受者血浆或血清一滴(50yl)，再加入供者红细胞一滴(50yl)。
向次侧反应孔中加入供者血浆或血清一滴(50lU)，再加入受者红细胞一滴(50" 1)。
37。C孵育20分钟，然后离心观察结果，红细胞平铺在反应板的底部为阳性，聚集在
反应孔的底部形成一个小点为阴性。介于二者之间的为弱阳性。
6实施例2
二.红细胞抗体筛检，鉴定及证明。
向反应腔中加入待检血浆或血清一滴(50y!)，再加入试剂红细胞一滴(50iU), 37 "C孵育20分钟，然后离心观察结果，试剂红细胞平铺在反应板的底部为阳性，聚集在反 应孔的底部形成一个小点为阴性。介于二者之间的为弱阳性。
碳酸盐缓冲液配方称取Na2C03 4.59gNaHC03 2.93g用注射用水将其溶解并定容至1升。
磷酸盐缓冲液配方称取NaH2P04 2H20 L56g、 Na2HP043.58g、 NaCL9g用注射用 水将其溶解并定容至1升。
权利要求1.一种用于固相实验的U型板，包括作为分离腔的一个U型腔体(1)，其特征在于它还包括一个反应腔，所说的反应腔为底部设有数个微孔(3)的能封闭套装在U型腔体(1)上的U型腔体(2)。
2. 根据权利要求1所述的一种用于固相实验的U型板，其特征在于所述的U型腔休(2)的底部设有5 9个微孔(3),孔径为0.3 0.5rmn。
3. 根据权利要求1所述的一种用于固相实验的U型板，其特征在于所述的U型腔休(i)的内径6.8mm、外径8.0mm、高12mm。
4. 根据权利要求1所述的一种用于固相实验的U型板,其特征在于所述的U型腔体(2)的内径5.7mm、外径7.7mm、高12mm。
5. 根据权利要求i-4中任一权利要求所述的一种用于固相实验的U型板，其特征在于所述的U型腔体(l)的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔体O)内置有高密度介质隔离液，高密度介质隔离液的界面低于所述U型腔体(2)的底端。
专利摘要本实用新型涉及一种用于固相实验的U型板，包括作为分离腔的一个U型腔体(1)，它还包括一个反应腔，所说的反应腔为底部设有数个微孔(3)的能封闭套装在U型腔体(1)上的U型腔体(2)，所述的U型腔体(1)的底部包被有抗人球蛋白，在包被好的U型腔体(1)内置有介于红细胞密度与血浆密度之间的高密度介质隔离液，高密度介质隔离液的界面低于所述U型腔体(2)的底端。采用本实用新型U型板，具有操作简便、检测精度高、便于实现自动化批量实验。
文档编号G01N33/80GK201402265SQ200920092940
公开日2010年2月10日 申请日期2009年1月23日 优先权日2009年1月23日
发明者孔维臣, 孙育昌, 东 李, 勇 李, 李剑波, 王文学, 军 童, 蔡红霞, 高大松 申请人:勇 李