专利名称：活化部分凝血酶时间测定试剂、活化部分凝血酶时间测定法及判断有无抗凝血物质的方法
技术领域：
本发明涉及一种活化部分凝血酶时间测定试剂、活化部分凝血酶时间测定法及判 断有无抗凝血物质的判断方法。
背景技术：
在接受凝血检查的患者中，有人用肝素作为治疗血栓的药物。打点滴时，为了防止 导管内发生凝血反应，有的患者使用向导管内填充了含肝素生理盐水的肝素锁导管。从这 些患者采集的受检血浆有时含有外源性肝素。使用此受检血浆测定活化部分凝血酶时间 (APTT)，凝血时间会因肝素影响而延长。美国专利第5262325号公开了一种消除受检血浆中所含外源性肝素对APTT测定 的影响的方法。根据此方法，用肝素中和剂中和受检血浆后，再测定APTT，以此消除受检血 浆中所含肝素的影响。然而，根据美国专利第5262325号记载的方法，需要事先向受检血浆 加入肝素中和剂。APTT测定工作因此而变得很烦琐。另外，根据美国专利第5262325号记 载的方法，进行APTT测定时，需要时常意识到受检血浆中存在肝素的可能性。特别是在医 疗现场，紧急测定APTT时，往往未确认受检血浆中有无外源性肝素就对APTT进行测定。近年来，在使用APTT测定试剂的交叉混合试验(cross mixing test)中，受 检血浆中所含外源性肝素的影响也成为一个问题(检查技术，vol. 34no. 82006年8月 p. 738-739)。交叉混合试验是通过测定受检血浆和正常血浆的混合血浆的凝血时间，检查 患者凝血因子是否缺损和受检血浆中有无抗凝血物质。如上所述，如果受检血浆中含有外 源性肝素，凝血时间就会延长。因此，如果在交叉混合试验中有受检血浆中所含的外源性 肝素的话，恐怕将无法正确查出内源性抗凝血物质的存在。
发明内容
本发明的范围只由后附的权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节发明内 容的陈述所限。发明人发现，预先在APTT测定试剂中加入肝素中和剂，可以不受受检血浆中所含 外源性肝素影响而方便、准确地进行APTT测定，从而完成了本项发明。本发明提供(1) 一种活化部分凝血酶时间测定试剂，包括肝素中和剂。通过上述(1)所述活化部分凝血酶时间测定试剂，可以提供一种能不受受检血浆 中所含外源性肝素的影响，而方便、准确地进行APTT测定的APTT测定试剂。(2)根据上述⑴所述活化部分凝血酶时间测定试剂，包括含有磷脂及活化剂的第一试剂；及含有肝素中和剂和钙盐的第二试剂。通过上述(2)的活化部分凝血酶时间测定试剂，可以提供一种能不受受检血浆中所含外源性肝素的影响，而方便、准确地进行APTT测定的高稳定性APTT测定试剂。(3)根据上述⑴所述活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所述肝素中和 剂是凝聚胺。(4)根据上述(2)所述活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所述钙盐是氯 化钙。(5)根据上述(2)所述活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所述活化剂是 鞣花酸、胶体硅(colloidal silica)和无水硅酸中的至少其中之一。(6)根据上述(2)-(5)中任一项所述活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于， 所述磷脂是磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油中的至少其中之一。(7) 一种用于将受检血浆与含磷脂和活化剂的试剂混合后测定活化部分凝血酶时 间的试剂，包括肝素中和剂；及钙盐。根据上述(7)的试剂，它是一种将受检血浆与含磷脂和活化剂的试剂混合后测定 APTT的试剂，可以提供给人们一种可不受受检血浆所含外源性肝素影响，方便、正确地进行 APTT测定的高稳定性试剂。(8)根据上述(7)所述试剂，其特征在于，所述肝素中和剂是凝聚胺。(9)上述(7)或(8)所述试剂，其特征在于，所述钙盐是氯化钙。(10) 一种活化部分凝血酶时间测定方法，包括第一混合步骤，将受检血浆与含有磷脂和活化剂的第一一试剂混合；第二混合步骤，将上述第一混合步骤获得的试样与含肝素中和剂和钙盐的第二试 剂混合；及测定步骤，测定在上述第二混合步骤获得的试样的凝固时间。根据上述(10)的活化部分凝血酶时间测定方法，可以提供一种不受受检血浆所 含外源性肝素影响，方便、准确且试剂稳定性高的APTT测定方法。(11)根据上述(10)所述活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在于，所述肝素中 和剂是凝聚胺。(12)根据上述(10)所述活化部分凝血酶时引间测定方法，其特征在于，所述钙盐
是氯化钙。(13)根据上述(10)所述活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在于，所述活化剂 是鞣花酸、胶体硅和无水硅酸的至少其中之一。(14)根据上述(10)-(13)中任一项所述活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在 于，所述磷脂是磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油中的至少其中之
ο(15) 一种判断受检血浆中有无抗凝血物质的方法，包括制样步骤，将疑有上述抗凝血物质的受检血浆和正常血浆以至少三种不同比例混 合，制备测定试样；第一混合步骤，将在上述制样步骤获得的各种测定试样与含有磷脂和活化剂的第 一试剂混合；
第二混合步骤，将在上述第一混合步骤获得的各种试样与含有肝素中和剂和钙盐 的第二试剂混合；测定步骤，测定在上述第二混合步骤获得的各种试样的凝固时间；及判断步骤，根据在上述测定步骤获得的各试样的上述凝固时间，判断上述受检血 浆中是否含有上述抗凝血物质。根据上述(15)的判断受检血浆中有无抗凝血物质的判断方法，可以不受受检血 浆所含外源性肝素影响，方便、准确、且试剂稳定性高地判断有无抗凝血物质。(16)根据上述(15)所述方法，其特征在于，所述判断步骤根据在所述测定步骤获 得的各试样的所述凝固时间，获取罗斯纳指数(ROSNER INDEX)值，根据获取的罗斯纳指数 值，判断所述受检血浆中有无所述抗凝血物质。(17)根据上述(15)所述方法，其特征在于，所述抗凝血物质是狼疮抗凝物、后天 性血友病、凝固因子抑制物或Cl失活因子。(18)根据上述(15)所述方法，其特征在于，所述肝素中和剂是凝聚胺。(19)根据上述(15)所述方法，其特征在于，所述钙盐是氯化钙。(20)根据上述(15)-(19)中任一项所述方法，其特征在于，所述活化剂是鞣花酸、 胶体硅和无水硅酸中的至少其中之一。
图1为从用含凝聚胺的钙溶液进行活化部分凝血酶时间(APTT)测定所获得的 APTT计算出的罗斯纳指数值的柱状图。图2为从用不含凝聚胺的钙溶液进行活化部分凝血酶时间(APTT)测定所获得的 APTT计算出的罗斯纳指数值的柱状图。
具体实施例方式本实施方式中的活化部分凝血酶时间(APTT)测定试剂含有肝素中和剂。APTT测 定试剂可以由含磷脂和活化剂的第一试剂及含肝素中和剂和钙盐的第二试剂组成，也可以 由含磷脂和活化剂的第一试剂、含钙盐的第二试剂和含肝素中和剂的第三试剂组成。在此， 第三试剂既可以在第一试剂添加后第二试剂添加前添加，也可以在第一试剂和第二试剂添 加后添加。此外，发明人发现，在APTT测定试剂中，通过向含有钙盐的试剂中添加肝素中和 剂，可以不产生沉淀、且不受受检血浆中所含肝素影响地进行APTT测定。因此，在本实施方 式中，含有肝素中和剂的APTT测定试剂构成，最好包括含有磷脂及活化剂的第一试剂和含 有肝素中和剂和钙盐的第二试剂。本实施方式中的活化部分凝血酶时间(APTT)测定试剂包括含磷脂和活化剂的第 一试剂和含肝素中和剂和钙盐的第二试剂。第一试剂中的磷脂只要是能够在APTT测定试剂中通用的磷脂即可，无特别限制。 比如可以是磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油等。磷脂米源自牛脑、 兔脑、人类胎盘、大豆和蛋黄等天然磷脂或合成磷脂等均可。最好是兔脑脑磷脂、大豆脑磷 脂和合成磷脂等。
第一试剂中的磷脂浓度，可根据磷脂的种类和APTT测定条件等适当设定，无特别 限制。比如第一试剂中的磷脂浓度可以是20-200 μ g/mL,以50-150 μ g/mL为宜。使用兔脑 脑磷脂、大豆脑磷脂或合成磷脂为磷脂时，第一试剂中的磷脂浓度以20-200μ g/mL为宜， 最好是 50-150 μ g/mL。第一试剂中的活化剂只要是活化接触因子类的物质即可，无特别限制。比如可从 包括鞣花酸、高岭土、硅藻土、胶体硅和无水硅酸等的物质组中选择至少一种使用。在本实 施方式中，最理想的活化剂如为鞣花酸和胶体硅等。第一试剂中的活化剂浓度，可根据活化剂的种类和APTT测定条件等适当设定，无 特别限定。比如第一试剂中的活化剂浓度可以是5-1000 μ g/mL,以20-500 μ g/mL为宜。使 用鞣花酸作为活化剂时，第一试剂中的活化剂浓度以5-100 μ g/mL为宜，最好是20-50 μ g/
mLo第一试剂除磷脂和活化剂外，还可以包含可向APTT测定试剂中添加的其他成分。 在此，其他成分如有缓冲剂、防腐剂和抗氧化剂等。在此，缓冲剂只要是APTT测定试剂通用的缓冲剂即可，无特别限制。缓冲剂如有 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、三羟甲基氨基甲烷(TRIS)和3_(N_吗啉)丙磺酸(MOPS) 等。第一试剂的pH值以5-9为宜，最好是6-8。可以用上述缓冲剂调整此第一试剂的pH值。防腐剂只要是APTT测定试剂通用的防腐剂即可，无特别限制。防腐剂如有叠氮 钠、苯酚和抗生素(环丙沙星)等，以苯酚为宜。第一试剂中的防腐剂浓度适当调整即可， 无特别限制，比如可以是l_5mg/mL。抗氧化剂只要是APTT测定试剂通用的抗氧化剂即可，无特别限制。抗氧化剂比如
有丁基羟基茴香醚等。本实施方式中的第二试剂中的肝素中和剂为对APTT测定没有影响的众所周知的 肝素中和剂即可，无特别限制。比如可以从凝聚胺、硫酸鱼精蛋白和肝素酶(heparinase) 等构成的物质组中选择至少其中一种作为肝素中和剂使用。本实施方式的肝素中和剂最好 是凝聚胺。在此，第二试剂中的肝素中和剂浓度，可根据肝素中和剂的种类和APTT测定条件 等适当设定，无特别限制。比如第二试剂中的肝素中和剂浓度可以是0.5-100yg/mL。当 使用凝聚胺作为肝素中和剂时，第二试剂中的肝素中和剂浓度以5-50μ g/mL为宜，最好是 10-20 μ g/mL。在此，第二试剂中的钙盐只要是APTT测定试剂通用的钙盐即可，无特别限制。比 如可以使用无机酸和钙的盐以及有机酸和钙的盐中的任意一种。无机酸和钙的盐如有氯化 钙、亚硝酸钙、硫酸钙和碳酸钙等。有机酸和钙的盐如有乳酸钙和酒石酸钙等。第二试剂 中的钙盐以无机酸和钙的盐为宜，尤以氯化钙为宜。第二试剂中的钙浓度可根据钙盐的种类和APTT测定条件等适当设定，无特别限 制。比如，第二试剂中的钙盐浓度可以是15-50mM，最好是20-30mM。当使用氯化钙作为钙 盐时，第二试剂中的钙盐浓度以15-30mM为宜，最好是20-25mM。第二试剂除肝素中和剂和钙盐外，还可以含有可添加到APTT测定试剂的其他成 分。在此，其他成分比如有缓冲剂和防腐剂。
在此，缓冲剂可以使用与上述第一试剂同样的缓冲剂。第二试剂的PH值以5-9为 宜，最好在6-8之间。此第二试剂的PH值也可以和第一试剂一样使用上述缓冲剂调整。防腐剂可以使用与上述第一试剂相同的防腐剂。第二试剂的防腐剂浓度可适当调 整，无特别限制，比如可以是l_5mg/mL。本实施方式中的试剂是在受检血浆和含磷脂及活化剂的试剂混合后，用于测定活 化部分凝血酶时间的试剂，其含有肝素中和剂和钙盐。该试剂与上述本实施方式APTT测定 试剂的第二试剂相同。本实施方式中的活化部分凝血酶时间(APTT)测定方法用上述本实施方式的APTT 测定试剂实施。即本实施方式中的APTT测定方法包括混合受检血浆和含磷脂及活化剂的 第一试剂的第一混合步骤、混合在第一混合步骤获得的试样和含肝素中和剂及钙盐的第二 试剂的第二混合步骤以及测定第二混合步骤获得的试样的凝固时间的测定步骤。第一混合步骤只要混合受检血浆和含磷脂及活化剂的第一试剂即可，对受检血浆 和第一试剂的添加顺序无限制。在此，受检血浆只要是从患者的全血获得的血液中清除血细胞以后的部分即可， 无特别限制。获取受检血浆的方法是众所周知的。获取受检血浆的方法比如有在取自患者 的血液中加入抗凝剂离心处理后，取上清获得受检血浆的方法。受检血浆除用上述方法获 得的受检血浆外，也可以用市面上销售的血浆。作为市面上销售的血浆，有正常血浆、凝血 因子缺损的血浆和含有凝血抑制物质的血浆等。正常血浆可举出Coag Control N(希森美 康公司制)和凝血试验用标准人血浆(希森美康公司制)等。凝血因子缺损的血浆如有 乏VIII因子血浆(希森美康公司制)和乏IX因子血浆(希森美康公司制)等。含有凝血 抑制物质的血浆如有LA阳性血浆(George King公司制)及有抑制物的乏VIII因子血浆 (FACTOR VIIIDEFICIENT PLASMA WITH INHIBITOR) (George King 公司制)等。上述受检血 浆可根据APTT测定条件等适当稀释使用。第一混合步骤中使用的第一试剂与上述本实施方式的APTT测定试剂的第一试剂 相同。第一混合步骤的反应温度根据受检血浆和第一试剂的混合比例及受检血浆的稀 释比例等适当设定即可，无特别限制，但一般为25V -45V,以30°C -40°C为宜，最好是 350C -38"C。第一混合步骤的反应时间也可根据受检血浆和第一试剂的混合比例及受检血浆 的稀释比例等适当设定，无特别限制，但一般为1-15分钟，以2-10分钟为宜，最好是3-5分钟。在第一混合步骤中受检血浆和第一试剂的混合比例根据受检血浆的稀释比例和 第一试剂的组分等适当设定即可，无特别限制。比如受检血浆和第一试剂的混合比例可以 是容量比8 2-2 8，以6 4-4 6为宜，最好为5 5。第二混合步骤只要将第一混合步骤获得的试样和含肝素中和剂及钙盐的第二试 剂混合即可，第一混合步骤获得的试样和第二试剂的添加顺序无限制。第二混合步骤所使用的第二试剂与上述本实施方式的APTT测定试剂的第二试剂 相同。第二混合步骤中的反应温度，可根据第一混合步骤所得试样与第二试剂的混合比例和受检血浆的稀释比例等适当设定，无特别限制，但一般为20°C -45°C，以30°C -40°C为 宜，最好是:35°C -38 °C。在第二混合步骤中第一混合步骤所得试样和第二试剂的混合比例可根据受检血 浆和第一试剂的混合比例及第二试剂的组分等适当设定，无特别限制。比如第一混合步骤 所得试样和第二试剂的混合比例可以是容量比8 2-5 5，以7 3-6 4为宜，最好为 2 I0测定步骤一般以APTT测定通用的凝固时间测定法对第二混合步骤获得的试样的 凝固时间进行测定即可。在此，作为试样的凝固时间测定方法比如有用秒表进行人工肉眼 测定试样凝固所需时间的方法及用测定光学信息的装置测定试样的凝固时间的方法等。也 可以用市面上出售的测定试样凝固时间用凝血测定仪。市面上出售的凝血测定仪如有希森 美康公司制的CS-2000i和CS-2100i等。本实施方式的判断受检血浆中有无抗凝血物质的判断方法采用上述本实施方式 APTT测定方法的交叉混合试验进行。即本实施方式涉及的判断方法包括制样步骤，以至 少三种不同比例混合被怀疑有抗凝血物质存在的受检血浆和正常血浆，制备测定试样；第 一混合步骤，将制样步骤获得的各测定试样与含磷脂和活化剂的第一试剂混合；第二混合 步骤，将在第一混合步骤获得的各试样与含肝素中和剂及钙盐的第二试剂混合；测定步骤， 测定在第二混合步骤获得的各试样的凝固时间；判断步骤，根据在测定步骤获得的各试样 的凝固时间判断受检血浆中是否含有抗凝血物质。制样步骤制备一般交叉混合试验中所用的测定试样即可。即，将被怀疑行抗凝血 物质的受检血浆和正常血浆以至少三种不同比例混合，制备测定试样。对于被怀疑有抗凝 血物质的受检血浆和正常血浆的添加顺序没有限制。在此，抗凝血物质只要是受检血浆中的、肝素以外的抗凝血物质即可。更具体地 说，抗凝物可以是狼疮抗凝物(LA)、后天性血友病、凝固因子抑制物和Cl失活因子等。受检血浆是与上述本实施方式的APTT测定方法中使用的受检血浆相同的血浆。在此，正常血浆只要是从健康者的全血获得的血液中清除血细胞以后的部分即 可，无特别限制。获取正常血浆的方法是众所周知的。比如获取正常血浆的方法如有向采 自健康者的血液中添加凝血抑制剂离心分离后，取上清，获正常血浆。作为正常血浆除用上 述方法获得的正常血浆外，也可以用市面上销售的血浆。市面上的正常血浆，可举出Coag Control N(希森美康公司制)和凝血试验用标准人血浆(希森美康公司制)等。上述正常 血浆可根据APTT测定条件等适当稀释使用。在此，在制样步骤制备的受检血浆和正常血浆不同混合比例的测定试样数只要是 三种以上即可，无特别限制。增加测定试样数可以提高本实施方式的判断方法的精确度。本 实施方式中的测定试样数可以是3-6个。在制样步骤制备的测定试样中受检血浆和正常血浆的混合比例可以是一般交叉 混合试验所用的测定试样中受检血浆和正常血浆的混合比例即可，即，混合比例中，受检血 浆正常血浆的容量比可以是0 10-10 0。即制样步骤中受检血浆和正常血浆的混合比 例也包括受检血浆或正常血浆的混合比例为0的组合。比如，当在制样步骤制备受检血浆 和正常血浆不同混合比例的三种测定试样时，可以将受检血浆和正常血浆按10 0、1 1 及0 10三种不同容量比混合。
制样步骤中的反应温度可根据要判断的抗凝血物质种类、受检血浆的稀释比例和 正常血浆的稀释比例等适当设定，无特别限制，比如可以为25°C _45°C，以30°C _40°C为宜， 最好是 35 °C -38 °C。在制样步骤中的反应时间可根据要判断的抗凝血物质种类、受检血浆的稀释比例 和正常血浆的稀释比例等适当设定，无特别限制。比如，当受检血浆中要判断的抗凝血物质 为狼疮抗凝物(LA)等当即阻碍凝血反应的物质时，在制样步骤中的反应时间可以是1-15 分钟，以1-5分钟为宜，最好是1分钟。当受检血浆中要判断的抗凝血物质为后天性血友病 等比较缓慢地阻碍凝血反应的物质时，制样步骤中的反应时间可以是0. 2小时-5小时，以 0. 5小时-4小时为宜，最好是1小时-3小时。在本实施方式的判断受检血浆中有无抗凝血物质的判断方法中，第一混合步骤、 第二混合步骤和测定步骤对制样步骤制备的测定试样分别进行与上述本实施方式的APTT 测定方法的第一混合步骤、第二混合步骤和测定步骤同样的处理。判断步骤采用通用的方法即可，即在交叉混合试验中，根据测定步骤获得的各试 样的凝固时间，判断受检血浆中有无抗凝血物质，无特别限制。比如有根据混合比例和凝固 时间图表的形状以及罗斯纳指数值的判断方法等。更具体而言，当采取根据混合比例和凝 固时间图表的形状的判断方法时，以受检血浆和正常血浆的混合比例为横坐标，以试样的 凝固时间为纵坐标绘制图表，图形为凹型的话，判断为有抗凝血物质，如果不是凹型，则判 断无抗凝血物质。当使用基于罗斯纳指数值的判断方法时，先设定罗斯纳指数值阈值，如果 从试样的凝固时间算出的罗斯纳指数值超过阈值，则判断有抗凝血物质，如果从试样的凝 固时间算出的罗斯纳指数值低于阈值，则判断无抗凝血物质。所谓罗斯纳指数值是根据以下式⑴算出的值。罗斯纳指数值=((受检血浆与正常血浆混合比例为1 1的试样的APTT)-(正 常血浆的APTT)) / (受检血浆的APTT) X 100式(1)下面举实施例详细说明本发明，但本发明不限于此。[实施例]〈实验例一〉[在APTT测定试样中添加凝聚胺](试剂1)在3mL含Hirombocheck APTT-SLA(希森美康公司制)的磷脂和活化剂的试剂中 添加3 μ L的10mg/mL凝聚胺溶液[IOmg凝聚胺(Nacalai Tesque公司制)、ImL纯水]，制 备试剂1。(试剂2)在3mL肌动蛋白FSL (希森美康公司制)中添加3 μ L的10mg/mL凝聚胺溶液，制 备试剂2。(试剂3)在3mL含HemosIL APTT-SP (三菱化学医药股份公司制)的磷脂和活化剂的试剂 中添加3 μ L的lOmg/mL凝聚胺溶液，制备试剂3。(试剂4)在3mL含HemosIL SynthASil APTT (三菱化学医药股份公司制)的磷脂和活化剂的试剂中添加3 μ L的lOmg/mL凝聚胺溶液，制备试剂4。(试剂5)在;3mL的25mM钙溶液Q78mg氯化钙、IOOmL纯水)中添加3 μ L的10mg/mL凝聚 胺溶液，制备试剂5。此夕卜，ThrombocheckAPTT-SLA,肌动蛋白 FSL、HemosIL APTT-SP 及 HemosIL SynthASil APTT的各磷脂和活化剂的种类见表1。[表1]
权利要求
1.一种活化部分凝血酶时间测定试剂，包括肝素中和剂。
2.根据权利要求1所述的活化部分凝血酶时间测定试剂，包括含有磷脂及活化剂的第一试剂；及含有肝素中和剂和钙盐的第二试剂。
3.根据权利要求1所述的活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所述肝素中和 剂是凝聚胺。
4.根据权利要求2所述的活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所述钙盐是氯 化钙。
5.根据权利要求2所述的活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所述活化剂是 鞣花酸、胶体硅和无水硅酸中的至少其中之一。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的活化部分凝血酶时间测定试剂，其特征在于，所 述磷脂是磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油中的至少其中之一。
7.一种用于将受检血浆与含磷脂和活化剂的试剂混合后测定活化部分凝血酶时间的 试剂，包括肝素中和剂；及 丐 ^Tt. ο
8.根据权利要求7所述的试剂，其特征在于，所述肝素中和剂是凝聚胺。
9.根据权利要求7或8所述的试剂，其特征在于，所述钙盐是氯化钙。
10.一种活化部分凝血酶时间测定方法，包括第一混合步骤，将受检血浆与含有磷脂和活化剂的第一试剂混合；第二混合步骤，将所述第一混合步骤获得的试样与含有肝素中和剂及钙盐的第二试剂 混合；及测定步骤，测定所述第二混合步骤所获得试样的凝固时间。
11.根据权利要求10所述的活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在于，所述肝素中 和剂是凝聚胺。
12.根据权利要求10所述的活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在于，所述钙盐是 氯化钙。
13.根据权利要求10所述的活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在于，所述活化剂 是鞣花酸、胶体硅和无水硅酸中的至少其中之一。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的活化部分凝血酶时间测定方法，其特征在于， 所述磷脂是磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油中的至少其中之一。
15.一种判断受检血浆中有无抗凝血物质的方法，包括制样步骤，将疑有所述抗凝血物质的受检血浆和正常血浆以至少三种不同比例混合， 制备测定试样；第一混合步骤，将所述制样步骤获得的各种测定试样与含磷脂和活化剂的第一试剂混合；第二混合步骤，将所述第一混合步骤获得的各种试样与含肝素中和剂和钙盐的第二试 剂混合；测定步骤，测定所述第二混合步骤获得的各种试样的凝固时间；及判断步骤，根据所述测定步骤获得的各试样的所述凝固时间，判断所述受检血浆中是 否含有所述抗凝血物质。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述判断步骤是根据所述测定步骤获 得的各试样的所述凝固时间，获取罗斯纳指数值，根据获取的罗斯纳指数值，判断所述受检 血浆中有无所述抗凝血物质。
17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述抗凝血物质是狼疮抗凝物、后天性 血友病、凝固因子抑制物或Cl失活因子。
18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述肝素中和剂是凝聚胺。
19.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述钙盐是氯化钙。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的方法，其特征在于，所述活化剂是鞣花酸、胶 体硅和无水硅酸中的至少其中之一。
全文摘要
本发明公开了一种可以不受受检血浆中所含外源性肝素影响、方便、准确地进行APTT测定的活化部分凝血酶时间测定试剂、活化部分凝血酶时间测定方法以及判断有无抗凝血物质的判断方法。
文档编号G01N33/86GK102141570SQ201010604249
公开日2011年8月3日 申请日期2010年12月24日 优先权日2009年12月25日
发明者吉田和代, 奥田昌宏 申请人:希森美康株式会社