检测试剂及其应用及含有该试剂的试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，特别涉及活化部分凝血活酶时间APTT测定试剂及其 应用及含有该试剂的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 在临床检验方面，医院各科室对于止血和血栓方面的检测取得了广泛的认识，止 血和血栓方面的检测已经给临床医师对于疾病的诊断、疗效的观察、抗凝剂用量的检测和 预后提够了大量可靠的数据支持，随着国内人们对于这方面的了解和重视，越来越多的检 测手段被用于其中。
[0003] 人体凝血途径分为内源性凝血途径和外源性凝血途径，而活化部分凝血活酶时间 (APTT)是用于检测人体内源性凝血途径是否正常的一个重要指标，如果部分内源性凝血因 子（如VII，VIII，IX，XI)缺乏，就会导致APTT延长。APTT也同样用于对于抗凝血药物肝素 用量的监测。
[0004] APTT测定原理是将待测血浆和APTT试剂一起37°C混匀预温一定时间，然后加入 钙离子，启动内源性凝血途径，促使纤维蛋白原转变成纤维蛋白而凝固，测定凝固时间即为 活化部分凝血酶时间。现有市场上常用的液体APTT试剂多用鞣花酸作为激活剂，此类物质 对于肝素的敏感性较低，且稳定性不好。因此，提供一种APTT的检测试剂具有重要的现实 意义。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明提供一种活化部分凝血活酶时间APTT测定试剂及其应用及含 有该试剂的试剂盒，该活化部分凝血活酶时间APTT测定试剂，具有高稳定，同时对凝血因 子的缺乏具有高灵敏度的优点。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0007] 本发明提供了一种检测试剂，包括白陶土、脑磷脂、缓冲液、牛血清白蛋白（BSA)、 甘氨酸、葡聚糖、NaN3。
[0008] 在本发明的一些具体实施方案中，所述检测试剂中所述白陶土、脑磷脂、缓冲 液、牛血清白蛋白（BSA)、甘氨酸、葡聚糖、NaN3的质量比为（0.5~10) : (0.2X10-3~ 1. 0X 10-3) : (0· 05 ~2) : (1 ~20) : (4 ~40) : (0· 1 ~1) : (0· 1 ~1)。
[0009] 在本发明的一些具体实施方案中，所述检测试剂还包括水。
[0010] 在本发明的一些具体实施方案中，所述检测试剂中所述脑磷脂选自兔脑磷脂、猪 脑磷脂或牛脑磷脂。
[0011] 在本发明的一些具体实施方案中，所述检测试剂中所述缓冲液为Tris-Hcl缓冲 液、hepes缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液或硼酸盐缓冲溶液。
[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，所述检测试剂中所述葡聚糖的分子量为40000。
[0013] 在本发明的一些具体实施方案中，1L所述检测试剂中包括如下组分：
[0014] 白陶土 1~20g 兔脑磷脂 0.2~l.Omg Tris-Hc丨缓冲液 0.05~2g 牛血清白蛋白C B:SA) 1~20g 甘氨酸 4-40g 葡聚糖 0.1~lg NMKa Q.l~lg 水 余量
[0015] 本发明还提供了所述检测试剂在制备检测活化部分凝血活酶时间（APTT)的检测 工具中的应用。
[0016] 本发明还提供了一种检测活化部分凝血活酶时间的试剂盒，包括所述检测试剂。
[0017] 本发明还提供了所述检测试剂或所述试剂盒的使用方法，取待测血浆与所述检测 试剂混合，再与钙离子混合，测定凝固所需时间，即得待测血浆的活化部分凝血酶时间。
[0018] 本发明提供的检测试剂的制备方法为称取白陶土溶于去离子水中，搅拌后，15~ 35°C下静止5-15h，抽取上清混悬液100ml备用。将上述静置好的混悬液加入到Tris-HCL 缓冲液中，搅拌，直到整个液体呈现均一的白色混悬液，然后加入磷脂，葡聚糖4w，叠氮钠， BSA，Gly搅拌混匀，该液体即为APTT试剂。
[0019] 在本发明的一些具体实施方案中，检测试剂的制备方法为称取5-20克白陶土溶 于100ml水中，搅拌2-4h后，常温下静止5-15h备用。将上述静置好的混悬液100ml加入 至lj 900ml 50-300mmol/L的pH为7. 0的Tris-HCL缓冲液中，搅拌30~60min，直到整个液 体呈现均一的白色混悬液，然后加入0. 6-2. Og磷脂，0. 5-1. 5g葡聚糖4w，0. 5-1. Og叠氮钠 5-15gBSA，4-20g Gly搅拌20-60min混匀，该液体即为APTT试剂。
[0020] 本发明提供了一种检测试剂，包括白陶土、脑磷脂、缓冲液、牛血清白蛋白（BSA)、 甘氨酸、葡聚糖、NaN3。本技术相比现有技术具有以下优点，本发明APTT试剂盒通过调整保 护液的组分和比例，使APTT试剂的稳定性很好，4°C放置可以稳定18个月，37°C放置可以稳 定15天，开瓶后置于4°C可以稳定50天，在产品的稳定性上显著（P < 0. 05)优于一般的市 售产品，为医院节约了成本，提供了很好的试剂来源。
【具体实施方式】
[0021] 本发明公开了一种活化部分凝血活酶时间APTT测定试剂及其应用及含有该试剂 的试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的 是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本 发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和 应用本发明技术。
[0022] 本发明提供的APTT试剂是由下述原料配制而成：0.5-10g/l白陶土，兔脑磷 脂 0· 2-1. Omg/1，Tris-Hcl 缓冲液 0· 05-2g/l ;BSA l-20g/l ;甘氨酸 4-40g/l ;葡聚糖 4w 0. l-lg/l，0. 1-lg/l NaN3，其余是水。本技术相比现有技术具有以下优点，本发明APTT试 剂盒通过调整保护液的组分和比例，使APTT试剂的稳定性很好，4°C放置可以稳定18个月， 37°C放置可以稳定15天，开瓶后置于4°C可以稳定50天，在产品的稳定性上优于一般的市 售产品，为医院节约了成本，提供了很好的试剂来源。
[0023] 该试剂检测原理：待测血浆加入适量的APTT激活剂，预温3min后加入钙离子，启 动内源性凝血途径，使维蛋白原转变成纤维蛋白而凝固，测定凝固所需时间，即为待测血浆 的活化部分凝血酶时间（APTT)。
[0024] 表1为本试剂使用操作步骤
[0026] 本发明提供的测定试剂及其应用及含有该试剂的试剂盒中所用原料及试剂均可 由市场购得。
[0027] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0028] 实施例1
[0029] 1、称取1~20克白陶土溶于100ml去离子水中，搅拌2-4h后，15~35°C下静止 5_15h，备用。
[0030] 2、将上述静置好的混悬液100ml加入到900ml (0. 05-2g) pH为7. 0的Tris-HCL缓 冲液、hepes缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液或硼酸盐缓冲溶液中，搅拌30~60min，直到整个液 体呈现均一的白色混悬液，然后加入0. 2~lmg脑磷脂，0. 1~lg葡聚糖4w，0. 1~1. 0g叠 氮钠，1~20gBSA，4~40g Gly搅拌20~60min混匀，该液体即为APTT试剂。
[0031] 实施例2
[0032] 1、称取lg白陶土溶于100ml去离子水中，搅拌2_4h后，15~35°C下静止5_15h， 备用。
[0033] 2、将上述静置好的混悬液100ml加入到900ml 80mmol/l的pH为7. 0的Tris-HCL 缓冲液中（对应Tris-HCLO. 5g)，搅拌30~60min，直到整个液体呈现均一的白色混悬液， 然后加入〇· 6mg兔脑磷脂，0· lg葡聚糖4w，0· lg叠氮钠，lg BSA，40g Gly搅拌20~60min 混匀，该液体即为APTT试剂。
[0034] 实施例3
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