专利名称：一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置的制作方法
技术领域：
本发明申请涉及一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置，属于生物检测技 术领域。
背景技术：
系统性红斑狼疮(SLE)是一种波及全身结缔组织，使多脏器受损害之慢性炎症性 自身免疫性疾病。该病是一种累及多个系统，以慢性非化脓性炎症为特征，临床表现复杂多 样化的结缔组织病，病因尚不完全明确，一般认为可能属于多因素性，即与遗传因素、病毒 感染、内分泌因素、药物因素、环境因素等有关。在SLE发生中核小体是主要的自身抗原并且这种核小体的免疫原性很强，驱动辅 助T细胞进行自身免疫应答，诱导产生抗核小体抗体(AnuA)。AnuA仅对天然的核小体以及 核小体亚结构(H2A-H2B) DNA起作用，而并不与其中的DNA或组蛋白起反应，而且AnuA的形 成又先于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体。近年来，虽然国内对AnuA研究尚少，但其对SLE 的诊断价值在国际上已成为一个热门话题，AnuA对SLE的临床诊断敏感性高.特异性强是 SLE诊断标记性抗体之一。它可以出现在疾病的各个不同时期，出现的时间早并与疾病的活 动性密切相关对SLE早期诊断和疗效动态观察有重要意义。AnuA的阳性率远远高于其他抗 体，结果证实核小体是SLE的自身抗原是多种抗体的根源。也提示AnuA的检测对提高SLE 的诊断有一定临床意义与应用价值，对SLE疾病诊断治疗预后观察具有重要的意义。至今已经有许多不同的技术已被用于检测AnuA，包括LE细胞试验，免疫沉淀法、 免疫印迹法、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验的方法，但这些方法都存在着不足之处；一、LE细胞试验由于LE细胞试验存在着敏感性差、特异性不强、不能定量、操作费时、技术因素影 响大等局限性，因而早在1987年kahn就已对是否还需要再检查LE细胞提出疑问。1994 年，美国临床病理学家协会(ASCP)的实用参数/测定结果委员会更明确提出LE细胞检查 是一项已过时的试验，它应被更具有确定性的免疫学方法所取代。二、免疫沉淀法主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解 质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。本法只是单一的定性试验，不能定 量分析；且本底不易清除，对结果有很大影响。三、免疫印迹法免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用 相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。其不足之 处在于(1)只能进行定性和半定量分析，无法得出被检物质具体的量。(2)操作步骤繁琐，试验用时较长。(3)检测的灵敏度还有待提高。
5
四、间接免疫荧光法该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体， 与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的 发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体 增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也 不太适用于标本量较多的实验室。(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。五、酶联免疫吸附法现在用得最广泛的酶联免疫吸附法(ELISA)来检测AnuA。与其他生物检测或免疫 检测比较，这种ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限，这些 不足主要包括以下几个方面(1)使用12X8型、8X 12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原抑或抗体包被用 品和反应容器，在使用时只能分成12批次、8批次或整板一次使用；(2)定量测定所用的试剂可多达11种，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并 且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类 多，加注试剂的操作也极为繁琐，如果不使用全自动酶免分析仪的话，则全部操作都要用手 工来进行，而全自动酶免分析仪的价格十分昂贵，投入较大；(3)每一检测或每次检测无试剂信息的条形码，只能通过查看试剂盒外包装盒的 标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中 不受控，具有很大的随意性；(4)检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影 响检测结果；(5)在未采用全自动酶免分析仪进行检测时的检测过程为手工操作，试剂或样品 的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的不准确度和不 精密度高；(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数X96人份，如果需要检 测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10X96人份，如果只有一份样品需要检测10个 不同的项目，也需要配置10X96人份的试剂。
发明内容
为了解决抗核小体抗体IgG分析检测现有方法中存在的不足之处，本发明申请提 供一种新的检测方法和试剂装置及配套试剂。该方法基于酶联免疫检测技术，寻求一种更 加简单、准确、有效的一套方法及试剂来进行定量检测以满足临床诊断的需要。本方法基于酶联免疫检测的原理来实现抗核小体抗体IgG的免疫检测，是一种独 立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗核小体抗体IgG的分析方法、试剂装置以及 配套试剂，它可以将抗核小体抗体IgG酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个分析装置上，通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用需要进行相关的免疫学检测，为临 床应用提供了更好的依据。本发明申请提供一种测定抗核小体抗体IgG的方法，是通过酶联免疫检测的分析 试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有8个孔位的基体 和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试剂溶 液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最终通 过对测量的数值进行处理而获得检测结果。所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，是将待测样品中的待测抗核小体抗体IgG 与高度纯化的核小体抗原进行反应而形成第一免疫络合物，该第一免疫络合物与酶标记的 第二抗体进行反应形成第二免疫络合物，将反应形成的第二络合物与显色底物进行显色对 比分析，从而获得待测抗核小体抗体IgG的含量。所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其中，所述的第二抗体为辣根过氧化物酶 标记的抗人IgG抗体。本发明申请还提供一种测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，设有8个孔位的基体、 位于基体一端的手柄，以及用于酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG的分析试剂装置以及相 应数量的配套试剂校准品、质控物和缓冲洗涤液的组份。所述的测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其中，所述基体一端的手柄上粘贴有 检测试剂条形码的标帖，所述条形码的数值包含每项检测所对应的检测项目代码、检测试 剂生产批号、试剂有效期、定性校正值/定量测定标准曲线参数、酶联免疫反应类型、试剂 及分析装置的序列号的信息。所述的测定抗核小体抗体IgG的试剂装置中，所述孔位包括一个反应孔、一个样 品孔、一个稀释孔和五个试剂孔，其中，1)样品孔盛容待测溶液；2)稀释孔用于样品的稀释；3)反应孔为平底并具有很高的光源/光路通透性，当盛装无色/空白试剂溶液时 对可见光/紫外光/荧光的吸光度值趋近于零，孔内包被有检测抗核小体抗体IgG所需的 高度纯化的核小体抗原，该孔用于盛容检测样品和检测试剂，并与这些样品和试剂发生酶 联免疫反应，是酶联免疫反应和色泽显示及检测的容器；4)每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG所需的一种试剂，加注 试剂后用密封薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。所述的测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，所述试剂孔内所盛装酶联免疫检测所 需的试剂包括检测抗核小体抗体IgG之酶联免疫反应所需的免疫反应抑制剂/中和剂/阻 断剂/吸附剂、酶结合物溶液、显色底物溶液、显色终止液、反应增强剂/促进剂、样品稀释 溶液。所述的测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，所述样品孔、反应孔、稀释孔和试剂孔 剖面形状包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之间的任意组合。所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，所述的方法包括如下的步骤1)开机打开仪器开关后，仪器会自动地进行一系列检查，从而为仪器的正常运 行做准备；
2)检查程序的准备按要求配置好相应的溶液，包括缓冲洗涤液、清洗液、消毒 液和蒸馏水或去离子水，配制完毕装入相应的液体罐中；3)冲洗检查4)预热在开机后，仪器会启动加热程序，将温度调至待检温度；5)与主机连机仪器通过RS232串口可以和主机相连，从而将仪器正常工作所得 结果交由集中式系统处理；6)抗核小体抗体IgG的检测所述的检测又包括如下的步骤i.从有密封口的一边打开包装袋，取用所需数量的分析装置，排除空气后将袋口 封紧；ii.检查分析装置试剂孔中的底物，应为无色泽改变，否则应弃掉；iii.分别在每个分析装置的样品孔中加50 100 μ L未稀释的样品，每更换一个 批号的试剂，应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；iv.放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中，按照使用说明书进行校准和 检测；v.按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置，并在检测 位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置，仪器可自动地识别分析装置条码、质控物 条码和校准品条码，选择行可定位于“样品”栏或“检测”栏；vi.点击开始，运行项目表，扫描各个分析装置条码，对质控物，校准品以及检测样 品进行编号；vii.运行检测表，仪器根据条码信息自动运行，根据条码，仪器会选择相应设置 好的标准曲线，程序首先检测校准品，以此来校准仪器内预设的曲线；其次对质控物进行检 测，如果其检测结果在标示的范围内，则表示内置曲线合格，可用于样品的检测，最后开始 样品的检测程序；viii.稀释加注针会从样品孔自动吸取样品，刺破孔位密封薄膜自动吸取稀释 液在稀释孔进行样品稀释，动作完成后，被稀释的样品会被加注针移至试剂孔反应一段程 序设定的时间，之后移除液体；ix.洗涤加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔进行三到五次 洗涤后移除液体；χ.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗 体至试剂孔进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体；xi.重复步骤ix洗涤；xii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔进行一段程 序设定的时间反应；xiii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔，在10分钟 内于450nm读取OD值，如果选择双波长法测定，参考波长为620nm 690nm ；7)检测结果当检测程序运行完毕，点击与主机的数据传输，仪器会自动将正常 工作所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析，最后生成报告单以便查阅；8)关机检测结束后，在仪器关机前，必须启动洗涤循环，这样可以避免来自溶液 中的残留盐份在液路中结晶，避免损坏仪器或导致检测结果无效，洗涤完成后，仪器电源自动关闭。所述的分析试剂装置是一种测定抗核小体抗体IgG的独立的、单人份的、一次性 使用的专用于特定分析仪器的酶联免疫分析试剂装置。本发明申请所述的用于抗核小体抗体IgG酶联免疫的检测方法和配套试剂，其中 实现抗核小体抗体IgG免疫检测的分析试剂装置，是一种独立的、单人份的、一次性使用的 专用于特定分析仪器的酶联免疫检测试剂装置。本发明申请所述测定抗核小体抗体IgG的方法及装置，继承了其他检测方法所具 有的特异性强、灵敏度高，准确性好、成本较低、使用要求不高、操作较为简便、获得检测结 果时间短、应用广泛等特点，解决了其他检测方法的诸多不足，具体体现在以下几个方面1.这种检测方法，它运用酶联免疫分析原理，利用特定的分析仪器，采用配套专用 的检测试剂盒及分析试剂装置，自动实现抗核小体抗体IgG的定性/定量测定，是一种全新 的、适用的、实用的、高效的、快速的检测抗核小体抗体IgG的方案；2.它是一种独立的、单人份的检测试剂及分析装置，无需像通用ELISA法那样使 用12X8型、8X 12型或整板型96孔专用酶联免疫微孔板作为抗原抑或抗体包被用品和反 应容器，在使用时只要有一份样品即可进行对应项目的检测而无试剂的浪费。如果样品的 数量超过一份，按实际样品数使用该试剂及分析装置即可；3.无论是定性检测还是定量检测，它将每一检测必须的试剂盛装在一个分析试剂 装置的试剂孔位内，而无须将检测试剂分别用不同的试剂瓶来盛装，不但操作极为简便，而 且不容易造成操作差错，从而保证检测结果的正确性；4.它对每一个分析试剂装置都有一个专用条形码，条形码的数值包含检测所对应 的检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定量测定标准曲线参数、具体的酶联免 疫反应类型、试剂及分析装置的序列号等信息，不能随意被改变，使用时严格受控，尤其是 在使用超过有效期检测试剂时，将被识别并阻止发出检测报告，从而可以确保检测的准确 性；5.它将每一检测试剂进行有效分隔和密封，不会引起各种试剂之间的交叉污染而 影响检测结果；6.它是一种专用于特定分析仪器的分析试剂装置，在检测过程中用全自动的精密 加液器来加注检测试剂或样品，操作自动化，加量精确，检测结果的准确度和精密度高；7.在检测项目成套试剂的数量配置及使用上，一切按实际使用需要来进行配备即 可，尤其是在对多项目检测上，配备更为适量，不会出现超配置及使用情况；
图1是本发明申请所述测定抗核小体抗体IgG的试剂装置的一个实施例的剖面结 构示意图；图2是本发明申请所述测定抗核小体抗体IgG的试剂装置的一个实施例的平面俯 视图；图3是本发明申请所述测定抗核小体抗体IgG的试剂装置的另一个实施例的剖面 结构示意图；图4是本发明申请所述测定抗核小体抗体IgG的试剂装置的另一个实施例的平面
9俯视图；图5和图6是本发明申请所述测定抗核小体抗体IgG的试剂装置的其它实施例的 剖面结构示意图；其中，1为样品孔、2、3、4、5、6为试剂孔、7为反应孔、8为稀释孔、9为手柄、10为密 封薄膜、11为基体、90为标贴。
具体实施例方式以下结合具体的检测装置与实施步骤对本发明申请所述的检测方法和试剂装置 进行进一步的描述，目的是为了公众更好的理解本发明申请所述的技术方案，而不是对所 述技术方案的限制。事实上，在本发明精神实质内，对所述方法步骤的改进，以及对相应试 剂装置结构的增减、替换和改进都在本发明申请所要求保护的技术方案之内。实施例1检测抗核小体抗体IgG的间接酶联免疫检测方法和试剂盒及试剂装置本发明是基于酶联免疫检测技术上的一种更加简单、准确、有效的一套方法，其采 用的基本原理为间接酶联免疫法。将由高度纯化的核小体抗原吸附于固相上，通过孵育使 稀释的人血清中的特异性抗体与抗原结合，洗涤去除未与固相结合的抗体，加入用辣根过 氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白酶联物，孵育。去除未结合的酶联物，加入酶色原底物。产 生的颜色与检测样本中的特异性抗体浓度成正比。这种方法主要是通过用于酶联免疫检 测的分析试剂装置和配套试剂来实现抗核小体抗体IgG的免疫检测。通过这种酶联免疫方 法，同时运用特定分析仪器的分析试剂装置和试剂，可快速，准确的做出判断用于临床诊断 的需要。其分析装置具体结构如下如图1-6所示，是本发明申请所述的一种测定抗核小体抗体IgG酶联免疫检测分 析的试剂装置，包括基体11，在所述基体11上设有1 8个孔位(1、2、3、4、5、6、7、8)，其中 孔位1是用于盛装待测样品的样品孔，且其底面为“V”型凹槽底，其余孔位是反应孔7、稀释 孔8、试剂孔0、3、4、5、6)，所述反应孔7是用于接收检测样品和检测试剂并作为酶联免疫 反应和比色的容器的反应孔，该反应孔是光源/光路的通透孔，在所述基体一端设有手柄 9，在所述手柄上粘贴有检测抗核小体抗体IgG试剂信息条形码的标贴90。本实施例中，所 述标号为2、3、4、5、6是试剂孔，使用时，这些标号为2、3、4、5、6试剂孔中已盛装有检测所需 的试剂，且其开放口缘可为方形或圆形，其底面为“V”型凹槽底，盛装试剂或空置后用密封 薄膜10封口，所述标号为8是稀释孔，用于样品的稀释，上面没有覆盖密封薄膜。分析试剂装置外的试剂盒中的其他试剂包括校准品、质控物、缓冲洗涤液、清洗 液、消毒液和蒸馏水或去离子水。实施例2试剂装置或试剂盒的制作-间接法检测抗核小体抗体IgG以孔位1作为待测样品盛装容器，在使用时加入液体样品，供检测时取用；以孔位2作为空孔，用密封薄膜封口，供检测备用；以孔位3作为试剂容器，加入样本稀释试剂后用密封薄膜封口，供检测时取用；以孔位4作为试剂容器，加入终止试剂后用密封薄膜封口，供检测时用；以孔位5作为试剂容器，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体试剂后用密封 薄膜封口，供检测时用；以孔位6作为试剂容器，加入酶反应底物试剂后用密封薄膜封口，供检测时用；
以孔位7作为包被物孔/反应容器/比色孔，已包被有高度纯化的核小体抗原，并 作为反应容器加注待测的液体样品和检测试剂及洗涤液，最后加入酶反应底物孵育后进行 吸光度测定；以孔位8作为样品稀释容器，供稀释样品时用；在手柄9粘贴有抗核小体抗体IgG检测试剂及分析装置信息的条形码90，该条 形码包括检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定性校正系数/定量检测校正系 数、酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号。按照上述方法制备若干分析装置，另外制备相应的试剂，包括校准品、质控物、缓 冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子水等。这样即构成了完整的抗核小体抗体IgG 测定试剂盒组分。将检测抗核小体抗体IgG的试剂装置及配套使用组份装入试剂盒的外包 装盒，即制成检测抗核小体抗体IgG试剂盒。实施例3通过全自动分析仪实现对样本抗核小体抗体IgG检测的分析操作流程全自动分析仪包括一个分析装置托盘，它是与分析装置的形状相配套的，一共有 30个位置可供分析装置放置，用于检测分析。此外还包括模块式集成机械电子结构，可实现 自动化的加样，稀释，孵育，洗涤以及读数过程。每个位置独立定量分析，且有200余个电子 传感器监控仪器运行，保证结果的准确性。仪器运行后，分析装置托盘会自行转动到不同的 位置进行加样，稀释，孵育，洗涤以及读数的步骤。(1)开机打开仪器开关后，仪器会自动地进行一系列检查，从而为仪器的正常运行做准备。(2)检查程序的准备按要求配置好相应的溶液，包括缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子 水，配制完毕装入相应的液体罐中。(3)冲洗检查(4)预热在开机后，仪器会启动加热程序，将温度调至待检温度。(5)与主机连机仪器通过RS232串口可以和主机相连，从而将仪器正常工作所得结果交由集中式 系统处理。(6)抗核小体抗体IgG的检测1)从有密封口的一边打开包装袋，取用所需数量的分析装置，排除空气后将袋口 封紧；2)检查分析装置试剂孔6中的底物，应为无色泽改变，否则应弃掉；3)分别在每个分析装置的样品孔1中加50 100 μ L未稀释的样品，每更换一个 批号的试剂，应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；4)放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中，按照使用说明书进行校准(若 有必要)和检测；5)按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置，并在检测 位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置，仪器可自动地识别分析装置条码、质控物 条码和校准品条码，选择行可定位于“样品”栏或“检测”栏；
6)点击开始，运行项目表，扫描各个分析装置条码，对质控物，校准品以及检测样 品进行编号；7)运行检测表，仪器根据条码信息自动运行，根据条码，仪器会选择相应设置好的 标准曲线，程序首先检测校准品，以此来校准仪器内预设的曲线；其次对质控物进行检测， 如果其检测结果在标示的范围内，则表示内置曲线合格，可用于样品的检测；最后开始样品 的检测程序；8)稀释加注针会从样品孔1自动吸取样品，刺破孔位密封薄膜10，自动吸取稀释 液在稀释孔8进行样品稀释，动作完成后，被稀释的样品会被加注针移至试剂孔3反应一段 程序设定的时间，之后移除液体；9)洗涤加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔3进行三到五次 洗涤后移除液体；10)加注针刺破试剂孔5密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗人IgG 抗体至试剂孔3进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体；11)重复步骤9)洗涤;12)加注针刺破试剂孔6密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔3进行一段 程序设定的时间反应；13)加注针刺破试剂孔4密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔3，在10分 钟内于450nm读取OD值，如果选择双波长法测定，参考波长为620nm 690nm ；(7)检测结果当检测程序运行完毕，点击与主机的数据传输，仪器会自动将正常工作所得结果 发送到主机交由外接数据处理软件分析，最后生成报告单以便查阅；(8)关机检测结束后，在仪器关机前，必须启动洗涤循环，这样可以避免来自溶液中的残留 盐份在液路中结晶，避免损坏仪器或导致检测结果无效，洗涤完成之后，仪器电源自动关 闭。实施例4患者样品的检测应用、结果分析以及检测的质控采用实施例3的操作方法与程序，使用方法使用实施例2所述的试剂盒，可用于定 量测定人血清中的抗核小体抗体IgG水平。抗核小体抗体被视为一种SLE诊断标志物。在几乎100%的活动性SLE患者及 62%的非活动性SLE患者体内能检测到此种抗体(在非活动性SLE患者中检测到抗双链 DNA抗体的几率仅为3.3% )。因为比抗双链DNA抗体较早出现，所以抗核小体抗体被视为 SLE恶化的早期标志物。因此我们可根据检测的结果来进行临床诊断，初步判断患者患病的 情况，最终确诊应结合临床表现或其他诊断方法/指标进行综合考虑。以下为检测结果的分析(1)参考值(参考范围)正常参考值0 25AU/mL ；检测一定数量(具有统计学意义)的阴性样本，结果的 平均值加3倍标准偏差(即I + 3SD)为正常参考值的上限。建议各实验室根据实际情况， 建立自己的正常参考值范围。为了方便临床应用，我们推荐
12
样本值< 20AU/mL阴性20AU/mL彡样本值彡30AU/mL 可疑样本值> 30AU/mL阳性(2)检测结果的解释结果解释样本值> 30AU/mL时，表明抗体浓度明显升高，应结合临床表现或其他 诊断方法/指标确诊是否患有系统性红斑狼疮；样本值< 20AU/mL时，表明机体抗核小体抗 体IgG水平无明显上升；20AU/mL彡样本值彡30AU/mL时，应重新检测，若仍为可疑，2_3周 后重新采集样本检测。以下是将实施例3的检测过程重复检测阳性和阴性质控血清，检查结果的再现
性，获得如下的结果
权利要求
1.一种测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述方法是通过酶联免疫检测的 分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有8个孔位的 基体和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试 剂溶液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最 终通过对测量的数值进行处理而获得检测结果。
2.根据权利要求1所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述的方法是 将待测样品中的待测抗核小体抗体IgG与高度纯化的核小体抗原进行反应而形成第一免 疫络合物，该第一免疫络合物与酶标记的第二抗体进行反应形成第二免疫络合物，将反应 形成的第二络合物与显色底物进行显色对比分析，从而获得待测抗核小体抗体IgG的含 量。
3.根据权利要求2所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述的第二抗 体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体。
4.一种用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述的试剂装置设有8 个孔位的基体、位于基体一端的手柄，以及用于酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG的分析 试剂装置以及相应数量的配套试剂校准品、质控物和缓冲洗涤液的组份。
5.根据权利要求4所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 基体一端的手柄上粘贴有检测试剂条形码的标帖，所述条形码的数值包含每项检测所对应 的检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定性校正值/定量测定标准曲线参数、 酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号的信息。
6.根据权利要求4所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 孔位包括一个反应孔、一个样品孔、一个稀释孔和五个试剂孔，其中，1)样品孔盛容待测溶液；2)稀释孔用于样品的稀释；3)反应孔为平底并具有很高的光源/光路通透性，当盛装无色/空白试剂溶液时对可 见光/紫外光/荧光的吸光度值趋近于零，孔内包被有检测抗核小体抗体IgG所需的高度 纯化的核小体抗原，该孔用于盛容检测样品和检测试剂，并与这些样品和试剂发生酶联免 疫反应，是酶联免疫反应和色泽显示及检测的容器；4)每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG所需的一种试剂，加注试剂 后用薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。
7.根据权利要求6所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 试剂孔内所盛装酶联免疫检测所需的试剂包括检测抗核小体抗体IgG之酶联免疫反应所 需的免疫反应抑制剂/中和剂/阻断剂/吸附剂、酶结合物溶液、显色底物溶液、显色终止 液、反应增强剂/促进剂、样品稀释溶液。
8.根据权利要求6所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 样品孔、反应孔、稀释孔和试剂孔剖面形状包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之 间的任意组合。
9.根据权利要求1所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述的方法包 括如下的步骤1)开机打开仪器开关后，仪器会自动地进行一系列检查，从而为仪器的正常运行做准备；2)检查程序的准备按要求配置好相应的溶液，包括缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和 蒸馏水或去离子水，配制完毕装入相应的液体罐中；3)冲洗检查4)预热在开机后，仪器会启动加热程序，将温度调至待检温度；5)与主机连机仪器通过RS232串口可以和主机相连，从而将仪器正常工作所得结果 交由集中式系统处理；6)抗核小体抗体IgG的检测所述的检测又包括如下的步骤i.从有密封口的一边打开包装袋，取用所需数量的分析装置，排除空气后将袋口封紧； .检查分析装置试剂孔中的底物，应为无色泽改变，否则应弃掉；iii.分别在每个分析装置的样品孔中加50 100μ L未稀释的样品，每更换一个批号 的试剂，应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；iv.放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中，按照使用说明书进行校准和检测；v.按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置，并在检测位置 之前放入含有校准品和质控物的分析装置，仪器可自动地识别分析装置条码、质控物条码 和校准品条码，选择行可定位于“样品”栏或“检测”栏；vi.点击开始，运行项目表，扫描各个分析装置条码，对质控物，校准品以及检测样品进 行编号；vii.运行检测表，仪器根据条码信息自动运行，根据条码，仪器会选择相应设置好的标 准曲线，程序首先检测校准品，以此来校准仪器内预设的曲线；其次对质控物进行检测，如 果其检测结果在标示的范围内，则表示内置曲线合格，可用于样品的检测，最后开始样品的 检测程序；viii.稀释加注针会从样品孔自动吸取样品，刺破孔位密封薄膜自动吸取稀释液在 稀释孔进行样品稀释，动作完成后，被稀释的样品会被加注针移至试剂孔反应一段程序设 定的时间，之后移除液体；ix.洗涤加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔进行三到五次洗涤 后移除液体；X.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体至 试剂孔进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体； xi.重复步骤ix洗涤；χ .加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔进行一段程序设 定的时间反应；xiii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔，在10分钟内于 450nm读取OD值，如果选择双波长法测定，参考波长为620nm 690nm ；7)检测结果当检测程序运行完毕，点击与主机的数据传输，仪器会自动将正常工作 所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析，最后生成报告单以便查阅；8)关机检测结束后，在仪器关机前，必须启动洗涤循环，这样可以避免来自溶液中的残留盐份在液路中结晶，避免损坏仪器或导致检测结果无效，洗涤完成后，仪器电源自动关 闭。
全文摘要
本发明提供一种基于酶联免疫检测的原理来实现抗核小体抗体IgG的免疫检测的方法及其试剂装置，是一种独立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗核小体抗体IgG的分析方法、试剂装置以及配套试剂。它可以将抗核小体抗体IgG酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个分析装置上，通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用需要进行相关的免疫学检测，为临床应用提供了更好的依据。
文档编号G01N33/543GK102147409SQ201010619750
公开日2011年8月10日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者伍坚, 何林, 潘荞, 肖灿 申请人:深圳市亚辉龙生物科技有限公司