一种硫酸鱼精蛋白效价测定方法
【专利摘要】《中国药典》2010年版规定硫酸鱼精蛋白效价采用生物测定法，比较肝素标准品(S)与供试品(T)延长新鲜兔血或猪、兔血浆凝结时间的程度，以测定供试品的效价。兔血浆的市场价格昂贵，10元/支，每支0.5ml，测定一个硫酸鱼精蛋白样品，至少需要60支。本发明专利采用紫外分光光度计，550nm波长下测定溶液透光率，测定硫酸鱼精蛋白的效价，操作不需要兔血浆，成本降低，而且操作更加方便快捷。
【专利说明】一种硫酸鱼精蛋白效价测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药领域，具体地说涉及硫酸鱼精蛋白效价的测定。
【背景技术】
[0002]《中国药典》2010年版附录VIIJ硫酸鱼精蛋白生物测定法，详述了硫酸鱼精蛋白效价的测定方法，通过兔血浆凝结状况来判定其效价。具体操作方法如下:
[0003](I)肝素标准品溶液的配制称取肝素标准品适量，按效价加0.9%氯化钠溶液溶解使成几种不同浓度的溶液。
[0004](2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制称取硫酸鱼精蛋白，加0.9%氣化纳溶液,制成Img/ml的溶液。
[0005](3)检定法取小试管8支，第I管和第8管为空白对照管，加入0.9%氯化钠溶液0.2ml,第2?7管为供试品管,每管加入硫酸鱼精蛋白溶液0.1ml,再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液0.1ml，立即混匀。然后分别于上述各管中加入0.7ml的血浆，置37±0.5°C恒温水浴中预热5?10分钟，每管分别加入1%氯化钙溶液0.1ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间。观察并记录各管凝结时间。
[0006]结果判断两支对照管的凝结时间相差不得超过1.35倍。在供试品管的凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间150%的各管中，以肝素浓度最高的一管作为终点管。同样重复5次，5次试验测得终点管的肝素浓度，相差不得大于10个单位。5次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白Img中和肝素的单位数。
[0007]检验中使用的兔血浆或是亲自制备，或是花昂贵的价格购买，市场上血浆的价格约为10元/支，每支0.5ml,测定一个硫酸鱼精蛋白样品，重复5次,至少60支兔血衆,600多元钱，检验成本很高。另外，操作复杂，耗时间长。
【发明内容】
[0008]本发明的目是提供了一种硫酸鱼精蛋白效价测定方法。
[0009]具体地，本发明的目的是提供的硫酸鱼精蛋白效价测定方法，不适用兔血浆，检验实惠、操作方便、快捷。
[0010]本发明采用以下测定方法方案予以实现上述目的:
[0011](I)肝素标准品溶液的配制称取肝素标准品，加0.9%氯化钠溶液溶解使成不同效价浓度的肝素标准品稀释液。
[0012](2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制称取硫酸鱼精蛋白，加0.9 %氣化纳溶液,稀释成lmg/ml的溶液。
[0013](3)检定法取试管，每管加入硫酸鱼精蛋白溶液，再每管加入等体积的一种浓度的肝素标准品稀释液，静置，取上清液，550nm波长下，测定每管混合液的透光率。
[0014]透光率最高管的肝素标准品的效价浓度数，即为硫酸鱼精蛋白的效价。
[0015]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果:[0016]经过多次实验，本发明测定的硫酸鱼精蛋白的效价，与《中国药典》2010年版规定的硫酸鱼精蛋白生物测定法所测得的效价完全一致。但进行对比发现，本发明的优势在于①使用的实验试剂少，不需要兔血浆、氯化钙，实验成本低，；②操作快捷、时间短实验所需的仪器少，不需要水浴锅、秒表等。
【具体实施方式】
[0017]实施例1:
[0018](I)肝素标准品溶液的配制
[0019]称取肝素标准品150.05mg,单位效价180iu/mg，加0.9 %氯化钠溶液溶解使之成为不同效价浓度的肝素标准品稀释液各25ml，效价浓度分别为145iu/ml，150iu/ml，155iu/ml,160iu/ml,165iu/ml,170iu/mlo
[0020](2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制
[0021]称取硫酸鱼精蛋白122.52mg，批号110901，加0.9%氯化钠溶液，稀释成lmg/ml的溶液。
[0022](3)检定法
[0023]取试管6支，每个试管中加入硫酸鱼精蛋白溶液5ml，再在各个试管中分别加入5ml 的对应浓度为 145iu/ml, 150iu/ml, 155iu/ml, 160iu/ml, 165iu/ml, 170iu/ml 肝素标准品稀释液，静置，取上清液，500nm波长下，测定每管混合液的透光率，重复3次。
[0024]结果见下表:
[0025]
【权利要求】
1.一种硫酸鱼精蛋白效价的测定方法，其特征在于包括使用肝素的氯化钠溶液。
2.权利要求1所述的测定方法，其特征在于包括以下步骤: (1)肝素标准品溶液的配制 称取肝素标准品，加氯化钠溶液溶解使之成为不同效价浓度(iu/ml)的肝素标准品稀释液。 (2)硫酸鱼精蛋白溶液的配制 称取硫酸鱼精蛋白待测样品，加氣化纳溶液，稀释成硫Ife鱼精蛋白溶液。 (3)检定法取试管，每试管中分别加入步骤(2)中所得到的硫酸鱼精蛋白溶液，再在每试管中分别加入上述步骤(I)中配制的不同效价浓度的肝素标准品稀释液，静置，取上清液，测定每个试管中混合液的透光率，其中每个试管中的硫酸鱼精蛋白溶液与肝素标准品稀释液的体积相等。 根据透光率最高的试管中的肝素标准品稀释液的效价浓度数所对应的效价值，计算得出硫酸鱼精蛋白样品的单位效价(iu/mg)。
3.权利要求2所述的测定方法，其特征在于:所述步骤⑴和(2)中所用氯化钠溶液的浓度为0.8质量％ -1.2质量％。
4.权利要求2所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(2)中的硫酸鱼精蛋白溶液的浓度为 0.6-1.2mg/ml。
5.权利要求4所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(2)中的硫酸鱼精蛋白溶液的浓度为lmg/ml。
6.权利要求2所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(I)中的不同效价浓度的肝素标准品稀释液之间的效价浓度差可以相同或不同。
7.权利要求2所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(I)中的不同效价浓度的肝素标准品稀释液之间的效价浓度差为3-8iu/ml。
8.权利要求2所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(3)中测定透光率的光的波长为 400nm-600nm。
9.权利要求2所述的测定方法，其特征在于:所述步骤(I)中不同效价浓度的肝素标准品稀释液的效价浓度范围为100iu/ml-200iu/ml。
【文档编号】G01N21/59GK103604779SQ201310338351
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年7月30日 优先权日:2013年7月30日
【发明者】刘乃山, 葛翠凤, 刘翠珍, 孙延年, 刘振海 申请人:青岛九龙生物医药有限公司