专利名称：预处理型侧向层析检测组件的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测装置，尤其涉及一种预处理型检测组件，采集到的样品 可直接施加于检测组件内，由其中预处理部件对样品进行处理后转移至侧向层析检测部件 进行检测。
背景技术：
抗原或抗体的检测属于免疫学检测技术，根据检测标记物的不同，可以将检测方 法分为酶联免疫检测、同位素免疫检测、胶体金免疫检测、荧光免疫检测和化学发光免 疫检测等，根据检测方式不同，又可以分为免疫酶标板、免疫侧向层析试纸和免疫渗滤 等方法。其中，目前使用最广泛且最具代表性的免疫学检测方法为酶联免疫吸附检测法 (ELISA)0 ELISA检测通常在48孔或96孔酶标板上完成，检测过程步骤较多，时间较长，检 测所需的样本量亦较大。其单次检测的样本数较少且难以同时检测多种抗原或抗体。与酶联免疫吸附技术相比，免疫渗滤技术和免疫侧向层析技术具有操作简单(仅 需一步)、应用灵活(单人份或少量样品)和检测时间短(约15分钟)等特点。斑点金免疫渗 滤法(Dot ImmunoGold Filtration Assay, DIGFA)是免疫渗滤技术的代表，该方法的装置 包括盖板、底板、微孔滤膜和吸水纸。微孔滤膜置于吸水纸上，然后放置于底板内，最后盖上 设有通孔(反应孔)的盖板。微孔滤膜上包被有分子(抗原或抗体)，待测样品滴加于微孔滤 膜后，液体在重力作用下而向滤膜下方渗滤，再通过清洗和加入标记抗体后实现对待测样 品中的目标分子的检测。免疫侧向层析技术(Lateral Flow Immunoassay，LFIA)是继免疫渗滤之后的另一 项膜固相检测技术，通常采用试纸条，这类试纸条通常包括样品垫(sample pad)、标记结合 垫(conjugate pad)检测垫(membrane)、吸水垫(wick)和支撑底板(backing)。该技术主 要以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜的毛细管作用实现溶液在载体上的迁移。待测样品 经样品垫上样，在毛细现象的作用下，滴加在膜条一端的待测样品慢慢向另一端渗移。移动 过程中目标分子与固定于膜上某一区域的分子(抗体或抗原)结合，待测样品中的其它分子 则继续渗移而与目标分子分离，然后通过标记物(如荧光、化学发光、放射性或显色等)来 判断待测样品中是否含有目标分子。在运用这些检测技术之前，需要对采集到的样品进行前处理，如通过离心的方式 将血清从血液中分离，才能避免血红细胞对检测结果的干扰。为使检测器件在实际应用中 更为简便，中国实用新型专利ZL01206818. 7公开了一种带有过滤结构的抗原一抗体反应 型检测试纸，在沿长度方向延伸的片状支承结构体的一侧表面经连接材料设置有可用于包 被检测用生物大分子的检测反应膜，在其长度方向的一端表面处设置有包被有化学偶合物 的垫片材料结构层。至少在检测反应膜长度方向的另一端表面处以能与其保持液体渗透接 触方式设置有至少一层疏水性的血液细胞过滤结构层。中国发明专利申请200810045268. 1 公开了一种便携式血液传染病快速联检装置，包括吸样头和连接在吸样头后端的检测管。 吸样头内腔由前至后分别填充有样品过滤材料和样品吸水材料，检测管中内置试纸固定柱，该试纸固定柱上固定有多种检测试纸条，通过一次吸样、同背景检测，几分钟内即可用 肉眼一次同时联检样品。上述两项技术虽都采用了过滤材料，但是采用样品侧向层析的同时对血液细胞进 行过滤的方式，仍难以避免血红细胞对检测干扰，对检测结果准确性造成一定的影响。中国实用新型专利ZL01227580. 8公开了一种血浆分离检测试剂盒，包括由不透 水硬质材料制成的支撑底片、粘贴在支撑底片上滤血膜垫、一端与滤血膜垫相接，粘贴在支 撑底片上检测膜、以及不透水的隔离膜，一端粘贴于检测膜与滤血膜垫相接处的滤血膜垫 端，另一端粘贴于滤血膜垫的顶部。血液样品施加于滤血膜垫后，在重力作用下垂直过滤后 在有水平通过侧向层析进行检测。采用垂直加样的方式，使全血样品在重力作用下依次透 过分散膜垫和附加滤血膜垫，在侧向通过滤血垫膜后，按侧向层析方式完成检测。该技术通 过多层次的过滤，避免了血红细胞对检测的干扰，但是样品需要先经垂直过滤后，再直接侧 向过滤，当分子量偏大或分子的Stocks半径较大时，分子迁移无法实现同步性，从而难以 满足样品检测的重现性和平行性要求。中国发明专利申请200910148911. 8公开了一种用于快速检测全血样品中的目标 物质的装置，包括用于接收并过滤全血样品以产生滤过的血样的第一部件，用于接收该滤 过的血样并且检测是否存在目标物质的第二部件，其中第一部件包括反应膜，以及通过毛 细作用将滤过的血样从第一部件中转移至第二部件的第三部件，其中第一部件位于第二部 件的上方。该技术同样采用垂直过滤方式，但是在完成样品过滤之后还需要在第三部件参 与下，把过滤后的样品转移至第二部件已完成检测，实际操作过程不够简便，易对样品造成 污染。
实用新型内容本实用新型的目的在于提供一种预处理型侧向层析检测组件，过滤部件先对采集 的样品进行垂直过滤后，再在检测部件一端加入检测试剂，按侧向层析方式完成检测。本实用新型提供的一种预处理型侧向层析检测组件，包括检测部件、支撑部件和 过滤部件。检测部件包括试剂垫、标记垫、层析垫和吸收垫。试剂垫和吸收垫设于检测部件的 两端，标记垫与试剂垫连接，层析垫两端分别与标记垫和吸收垫连接。组成本实用新型检测 部件的各个组件，如试剂垫、标记垫、层析垫和吸收垫的材质与侧向层析的试纸条所用的 材质一致。支撑部件包括底座和盖板，检测部件置于底座上，盖板盖于检测部件。盖板上设有第一开口、第二开口和第三开口。第一开口，用于将层析试液(如缓冲 液或水)施加于开口之下的试剂垫；第二开口之下为层析垫；第三开口，用于对其下方的侧 向层析T线区和C线区进行判断，如通过肉眼观察或借助仪器进行检测。过滤部件与第二开口配合，如第二开口内设置过滤部件，或将过滤部件单独设 置，使用时将过滤部件置于第二开口。在过滤样品时，过滤部件的下方为层析垫。过滤部件为单一材质制成的单层膜，或由多种材质制成的复合膜。许多公司都提 供这类商品化具有过滤作用的膜，如PALL、Millipore和GE Healthcare等公司。与侧向层析一致，标记垫上结合有标记物的标记抗体或标记抗原。用于标记抗体的标记物，如但不仅限于，胶体金、纳米磁性颗粒、胶体碳、胶体硒、脂质体、量子点、金属离 子、有机荧光分子或彩色微球等。层析膜上需要把结合抗原或抗体预先固定于T线区和C 线区。抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体产 生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。抗原的反应性取 决于抗原决定簇(antigenic determinant)，亦称表位(印itope)。一个抗原分子可带有不 同的决定簇。此外，还可以通过基因工程或化学连接的方式对表位进行拼接。抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。Ig分五类，即 IgG、IgA、IgM、IgD和IgE0与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM0抗原或抗体的制备，可以通过多肽化学合成、原核微生物(如大肠杆菌)基因工程 菌表达后纯化、真核微生物(如啤酒酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁韦酵母等)基因工程菌表达 后纯化或由动物细胞(如中国仓鼠CH0、仓鼠BHK、鼠骨髓瘤细胞小鼠成纤维细胞、猴CVl细 胞和人淋巴细胞等)等进行表达并纯化。本实用新型中，试剂垫在制作过程中预先加入组成缓冲液的各种组分，如 Tween-20和0. OlM的磷酸盐制成PBST缓冲液。实际使用中，只需要向第一开口加入适量的 水与试剂垫上即可，不需要在实验过程中再配制缓冲液。本实用新型提及的“待测样品”、“血样”、或“试样”来自于“受试者”的血液、尿液、 分泌物、组织液、体外培养液或组织等。本实用新型提及的“病患”、“病人”和“受试者”指人、野生动物和家畜 (Livestock)。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而 人工饲养的动物，如狗、鼠、仓鼠、猪、兔、奶牛、水牛、公牛、绵羊、山羊、鹅和鸡等。给予诊断 的“患者”优先选择哺乳动物，尤其是人。本实用新型技术方案实现的有益效果本实用新型提供的预处理型侧向层析检测组件，包括检测部件、支撑部件和过滤 部件。样品经过滤部件垂直过滤后于检测部件的层析垫上，将试液加入检测部件后按侧向 层析的方式完成检测。垂直过滤方式不仅避免了血红细胞对检测结果的干扰，提高了检测 结果的准确性。过滤后的样品需要在试液的驱动下完成侧向检测，从而保证了样品分子能 在毛细作用下均勻迁移，提高了检测的重现性和平行性。本实用新型提供的检测组件结构简单，易于操作，检测所需的样品微量，检测过程 一次性完成，还有效避免了样品过滤后污染情况的发生。
图1为本实用新型检测组件一实施例的结构示意图；图2为本实用新型检测部件一实施例的结构示意图；图3为本实用新型检测组件另一实施例的结构示意图；图4为本实用新型过滤部件另一实施例的结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图详细描述本实用新型的技术方案。本实用新型实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本实用新型进行了详细说明，本领 域的普通技术人员应当理解，可以对实用新型的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱 离本实用新型技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本实用新型的权利要求范围中。图1为本实用新型预处理型侧向层析检测组件一实施例的结构示意图，图2为本 实用新型检测部件一实施例的结构示意图。如图1和图2所示，该检测组件，包括支撑部件 1、检测部件2和过滤部件3。支撑部件1包括底座11和盖板12。盖板12上设有三个开口，分别为第一开口 121、第二开口 122和第三开口 123。检测部件2的材质与侧向层析的试纸条所用的材质一致。本实施例中，试剂垫21 和吸收垫24设于检测部件2的两端，标记垫22与试剂垫21连接，层析垫23两端分别与 标记垫22和吸收垫24连接，从而组成检测部件2。本实施例中，试剂垫21预先加入含有 Tween-20的磷酸缓冲液(pH7. 2_pH7. 5)的干试纸。在标记垫22上使用标记物标记的抗体 或抗原。按侧向层析的相同方式，在层析垫23上划出T线231和C线232。检测部件2置于底座11上，盖板12盖于检测部件2上。第一开口 121之下为试剂 垫21，过滤部件3设置于第二开口 122，第三开口 123之下为层析垫23，通过第三开口 123 能直接观察到T线231和C线232。从患者采集到的待测样品直接施加于过滤部件3后，在重力作用下，过滤部件3对 样品进行垂直过滤，过滤后的样品转移到下层的层析垫23，并被层析垫23吸附。此时经过 滤的样品不发生侧向层析，而固定于层析垫23上。之后将适量的去离子水施加于试剂垫21 上，去离子水溶解试剂垫21中的Tween-20和磷酸缓冲盐，而成pH7. 2_pH7. 5的PBST缓冲 液，并在毛细作用下进行侧向层析，先通过标记垫22，其中的标记抗体或抗原在缓冲液的带 动下，于层析垫23处，与过滤样品中的目标分子结合，最后被固定于层析垫23上的T线231 和C线232捕获。若标记垫22上的标记物为胶体金时，侧向层析完成后，可于第三开口 123 观察T线231和C线232，以确定检测结果。若标记垫22上的标记物为磁性纳米颗粒时，侧 向层析完成后，在检测仪器的协助下于第三开口 123检测T线231和C线232，以确定检测 结果。整个检测过程操作简单，检测结果易于判断。使用本实用新型预处理型侧向层析检测组件，仅需要若干微升的样品加于过滤部 件即可，采样微量，对病患影响小。图3为本实用新型预处理型侧向层析检测组件另一实施例的结构示意图，图4为 本实用新型过滤部件另一实施例的结构示意图。如图3和图4所示，该检测组件，包括支撑 部件1、检测部件2和过滤部件3。检测部件2的结构如图2所示。支撑部件1包括底座11和盖板12。盖板12上设有三个开口，分别为第一开口 121、第二开口 122和第三开口 123。第一开口 121之下为试剂垫21，第二开口 122之下为 层析垫23，第三开口 123之下为层析垫23的T线231和C线232。过滤部件3单独设置于支板4上。检测样品时，将支板4盖于盖板12上，使过滤 部件3与第二开口 122配合，过滤之后可以取走支板4。之后按上述方式进行以完成侧向层 析检测。
权利要求一种预处理型侧向层析检测组件，其特征在于包括支撑部件，包括底座和盖板；盖板，包括第一开口、第二开口和第三开口；检测部件，包括试剂垫、标记垫、层析垫和吸收垫；所述试剂垫和所述吸收垫设于所述检测部件的两端，所述标记垫与所述试剂垫连接，所述层析垫两端分别与所述标记垫和所述吸收垫连接；过滤部件，与所述第二开口配合；所述检测部件置于所述底座上，所述盖板盖于所述检测部件。
2.根据权利要求1所述的预处理型侧向层析检测组件，其特征在于所述试剂垫置于所 述第一开口下方。
3.根据权利要求1所述的预处理型侧向层析检测组件，其特征在于所述层析垫置于所 述第二开口下方。
4.根据权利要求1所述的预处理型侧向层析检测组件，其特征在于所述层析垫还包括 T线区和C线区，所述T线区和所述C线区位于所述第三开口下方。
专利摘要一种预处理型侧向层析检测组件，包括检测部件、支撑部件和过滤部件。样品经过滤部件垂直过滤后于检测部件的层析垫上，将试液加入检测部件后按侧向层析的方式完成检测。垂直过滤方式不仅避免了血红细胞对检测结果的干扰，提高了检测结果的准确性。过滤后的样品需要在试液的驱动下完成侧向检测，从而保证了样品分子能在毛细作用下均匀迁移，提高了检测的重现性和平行性。本实用新型提供的检测组件结构简单，易于操作，检测所需的样品微量，检测过程一次性完成，还有效避免了样品过滤后污染情况的发生。
文档编号G01N33/558GK201673153SQ20102029582
公开日2010年12月15日 申请日期2010年8月18日 优先权日2010年8月18日
发明者崔大祥, 王贤松 申请人:上海交通大学;苏州康立达纳米生物工程有限公司