专利名称：一种检测钟花报春花质量的方法
技术领域：
本 发明涉及一种检测钟花报春花质量的方法，具体地，是采用HPLC指纹图谱进行检测的方法。
背景技术：
钟花报春(Primula sikkmensis Hook)属于报春花科报春花属植物，是一种常见的藏药材，以花入药，是藏药“相相直吾”其中的一种原植物。花黄色，钟状，聚生于花葶顶端，主产于西藏东部及南部、青海东南部、四川西部、云南西北部；生于海拔3750-4500米的林缘湿草地、水沟边；分布于尼泊尔、锡金、不丹、缅甸。藏族民间用全草作止泻药，其疗效独特显著。主要用于清热，小儿热痢、小儿肺炎等疾病，疗效确切，经几个藏医院的临床医生实践证明，在治疗小儿热痢方面，有效率达到 80 %，在甘孜藏族地区，藏民们也广泛使用，且资源十分丰富。虽然我国的报春花资源极其丰富，但已进行研究的种类很少，王凤英等应用简单序列重复区间(ISSR，Inter-simple sequence repeat)分子标记对喜马拉雅-横断山区钟花报春居群遗传多样性及遗传分化进行了研究，研究结果表明喜马拉雅-横断山区钟花报春的13个居群具有很高的遗传多样性，并且居群间的分化也很大；朱惠芬等应用ITS序列分析探讨了偏花报春是属于灯台报春组还是钟花报春组。在对钟花报春花的研究中，彭腾等从钟花报春花中分离鉴定了 7个化合物(彭腾， 等，钟花报春花的化学成分研究，中药材，2008年31卷1期.)，邱建平等利用正交试验研究了从钟花报春花中提取总黄酮的优选工艺(邱建平，等，正交设计优化钟花报春花总黄酮提取工艺，成都医学院学报，2009年4卷4期)。目前，尚未见对钟花报春花的质量检测的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效、灵敏的检测钟花报春花质量的方法。本发明提供了一种检测钟花报春花质量的方法，方法如下(1)钟花报春花样品的测试溶液制备精密称取钟花报春药材粗粉，加入15-30倍w/v的甲醇，静置10-50min，超声提取 20-60min,过滤，滤液定容至0. 8-1. 2g生药/25ml，再取定容液，稀释至原浓度的1/6，微滤， 滤液作为样品溶液；(2)对照品溶液制备用甲醇或流动相溶液溶解2-苯基色原酮对照品，微滤，滤液作为对照品溶液；(3)色谱条件色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；紫外检测器，检测波长为292士 IOnm ；流动相为乙腈-水系统，梯度洗脱，梯度条件如下
权利要求
1.一种检测钟花报春花质量的方法，其特征在于方法如下(1)钟花报春花的样品溶液制备精密称取钟花报春药材粗粉，加入15-30倍w/v的甲醇，静置10-50min，超声提取 20-60min,过滤，滤液定容至0. 8-1. 2g生药/25ml，再取定容液，稀释至原浓度的1/6，微滤， 滤液作为样品溶液；(2)对照品溶液制备用甲醇或流动相溶液溶解2-苯基色原酮对照品，微滤，滤液作为对照品溶液；(3)色谱条件色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；紫外检测器，检测波长为292士 IOnm ；流动相为乙腈-水系统，梯度洗脱，梯度条件如下
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(1)中，甲醇用量为20倍w/v； 静置30min，超声提取40min ；滤液定容至Ig生药/25ml。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于步骤(1)的具体操作如下精密称取钟花报春花药材粗粉lg，加入甲醇20ml，静置30min，超声提取40min，过滤，滤液冷却至室温后加甲醇定容至25ml，取定容液，稀释至原浓度的1/6，微滤，滤液作为样品溶液。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的检测方法，其特征在于所述微滤是采用0.45 μ m 微孔滤膜滤过。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(3)中，色谱柱为Diamonsil C18 柱，250mmX 4. 6mm, 5 μ m。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤⑶中，检测波长为292nm。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(3)中，柱温为25°C。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(4)中，精密吸取样品溶液 20 μ 1，注入高效液相色谱仪，检测时间为45min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(5)中，标准指纹图谱特征如下有8个共有特征峰；以2-苯基色原酮的色谱峰的保留时间和峰面积为1计算其他峰的相对保留时间和相对峰面积，1号峰的相对保留时间为0. 1848 士 0. 0104， 相对峰面积为0. 0228 士 0. 00412 ；2号峰的相对保留时间为0. 3353 士 0. 00291， 相对峰面积为0. 0859 士 0. 0173 ；3号峰的相对保留时间为0. 4062 士 0. 00583，相对峰面积为0. 0182士0. 0073 ；4号峰的相对保留时间为0. 8345士0. 0020,相对峰面积为0. 1412 士 0. 0205 ；5号峰的相对保留时间为0. 8940 士 0. 00114，相对峰面积为0. 1831 士 0. 0261 ；6号峰的相对保留时间为1. 0341 士 0. 00122，相对峰面积为0. 0325士0. 0078 ；7号峰的相对保留时间为1. 2094士0. 00310,相对峰面积为 0. 0389士0. 0105 ；S峰的相对保留时间为1，相对峰面积为1。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于所述标准指纹图谱如图2所示。
全文摘要
本发明公开了一种检测钟花报春花质量的方法，采用HPLC指纹图谱技术，色谱图中特征峰分离度良好，且相似度高，能够有效用于对钟花报春花药材的质量控制。
文档编号G01N30/02GK102331459SQ20111016254
公开日2012年1月25日 申请日期2011年6月16日 优先权日2010年12月20日
发明者彭腾, 李鸿翔, 贺钢民, 邓赟, 邱建平, 陈裕 申请人:成都中医药大学