专利名称：一种妇炎康丸的检测方法
技术领域：
本发明属于中药检测领域，具体涉及一种妇炎康丸的检测方法，更具体地说是检测妇炎康丸中苦参碱和氧化苦参碱的总量。
背景技术：
妇炎康丸以丹参、赤芍、当归、延胡索、川楝子、香附、三棱、莪术、山药、芡实、苦参、 黄柏、土茯苓等13味中药组成，经过中药材炮制、提取、浓缩、干燥、粉碎、加入炼蜜制成水蜜丸。为纯中药制剂。方中丹参、赤芍、当归活血化瘀，为君药。延胡索、川楝子、香附合用行气解郁止痛，加之三棱、莪术增强行气止痛兼软坚散结，山药、芡实滋肾止带，苦参、黄柏清热燥湿，土茯苓解毒利湿，诸药配合可达到活血化瘀，清热解毒、软坚散结、止痛利湿的目的，能消除炎症，解除病人腰腹疼痛，减少白带，有治愈慢性盆腔炎等妇科炎症的疗效。具有活血化瘀，坚散结，清热解毒，消炎镇痛的功能。用于慢性附件炎、盆腔炎、阴道炎、膀胱炎、 慢性阑尾炎、尿路感染。苦参本品为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。性味苦，寒。归经归心、肝、胃、大肠、膀胱经。功能主治清热燥湿，杀虫，利尿。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒， 湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎。化学成份苦参中含有大量的生物碱，其中含量最高的是苦参碱和氧化苦参碱，加总占苦参药材根干总重的2% (其中大部分以氧化苦参碱的形式存在)，同时还有其他的相近的生物碱其中主要是槐果碱(Sophocarpine，C15H22N20)，还含有少量白勺槐酉享 sophoranol,槐月安 sophoramine, 1 PjS M (Sophoridine) allomatrine,异苦参 1 (Iosmatrine)等其他生物碱成分。药理作用①利尿作用苦参煎剂及其中所含之苦参碱给兔口服或注射，皆可产生利尿作用，尿量增加前即有盐分排出之增多。但实验中所用家兔之数目较少，又未叙述饮水控制之情况，因而有人认为需进一步研究。②抗病原体作用煎剂在试管中，高浓度(1 100)对结核杆菌有抑制作用。煎剂(8% )、水浸剂 (1 ；3)在体外对某些常见的皮肤真菌有不同程度的抑制作用。醇浸膏在体外尚有抗滴虫作用，强度弱于黄连，而与蛇床子相近。③其他作用苦参碱注射于家兔，发现中枢神经麻痹现象，同时发生痉挛，终则呼吸停止而死。 注射于青蛙，初呈兴奋，继则麻痹，呼吸变为缓慢而不规则，最后发生痉挛，以致呼吸停止而死；其痉挛的发作，恐系起因于脊髓反射的亢进。对家兔的最小致死量为0. 4克/公斤。
从上述文献报道表明，苦参及其有效成分生物碱的药理作用与妇炎康丸的临床作用是相一致的。严格控制妇炎康丸中苦参有效成分的含量，是保证产品质量的关键。在现有国家食品药品监督管理局妇炎康丸试行标准中〔WS-10394-(ZD-0394)-2002〕，采用薄层色谱法测定苦参碱的含量，方法误差较大，含量结果不准确。另外苦参中的生物碱含量最高的是苦参碱和氧化苦参碱，占苦参药材根干总重的2%，其中大部分以氧化苦参碱的形式存在，只测定苦参碱，不能准确说明苦参生物碱的含量。
发明内容
本发明提供一种妇炎康丸的检测方法，以解决只测定苦参碱，不能准确说明苦参生物碱的含量，导致含量结果不准确的问题。采用高效液相色谱法测定妇炎康丸苦参碱和氧化苦参碱的总量。本发明包括下列步骤(a)供试品溶液制备取本品50g，研成细粉，取5 15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，浓氨试液0. 5 3. 0ml，密塞，称定重量，放置M小时，超声处理30 90分钟，功率250W，频率40kHz，放置室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，精密吸取续滤液IOml蒸干，残渣用乙腈无水乙醇=80 20混合溶液适量分次使溶解并移至IOml量瓶中，加乙腈无水乙醇=80 20、混合溶液稀释至刻度，摇勻，即得；(b)色谱条件色谱柱为氨基键合硅胶柱4. 6mmX 250mm ；检测器为紫外检测器；乙腈无水乙醇3%磷酸溶液=70 90 15 5 15 5为流动相；检测波长为220nm， 理论塔板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2500 ；(c)对照品溶液制备取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈-无水乙醇=80 20混合溶液溶解，分别制成每Iml含苦参碱0. 05 0. 15mg,含氧化苦参碱0. 1 0. 3mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 15ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。本发明的一种实施方式是，包括如下步骤(a)供试品溶液制备取本品50g，研成细粉，取10g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入三氯甲烷50ml，浓氨试液Iml，密塞，称定重量，放置M小时，超声处理60分钟，功率250W，频率40kHz，放置室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，精密吸取续滤液IOml蒸干，残渣用乙腈无水乙醇=80 20混合溶液适量分次使溶解并移至 IOml量瓶中，加乙腈无水乙醇=80 20混合溶液稀释至刻度，摇勻，即得；(b)色谱条件色谱柱为氨基键合硅胶柱4. 6mmX 250mm ；检测器为紫外检测器；乙腈无水乙醇3%磷酸溶液=80 10 10为流动相；检测波长为220nm，理论塔板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2500 ；(c)对照品溶液制备取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈无水乙醇=80 20混合溶液溶解，分别制成每Iml含苦参碱O.lmg，含氧化苦参碱 0. 2mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。本发明方法学研究表明，采用高效液相色谱法测定本品中苦参碱和氧化苦参碱的总量，具有较好重现性、稳定性和精密度。本发明是通过大量试验所得到的切实可行的方法，本方法具有操作简便、稳定、精密度高、重现性好、易掌握的特点，达到了有效控制药物质量的发明目的。
具体实施例方式对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，但只要使用本发明所述的检测方法，均在本发明的保护范围之内。实验例妇炎康丸中苦参碱和氧化苦参碱的总量测定方法的建立1.方法1. 1仪器与试剂LC-10A高效液相色谱仪；紫外检测器；N2000工作站；无水乙醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。1. 2色谱条件色谱柱氨基键合硅胶柱(4. 6mmX250mm)；乙腈无水乙醇3%磷酸溶液=80 10 10为流动相；检测波长为220nm，理论塔板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2000。2.对照品的来源及纯度苦参碱与氧化苦参碱对照品，购自中国药品生物制品检定所，采用反相高效液相色谱法归一化法标定，色谱条件同上，进样量20μ 1，纯度为苦参碱 99. 34 %，氧化苦参碱99. 42 %。3.方法学考察3. 1流动相的选择比较流动相(1)乙腈无水乙醇=75 25 ； (2)乙腈无水乙醇=80 20 ； (3)乙腈无水乙醇3%磷酸溶液=80 10 20 ； (4)乙腈无水乙醇3%磷酸溶液=80 10 10，结果流动相(3)、(4)中苦参碱和氧化苦参碱峰达到基线分离，分离度很好。但考虑到磷酸盐含的越多越污染色谱柱，故选用乙腈无水乙醇3% 磷酸溶液=80 10 10。3. 2测定波长的选择经测定苦参碱与氧化苦参碱的紫外吸收光谱，苦参碱最大吸收波长为212nm，氧化苦参碱最大吸收波长为206nm，属于末端吸收，在此波长处，基线严重漂移，参考2010版药典二部188页苦参的含量测定条件选择220nm作为检测波长。3. 3系统适用性试验根据上述确定的条件，得到苦参碱对照品及样品的色谱图，计算其理论塔板数N = 2500。3. 4供试品提取条件的选择试验参考2010年版药典苦参的含量测定的样品溶解方法，分别采用三氯甲烷50ml，浓氨试液Iml溶解，浓氨试液^iil、:3ml、0. 5ml，结果见表1。表1不同溶解方法的样品含量测定
权利要求
1.一种妇炎康丸的检测方法，其特征在于包括下列步骤(a)供试品溶液制备取本品50g，研成细粉，取5 15g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入三氯甲烷50ml，浓氨试液0. 5 3. 0ml，密塞，称定重量，放置M小时，超声处理30 90分钟，功率250W，频率40kHz，放置室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，精密吸取续滤液IOml蒸干，残渣用乙腈无水乙醇=80 20混合溶液适量分次使溶解并移至IOml量瓶中，加乙腈无水乙醇=80 20混合溶液稀释至刻度，摇勻，即得；(b)色谱条件色谱柱为氨基键合硅胶柱4.6mmX 250mm ；检测器为紫外检测器；乙腈 无水乙醇3%磷酸溶液=70 90 15^5 15^5为流动相；检测波长为220nm，理论塔板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2500 ；(c)对照品溶液制备取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈 无水乙醇=80 20混合溶液溶解，分别制成每Iml含苦参碱0. 05、. 15mg,含氧化苦参碱 0. Γ0. 3mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 15ul，注入液相色谱仪， 测定，按外标法计算，即得。
2.如权利要求1所述的妇炎康丸的检测方法，其特征包括如下步骤(a)供试品溶液制备取本品50g，研成细粉，取10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，浓氨试液1ml，密塞，称定重量，放置M小时，超声处理60分钟，功率 250W,频率40kHz，放置室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过，精密吸取续滤液IOml蒸干，残渣用乙腈无水乙醇=80 20混合溶液适量分次使溶解并移至IOml 量瓶中，加乙腈无水乙醇=80 20混合溶液稀释至刻度，摇勻，即得；(b)色谱条件色谱柱为氨基键合硅胶柱4.6mmX 250mm ；检测器为紫外检测器；乙腈 无水乙醇3%磷酸溶液=80 10 :10为流动相；检测波长为220nm，理论塔板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2500 ；(c)对照品溶液制备取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈 无水乙醇=80 20混合溶液溶解，分别制成每Iml含苦参碱0. Img,含氧化苦参碱0. 2mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。
全文摘要
本发明涉及一种妇炎康丸的检测方法，属于中药检测领域。包括下列步骤供试品溶液制备色谱条件色谱柱为氨基键合硅胶柱，检测器为紫外检测器，乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液为流动相，检测波长为220nm，测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。这种方法具有操作简便、稳定、精密度高、重现性好、易掌握的特点，达到了有效控制药物质量的发明目的。
文档编号G01N30/02GK102359991SQ20111021648
公开日2012年2月22日 申请日期2011年7月30日 优先权日2011年7月30日
发明者于翠霞, 王旭佳, 蔡蕾 申请人:吉林省中研药业有限公司