专利名称：一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法
技术领域：
本发明涉及血液分析仪制剂领域，特别涉及一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法。
背景技术：
血液分析仪标准物质主要用于临床血细胞分析中的质量控制以及血液分析仪的校正， 它比质控品、校准品更加精确、稳定。目前国内血液分析仪标准物质很少，质控品和校准品比较常见，常见制备方法有完全采用新鲜人血制备；或用新鲜人血中红细胞、血小板，用禽类血细胞模拟白细胞；或用蹄科动物血中红细胞、血小板模拟人红细胞、血小板，用禽类血细胞模拟白细胞。由于国内对人血的特殊政策，血源问题急待解决；使用蹄科动物血小板模拟人血小板提取困难，且容易凝结；使用禽类血细胞模拟白细胞，在实际应用中，直方图显示与临床标本明显不同，容易造成误导；标准物质稳定性差，一般3-6个月就失效了，开瓶后一周时间会失效。
发明内容
为了解决以上血液分析仪标准物质制备中存在的提取困难、不精确和稳定性差的问题，本发明提供了一种操作简便、受外界干扰因素少、直方图显示与临床标本接近的三分类血液分析仪用标准物质的制备方法。一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法，包括以下步骤
(1)收集猪的血液，加入占血液重量4.0%的枸橼酸钠和10%的乙二胺四乙酸二钾进行抗凝处理；
(2)红细胞提取
血液先用孔径为2mm的过滤筛过滤，过滤后的血液用冷冻离心机离心，离心机转速为 4000r/min，离心时间5分钟，离心时温度上限25°C，温度下限15°C，离心后用负压吸引器把上层血浆及白细胞血小板吸走，保留下层占血液体积总量40%的红细胞；
(3)红细胞固定
把300ml固定液和700ml红细胞加入烧杯中，37°C水浴1. 5-2. 0小时；用负压吸引器吸走上层血浆，下层红细胞放入离心瓶中并加满基础液，混勻离心，用吸引器吸走上层血浆， 把下层红细胞与基础液按体积比1:4比例装入瓶中，静置M小时，离心，吸去上层液体，加入基础液使总量达到6000ml，过滤装大瓶；
(4)标准物质配制
按照血液中血小板的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶
中，
按照血液中淋巴细胞的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
按照血液中粒细胞颗粒的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，向大瓶中加入8mL硫酸庆大霉素，摇勻； (5)对标准物质定值；
所述基础液包含以下组分氯化钠3.8-5. 8g/L，胱氨酸1.0-1. 5g/L，柠檬酸钠 1. 2-2. Og/L,柠檬酸 0. 5-1. Og/L,磷酸二氢钠 0. 1-0. 5g/L,磷酸一氢钠 0. 1-0. 5g/L，海藻糖10-30g/L，甘露醇10-20g/L，丙三醇5-lOg/L，腺嘌吟0. 1-0. 5g/L,三磷酸腺苷2_4g/L， 二硫氰基甲烷l_2g/L，其余为水；
所述固定液包含以下组分甲醇2-3g/L，丙三醇2-4g/L，丙烯醛0. 06-0. lg/L,聚合度为8-10的多聚甲醛0. 5-1. Og/L,蔗糖l-2g/L，戊二醛l_2g/L，叠氮钠0. 8-1. 2g/L，其余为水。步骤(1)中收集猪血液时，收集的为中段血液。本发明采用蹄科动物血红细胞模拟人红细胞，经反复验证，选中一种蹄科动物猪血细胞在形态上可以模拟人红细胞，而且来源广泛，提取方便。采用人工乳胶颗粒模拟血小板。三分类血液分析仪都是根据细胞体积差异来鉴别红细胞以及血小板，通常红细胞体积区间在50-150fl，血小板体积区间在2-30fl，因此采用体积区间在2-30fl内的乳胶颗粒完全可以替代人血小板在三分类血液分析仪上检测。 并且参照人血小板体积分布情况按比例配置乳胶颗粒体积分布情况，这样上机测试得到的血小板直方图可以媲美人血小板直方图形态。采用人工乳胶颗粒模拟人白细胞。三分类仪器白细胞检测原理是在血液中加入溶血素，这样白细胞和红细胞的细胞膜都被破坏，由于红细胞没细胞核，白细胞有细胞核， 这样通过检测白细胞细胞核数量和体积差异便可以把白细胞的数量和三种分类检测出来。 本发明采用跟白细胞细胞核体积接近的人工乳胶颗粒代替人白细胞，并按照人白细胞核体积分布情况同比设定，这样上机测试得到的白细胞直方图可以媲美人白细胞直方图，通过调节乳胶颗粒的浓度可以任意设定白细胞的总数。本发明的有益效果是红细胞来源广泛，提取方便，受外界干扰因素少；人工乳胶模拟的白细胞和血小板直方图可以媲美人白细胞、血小板直方图形态，使检测更精确；本发明的三分类血液分析仪用标准物质均勻性、稳定性均教现使用的标准物质好。
具体实施例方式实施例1
一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法，包括以下步骤
(1)收集猪的血液，加入占血液重量4.0%的枸橼酸钠和10%的乙二胺四乙酸二钾进行抗凝处理；
(2)红细胞提取
经过抗凝处理的5000mL血液先用孔径为2mm的过滤筛过滤，过滤后的血液用冷冻离心机离心，离心机转速为4000r/min，离心时间5分钟，离心时温度上限25°C，温度下限15°C， 离心后用负压吸引器把上层血浆及白细胞血小板吸走，保留下层占血液体积总量40%的红细胞；
(3)红细胞固定
把300mL固定液和700mL红细胞加入烧杯中，37°C水浴1. 5小时；用负压吸引器吸走上
4层血浆，下层红细胞放入IOOOmL离心瓶中并加满基础液，混勻离心，用吸引器吸走上层血浆，把下层红细胞与基础液按体积比1 4比例装入瓶中，静置M小时，离心，吸去上层液体， 加入基础液使总量达到6000ml，过滤装大瓶；
固定液包含以下组分甲醇2g/L，丙三醇2g/L，丙烯醛0.06g/L，聚合度8的多聚甲醛0. 5g/L,蔗糖lg/L,戊二醛lg/L,叠氮钠0. 8g/L，其余为水。基础液包含以下组分氯化钠3. 8g/L,胱氨酸1. Og/L,柠檬酸钠1. 2g/L,柠檬酸
0.5g/L,磷酸二氢钠0. lg/L,磷酸一氢钠0. lg/L，海藻糖10g/L，甘露醇10g/L,丙三醇5g/ L,腺嘌吟0. lg/L，三磷酸腺苷2g/L，二硫氰基甲烷lg/L，其余为水。(4)标准物质配制
按照正常人血液中血小板的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
按照正常人血液中淋巴细胞的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
按照正常人血液中粒细胞颗粒的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
向大瓶中加入8mL硫酸庆大霉素，摇勻； (5)对标准物质定值。
收集猪血液时，优选收集中段血液，因为中段的血液相对于刚开始放出来的和最后放出来的血，更加均勻。实施例2
一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法，包括以下步骤
(1)收集猪的血液，加入占血液重量4.0%的枸橼酸钠和10%的乙二胺四乙酸二钾进行抗凝处理；
(2)红细胞提取
经过抗凝处理的5000mL血液先用孔径为2mm的过滤筛过滤，过滤后的血液用冷冻离心机离心，离心机转速为4000r/min，离心时间5分钟，离心时温度上限25°C，温度下限15°C， 离心后用负压吸引器把上层血浆及白细胞血小板吸走，保留下层占血液体积总量40%的红细胞；
(3)红细胞固定
把300mL固定液和700mL红细胞加入烧杯中，37°C水浴2. 0小时；用负压吸引器吸走上层血浆，下层红细胞放入IOOOmL离心瓶中并加满基础液，混勻离心，用吸引器吸走上层血浆，把下层红细胞与基础液按体积比1 4比例装入瓶中，静置M小时，离心，吸去上层液体， 加入基础液使总量达到6000ml，过滤装大瓶；
固定液包含以下组分甲醇3g/L，丙三醇4g/L，丙烯醛0. lg/L,聚合度10的多聚甲醛1. Og/L,蔗糖2g/L,戊二醛2g/L,叠氮钠1. 2g/L，其余为水。基础液包含以下组分氯化钠5. 8g/L,胱氨酸1. 5g/L,柠檬酸钠2. Og/L,柠檬酸
1.0g/L,磷酸二氢钠0. 5g/L,磷酸一氢钠0. 5g/L，海藻糖30g/L，甘露醇20g/L，丙三醇IOg/ L,腺嘌吟0.5g/L，三磷酸腺苷4g/L，二硫氰基甲烷2g/L，其余为水；(4)标准物质配制
按照正常人血液中血小板的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
按照正常人血液中淋巴细胞的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
按照正常人血液中粒细胞颗粒的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，
向大瓶中加入8mL硫酸庆大霉素，摇勻；
(5)对标准物质定值。收集猪血液时，优选收集中段血液，因为中段的血液相对于刚开始放出来的和最后放出来的血，更加均勻。检验结果 一、均勻性
按标准物质规程，对标准物质取样15瓶测量，红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板、红细胞压积均勻性检验数据见表1 表5。表1红细胞均勻性数据表2白细胞均勻性数据
权利要求
1.一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)收集猪的血液，加入占血液重量4.0%的枸橼酸钠和10%的乙二胺四乙酸二钾进行抗凝处理；(2)红细胞提取血液先用孔径为2mm的过滤筛过滤，过滤后的血液用冷冻离心机离心，离心机转速为 4000r/min，离心时间5分钟，离心时温度上限25°C，温度下限15°C，离心后用负压吸引器把上层血浆及白细胞血小板吸走，保留下层占血液体积总量40%的红细胞；(3)红细胞固定把300ml固定液和700ml红细胞加入烧杯中，37°C水浴1. 5-2. 0小时；用负压吸引器吸走上层血浆，下层红细胞放入离心瓶中并加满基础液，混勻离心，用吸引器吸走上层血浆， 把下层红细胞与基础液按体积比1:4比例装入瓶中，静置M小时，离心，吸去上层液体，加入基础液使总量达到6000ml，过滤装大瓶；(4)标准物质配制按照血液中血小板的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，按照血液中淋巴细胞的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，按照血液中粒细胞颗粒的体积分布比例同比例选取人工乳胶颗粒，加入装有红细胞的大瓶中，向大瓶中加入8mL硫酸庆大霉素，摇勻；(5)对标准物质定值；所述基础液包含以下组分氯化钠3.8-5. 8g/L，胱氨酸1.0-1. 5g/L，柠檬酸钠 1. 2-2. Og/L,柠檬酸 0. 5-1. Og/L,磷酸二氢钠 0. 1-0. 5g/L,磷酸一氢钠 0. 1-0. 5g/L，海藻糖10-30g/L，甘露醇10-20g/L，丙三醇5-lOg/L，腺嘌吟0. 1-0. 5g/L,三磷酸腺苷2_4g/L， 二硫氰基甲烷l_2g/L，其余为水；所述固定液包含以下组分甲醇2-3g/L，丙三醇2-4g/L，丙烯醛0. 06-0. lg/L,聚合度为8-10的多聚甲醛0. 5-1. Og/L,蔗糖l-2g/L，戊二醛l_2g/L，叠氮钠0. 8-1. 2g/L，其余为水。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中收集猪血液时，收集的为中段血液。
全文摘要
本发明涉及血液分析仪制剂领域一种三分类血液分析仪用标准物质的制备方法，包括以下步骤收集猪的血液抗凝处理；红细胞提取；红细胞固定；标准物质配制，用人工乳胶颗粒代替血小板、淋巴细胞、粒细胞颗粒；对标准物质定值。所用基础液包含氯化钠、胱氨酸、柠檬酸钠、柠檬酸、磷酸二氢钠、磷酸一氢钠、海藻糖、甘露醇、丙三醇、腺嘌吟、三磷酸腺苷、二硫氰基甲烷；固定液包含甲醇、丙三醇、丙烯醛、多聚甲醛、蔗糖、戊二醛、叠氮钠。红细胞来源广泛，提取方便，受外界干扰因素少；人工乳胶颗粒模拟的白细胞和血小板直方图可以媲美人白细胞、血小板直方图，检测更精确；均匀性、稳定性均较现使用的标准物质好。
文档编号G01N33/48GK102419365SQ20111024323
公开日2012年4月18日 申请日期2011年8月24日 优先权日2011年8月24日
发明者王国锋, 王春莲, 韩作湘 申请人:山东兰桥医学科技有限公司