专利名称：一种检测血液中金黄色葡萄球菌感染的试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种试剂盒，尤其涉及一种量子点免疫标记技术快速检测血液中金黄色葡萄球菌感染的试剂盒。
背景技术：
金黄色葡萄球菌是血培养中常见的病原菌，其感染症状严重，特别是凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌常导致急性中毒症状，极易导致死亡。目前标准的细菌鉴定方法还是传统的微生物培养鉴定方法，但此法好时长，整个鉴定过程需M 48h。新的快速检测血培养中病原菌的方法也不断出现，主要是基于分子诊断的聚合酶链反应(PCR)方法和荧光原位杂交(FISH)。但PCR方法易污染，假阳性率高。FISH方法由于荧光染料易淬灭，需暗室避光操作。
实用新型内容本实用新型为了克服现有技术的不足，而提供的一种结构简单，操作过程快速，利用量子点纳米荧光物质取代传统的荧光染料，整过操作过程无需避光的量子点免疫标记技术快速检测血液中金黄色葡萄球菌感染的试剂盒。本实用新型采用的技术方案它包括盒体，盒体上设有抗体稀释液仓、金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体仓、生物素化的鼠源性二抗仓、量子点稀释液仓、封闭液仓、量子点标记的链酶亲和素复合物仓、 洗液仓、定位载玻片仓和盖玻片仓，上述仓体内分别对应装有抗体稀释液、金黄色葡萄球菌 SPA单克隆抗体、生物素化的鼠源性二抗、量子点稀释液、封闭液、量子点标记的链酶亲和素复合物、洗液、定位载玻片和盖玻片，其特征在于所述定位载玻片上有对照区和检测区，在对照区和检测区分别固定有金黄色葡萄球菌对照品和表皮葡萄球菌对照品，定位载玻片外设有铝塑袋。本实用新型取得的技术效果1、本实用新型该结构简单，利用本实用新型可以在池内从血液标本中直接检测出金黄色葡萄球菌感染，且操作简单，整个过程无需避光。
图1是本检测试剂盒构造俯视图；图2是本检测试剂盒定位载玻片俯视图。其中，1-抗体稀释液仓、2-金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体仓、3-生物素化的鼠源性二抗仓、4-量子点稀释液仓、5-封闭液仓、6-量子点标记的链酶亲和素复合物仓、7-TBST 洗液仓、8-定位载玻片仓、9-盖玻片仓、10-盒体、11-对照区、12-检测区。
具体实施方式
[0011]
以下结合附图对本实用新型的实施方式做进一步的说明。参见图1-2，一种检测血液中金黄色葡萄球菌感染的试剂盒，它包括盒体10，盒体上设有抗体稀释液仓1、金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体仓2、生物素化的鼠源性二抗仓3、 量子点稀释液仓4、封闭液仓5、量子点标记的链酶亲和素复合物仓6、洗液仓7、定位载玻片仓8和盖玻片仓9，上述仓体内分别对应装有抗体稀释液、金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体、生物素化的鼠源性二抗、量子点稀释液、封闭液、量子点标记的链酶亲、素复合物、洗液、 定位载玻片和盖玻片，所述定位载玻片上有对照区11和检测区12，在对照区和检测区分别设有金黄色葡萄球菌对照品和表皮葡萄球菌对照品，定位载玻片外设有铝塑袋。如图2，定位载玻片分为对照区11和检测区12。检测区包括一个金黄色葡萄球菌阳性对照位和表皮葡萄球菌阴性对照位和六个样本检测位。可同时检测6份血液样本。每片定位载玻片均为密封袋独立包装，于一 20°C下冻存。本实用新型试剂盒检测过程如下1.报警的阳性血培养瓶，每份标本取样IOuL平铺在样品检测区的检测位，可同时检测六份样品，分别平铺在样品检测位的1、2、3、4、5、6号位，室温晾干后，火焰固定；2.固定后再滴加封闭缓冲液，载玻片上每个位加两滴约30uL，于37°C湿盒孵育 30min ；3.载玻片上检测区每个位点均滴加抗PSA单克隆抗体两滴约30uL，对照区以抗体缓冲液替代一抗，每个位两滴，于37°C孵育Ih ；4.孵育后TBST洗液漂洗3min/次3次，滴加封闭缓冲液，每个检测位两滴，于 37°C湿盒孵育IOmin ；5.封闭液封闭后滴加生物素化羊抗鼠IgG，于37°C湿盒孵育30min ；6. TBST洗液漂洗3min/次3次，滴加封闭缓冲液，检测区和对照区每个位均两滴， 于37°C湿盒孵育IOmin ；7.最后滴加量子点缓冲液稀释的QDs-SA ( 1 :300倍稀释)37°C湿盒孵育10 min ；8. TBST洗液漂洗3 min/次3次，滴加50%甘油封片，上荧光显微镜用不同波长激发Qd605，以检测区固定有金黄色葡萄球菌的位菌体呈现红色的荧光信号，固定有表皮葡萄球菌的位无红色的荧光信号，且抗体缓冲液代替一抗阴性对照位无红色的荧光信号。 此时检测位1、2、3、4、5、6上出现红色的荧光信号则为阳性。无红色的荧光信号为阴性。本实用新型的保护范围并不限于上述的实施例，显然，本领域的技术人员可以对本实用新型进行各种改动和变形而不脱离本实用新型的范围和精神。倘若这些改动和变形属于本实用新型权利要求及其等同技术的范围内，则本实用新型的意图也包含这些改动和变形在内。
权利要求1. 一种检测血液中金黄色葡萄球菌感染的试剂盒，它包括盒体(10)，盒体上设有抗体稀释液仓(1)、金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体仓(2)、生物素化的鼠源性二抗仓(3)、量子点稀释液仓(4)、封闭液仓(5)、量子点标记的链酶亲和素复合物仓(6)、洗液仓(7)、定位载玻片仓(8)和盖玻片仓(9)，上述仓体内分别对应装有抗体稀释液、金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体、生物素化的鼠源性二抗、量子点稀释液、封闭液、量子点标记的链酶亲、素复合物、洗液、定位载玻片和盖玻片，其特征在于所述定位载玻片上有对照区(11)和检测区 (12)，在对照区和检测区分别设有金黄色葡萄球菌对照品和表皮葡萄球菌对照品，定位载玻片外设有铝塑袋。
专利摘要本实用新型涉及一种检测血液中金黄色葡萄球菌感染的试剂盒，它包括盒体，盒体上设有分别装有抗体稀释液、金黄色葡萄球菌SPA单克隆抗体、生物素化的鼠源性二抗、量子点稀释液、封闭液、量子点标记的链酶亲和素复合物、洗液、定位载玻片和盖玻片，定位载玻片上有对照区和检测区，在对照区和检测区分别固定有金黄色葡萄球菌对照品和表皮葡萄球菌对照品，定位载玻片外设有铝塑袋。本实用新型结构简单，利用本实用新型可以在3h内从血液标本中直接检测出金黄色葡萄球菌感染，且操作简单，整个过程无需避光。
文档编号G01N33/577GK202002935SQ201120074669
公开日2011年10月5日 申请日期2011年3月21日 优先权日2011年3月21日
发明者吴青, 李艳, 汪明 申请人:武汉大学