用于妊娠的高血压疾病的生物标志物的制作方法

专利名称：用于妊娠的高血压疾病的生物标志物的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物标志物(生物标志)，特别是基于蛋白和/或肽的生物标志物，其可 用于受试者(主体，对象)的疾病和病症的诊断、预测、预后和/或监测，尤其是妊娠的高血压 疾病(高血压性障碍)，更特别是先兆子痫；以及涉及相关的方法、用途、试剂盒和装置。
背景技术：
在许多疾病和病症中，预防性和/或治疗性治疗的有利的结果强烈地与疾病或病 症的早期和/或准确预测、诊断、预后和/或监测相关。因此，持续需要用于疾病和病症的 早期和/或准确预测、诊断、预后和/或监测的另外的和优选改善的方式来指导治疗方法的 选择。
在妊娠期间发生的高血压疾病是全世界产妇的发病率和死亡率的主要原因，并且 还伴随增加的围产期死亡率。
在妊娠的高血压疾病中的显著位置属于先兆子痫(PE)，其在约5%至10%的 怀孕女性中会发生(Solomon & Seely 2006, Endocrinol Metab Clin North Am 35 (I) :157-71, vii)。
PE可以被描述为在以前血压正常怀孕女性中在20周妊娠以后的新发作高血压和 蛋白尿，其可以是轻度或严重的。患有轻度疾病的患者显示>140/90的血压和具有>300mg 蛋白的蛋白尿(在20周妊娠以后的24小时尿中注意到)，并且通常近期助产而没有显著的 复合病变。然而，约25%的PE倾向于是严重的，涉及中枢神经系统功能障碍的症状和体征、 肝细胞损伤、减少的尿输出和显著升高的血压(收缩压>160mmHg或舒张压>110mmHg)。严重 的PE通常发生在最后第二个和早期第三个三个月并且伴随增加的产妇和围产期发病率和 死亡率。
PE的严重并发症包括DHELLP综合征，其特征在于溶血、升高的肝酶和低血小板， 和2)子痫，其特征在于癫痫发作的发展。鉴于上述两种病症均是罕见的，它们与较差的预 后相关(Solomon & Seely 2006,在上文中)。
先兆子痫还与胎儿并发症如宫内发育迟缓(IUGR)和小孕龄(SGA)相关。
用于PE的仅有的疗法是婴儿和胎盘的分娩。超过37周的妊娠，可以保证分娩。在 小于34周的孕龄，高血压的治疗和严密的胎儿监视可以防止脑血管意外和延长妊娠，而没 有治愈潜在的疾病过程。还保证分娩，以发展严重的PE或子痫(Sibai & Barton 2007, Am J Obstet Gynecol 196 (6) :514. el_9)。
PE的病因学和病理生理学仍然很大程度上未解决并且它的诊断目前完全是基于 在疾病展开以后的临床标准(Roberts et al. 2003, Hypertension41 (3):37_45)。然而， 最近的数据表明，导致PE的事件可以早在第一三个月就潜在地开始和进展。
因而，对于妊娠的高血压疾病(尤其包括PE)的成功的治疗干预，可靠和早期预测 和/或诊断是关键的。因此，仍然是最重要的是，提供用于妊娠的高血压疾病的诊断、预测、 预后和/或监测的另外的、可替换的和优选改善的标记和工具。
用来预测PE的发展的临床上有用的筛选试验是稀少的(Conde-Agudelo et al. 2004, Obstet Gynecol 104:1367-91)。依赖于危险因子也是不够标准的，因为(虽然已 确定了 PE的许多危险因子)50%以上的病例以其他方式发生于年轻的、低风险的、未经产女 性。因此，妊娠的高血压疾病并且尤其是PE在它们的发作和疾病进展方面很大程度上仍是 不可预测的。
最近的报告表明，血管活性胎盘肽的不平衡，更具体地说可溶性fms样酪氨酸激 酶-1 (sFlt-l,sVEGFR-l) (Maynard et al. 2003, J Clin Invest 111 (5):649_58)、内皮 糖蛋白(Levine et al. 2006, N Engl J Med 355:992-1005)、胎盘生长因子(PIGF)和血管 内皮生长因子(VEGF) (Polliotti et al. 2003;Obstet Gynecol 101:1266-74)，可以用于 先兆子痫的早期预测。尤其是，sFlt-1和内皮糖蛋白是在发展PE以前约2-3个月过量产 生的抗血管生成肽。PIGF和VEGF是促血管生成肽，其显示在随后发展严重PE的女性的第 二三个月产妇血清中被减少。
授权给Proteogenix Inc.的 W02009/097584A1 和授权给 Auckland Uniservices Ltd的W02009/108073A1还披露了 PE生物标志物。
通过确定用于妊娠的高血压疾病(尤其用于先兆子痫)的生物标志物,本发明解决 了本领域中的上述需要，并提供了其应用。发明内容
通过进行大量的实验和测试，本发明的发明人确定了 33种生物标志物，其水平可 以密切预测和/或指示妊娠的高血压疾病，更具体地说，先兆子痫。为了简明起见，在整个 本说明书中，妊娠的一种或多种高血压疾病和先兆子痫此后分别缩写为HDP和PE。
尤其是，利用I)在妊娠的22周和26周获自10位孕妇(病例)(其将发展临床上 明显的PE，如自妊娠的28周或以后)的样品，和2)在妊娠的22周和26周获自孕妇(对 照)(其将在她们的妊娠期间不会发展PE)的样品，本发明的发明人认识到，在所述样品中 以下基于蛋白和/或肽的标记(标志物，标志)的量显示PE的行为预测和/或指示胰岛 素样生长因子-结合蛋白复合物酸不稳定链(ALS)、包含分解素和金属蛋白酶域的蛋白12 (ADA12)、血管生成素(ANG1)、钙蛋白酶-1催化亚单位(CAN1)、巨噬细胞集落刺激因子I受 体(CSF1R)、C-反应蛋白(CRP)、绒毛膜生长催乳激素(CSH)、营养不良蛋白聚糖(DAG1)、二 肽酶2 (DPEP2)、桥粒芯蛋白-2 (DSG2)、细胞外基质蛋白质I (ECM1)、内皮糖蛋白(EGLN)、 外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成员2 (ENPP2)、扣针蛋白-1 (FBLN1)、原纤蛋白-2 (FBN2)、疑似G蛋白偶联受体126 (GP126)、肝细胞生长因子样蛋白(HGFL)、细胞间粘附分 子3 (ICAM3)、转移抑制基因KiSS-1 (KISS1 )、亮氨酰-胱氨酰氨基肽酶(亮氨酰-半胱氨 酰氨基肽酶)(LCAP)、磷脂酰胆碱-留醇酰基转移酶(LCAT)、基底膜-特异性硫酸乙酰肝素 蛋白聚糖核心蛋白(基底膜-特异性硫酸类肝素蛋白多糖核心蛋白)(PGBM)、N-乙酰胞壁 酰-L-丙氨酸酰胺酶(PGRP2)、磷脂酰肌醇-聚糖-特异性磷脂酶D (PHLD)、过氧化物还原 酶(过氧化物酶，过氧化还原酶)I (PRDXl )、过氧化物还原酶2 (PRDX2)、受体型酪氨酸蛋白 磷酸酶S (PTPRS)、回旋同系物(环形交叉同系物)4 (R0B04)、蛋白S100-A9 (S10A9)、血清 淀粉样A-4蛋白(SAA4)、腱生蛋白-X (TENX)、三叶因子3 (TFF3)、血管内皮生长因子受体3 (VGFR3)。这些蛋白可以分别由 IGFALS、ADAMl2、ANG、CAPNl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENG、ENPP2、FBLNl、FBN2、GPR126、MSTl、ICAM3、KISSl、LNPEP, LCAT, HSPG2、 PGLYRP2、GPLDl、PRDXI/2、PTPRS, R0B04、S100A9、SAA4、TNXB, TFF3 和 FLT4 基因来编码。
因此，提供了ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3的任何一种或多种作为生物标志物的 用途，更特别地作为用于HDP的生物标志物，甚至更特别地作为用于所述HDP的诊断、预测、 预后和/或监测的生物标志物。优选地，所述HDP疾病(障碍)是PE。
还提供了ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、 FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、PRDX2、 PTPRS、R0B04、S 10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3中的任何一种或多种用于HDP的诊断、预测、 预后和/或监测的用途。优选地，所述HDP障碍是PE。
另外提供了用于在受试者中诊断、预测、预后和/或监测HDP的方法，该方法包括 在来自所述受试者的样品中测量 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、 DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、 PRDXl、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 的任何一种或多种的水平。优 选地，所述HDP疾病(障碍)是PE。
如在整个本说明书中所使用的，在来自受试者的样品中测量任何一种或多种生物 标志物的水平尤其可以表示，方法的检查阶段包括在来自受试者的样品中测量所述一种或 多种生物标志物的量。应当理解，用于诊断、预测、预后和/或监测疾病和病症的方法通常 包括检查阶段，其中数据收集自和/或关于受试者。
在一种实施方式中，用于在受试者中诊断、预测和/或预后HDP如优选PE的方法 包括以下步骤(i )在来自受试者的样品中测量任何一种或多种标记(标志物)的量，上述标 记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、 FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组；(ii)比较在(i)中测得的一种或多种标 记的量与所述一种或多种标记的量的参比值(参考值)，所述参比值表示HDP的已知的诊断、 预测和/或预后；(iii)发现在(i)中测得的一种或多种标记的量与参比值的偏差或没有 偏差；以及(iv)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在受试者中HDP的特定的诊断、预测 和/或预后。
用于诊断、预测和/或预后HDP如优选PE的方法，以及尤其是在前面段落中阐述 的包括步骤(i)至(iv)的方法，可以在两个或更多连续时间点用于受试者并可以比较在所 述连续时间点的各自的结果，借此可以确定在所述连续时间点处在HDP的诊断、预测和/或 预后之间是否发生变化。因而该方法便于随着时间的推移在受试者中监测HDP的诊断、预 测和/或预后的变化。
在妊娠和/或产后期间，如本文教导的生物标志物的量可以变化。因此，为了改 善本文教导的应用和方法的诊断、预测和/或预后的可靠性，使在检查的受试者中在妊娠 或产后的给定年龄测得的给定标记的量优选与在妊娠或产后的基本上相同的年龄下建立 的所述标记的量的参比值进行比较(例如，在+/_约3周内，优选在+/_约2周内，更优选在 +/_约I周内，还更优选在+/_约O. 5周内。)
也应理解，当在妊娠或产后期间在一个或多于一个时间点加以评估时，给定标记可以显示其诊断、预测和/或预后值。例如，当基本上遍及妊娠和/或产后加以评估时，或仅当在部分妊娠期内(例如，在第一、第二和/或第三三个月内)或产后加以评估时，或仅当在妊娠的一个或多个可比短时间内或产后(例如，在约10、8、6、4或2周内)加以评估时，标记可以是有用的信息。在本文中，所有这样的标记是有用的和合适的。
因而，与参比值(其表示没有HDP如优选没有PE (即，健康状态)的预测或诊断或表示HDP如优选PE的良好预后)相比，在来自受试者的样品中，选自由ALS、ADA12、ANG1、 CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、 KISSULCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、 VGFR3组成的组中的任何一种或多种标记的提高量或减少量(即,偏差)可以分别表示,受试者具有或可能有具有HDP的危险或表示在受试者中HDP的较差预后(如,例如,PE将恶化或进展到HELLP综合征或子痫的预后)。
通过仅实例而非限制性的方式，与参比值(其表示没有HDP如优选没有PE (B卩，健康状态)的预测或诊断或表示HDP如优选PE的良好预后)相比，在来自受试者的样品中，(a) 选自由 ALS、ADA12、CRP、CSH、DAGl、ENPP2、GP126、ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PHLD, PRDXl 和/或PRDX2、S10A9、SAA4和TFF3组成的组中的任何一种或多种标记的提高量(即，偏差) 和 / 或(b)选自由 ADA12、ANG1`、CANl、CSF1R、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、FBLNl、FBN2、 HGFL, ICAM3、LCAP, PGBM、PGRP2、PTPRS, R0B04、TENX 和 VGFR3 组成的组中的任何一种或多种标记的减少量(即，偏差)可以分别表示受试者具有或可能有具有HDP的危险或表示在受试者中HDP的较差预后(如，例如，PE将恶化或进展到HELLP综合征或子痫的预后)。
如实验所表示的，和在以下实施方式中反映的，通过仅实例而非限制性的方式，优选地在怀孕人类女性中
-相对于参比值，选自由ALS、CRP、ENPP2、GP126、KISS1、LCAT、PHLD、PRDXl 和 / 或 PRDX2、S10A9、SAA4和TFF3组成的组中的标记的量的提高可以在妊娠的约15到约23或24 周之间加以评估，更优选在妊娠的约18到约23或24周之间，甚至更优选在妊娠的约20到约23或24周之间，以及最优选在妊娠的约22周；和/或
-相对于参比值，选自由ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、 FBLNl、FBN2、HGFL、ICAM3、LCAP、PGBM、PGRP2、PTPRS、R0B04、TENX 和 VGFR3 组成的组中的标记的量的减少可以在妊娠的约15到约23或24周之间加以评估，更优选在妊娠的约18到约23或24周之间，甚至更优选在妊娠的约20到约23或24周之间，以及最优选在妊娠的约22周；和/或
-相对于参比值，选自由ALS、ADA12、CRP、CSH、DAG1、ENPP2、GP126、ICAM3、KISS1、 LCAP、LCAT、PHLD、PRDXUP /或PRDX2、S10A9、SAA4和TFF3组成的组中的标记的量的提高可以在妊娠的约24或25到约37周之间加以评估，更优选在妊娠的约24或25到约34周之间，甚至更优选在妊娠的约24或25到约30周之间，还更优选在妊娠的约24或25到约 28周之间，以及最优选在妊娠的约26周；和/或
-相对于参比值，选自由 ANG1、CANl、CSF1R、DPEP2、DSG2、ECMl、FBLNl、FBN2、HGFL, PGBM、PGRP2、PTPRS, R0B04、TENX和VGFR3组成的组中的标记的量的减少可以在妊娠的约 24或25到约37周之间加以评估，更优选在妊娠的约24或25到约34周之间，甚至更优选在妊娠的约24或25到约30周之间，还更优选在妊娠的约24或25到约28周之间，以及最 优选在妊娠的约26周。
本发明的用于HDP和优选PE的诊断、预测、预后和/或监测的方法还可以评估在 受试者中的如本文教导的两种或更多种生物标志物。可以分开和独立地评估每种如此测量 的生物标志物，或可以按照所述两种或更多种生物标志物的量来产生生物标志物分布。
因此，还披露了用于在受试者中HDP如优选PE的诊断、预测和/或预后的方法，该 方法包括以下步骤(i)在来自受试者的样品中，测量任何两种或更多种标记的量，上述标 记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、 FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组；(ii)利用(i)的测量结果来建立两种或更 多种标记的量的受试者分布；(iii)比较(ii)的所述受试者分布与所述两种或更多种标记 的量的参比分布(参考分布)，所述参比分布表示HDP的已知的诊断、预测和/或预后；(iv) 发现(ii)的受试者分布与参比分布的偏差或没有偏差；(V)将偏差或没有偏差的所述发现 归因于HDP的特定的诊断、预测和/或预后。
在两个或更多连续时间点应用上述方法可以便于监测HDP。
在妊娠和/或产后期间，如本文教导的生物标志物的量可以变化。因而，为了改善 本文教导的应用和方法的诊断、预测和/或预后的可靠性，在检查的受试者中，将在妊娠或 产后的给定年龄建立的两种或更多种标记的量的受试者分布优选与在妊娠或产后的基本 上相同的年龄建立的所述两种或更多种标记的量的参比分布进行比较(例如，在+/_约3周 内，优选在+/_约2周内，更优选在+/_约I周内，还更优选在+/_约O. 5周内)。
也应理解，当在妊娠或产后期间在一个或多于一个时间点加以评估时，给定标记 分布可以显示它的诊断、预测和/或预后价值。例如，当基本上遍及妊娠和/或产后加以评 估时，或仅当在部分妊娠期内(例如，在第一、第二和/或第三三个月内)或产后加以评估时， 或仅当在妊娠的一个或多个可比短时间内或产后(例如，在约IO、8、6、4或2周内)加以评估 时，标记分布可以是有用的信息。在本文中，所有这样的标记分布和构成标记是有用的和合 适的。
因此，相比于参比分布，其表示没有HDP如优选没有PE (即，健康状态)的预测或 诊断或表示HDP如优选PE的良好预后，利用在来自受试者的样品中如本文教导的两种或 更多种标记的测量的量建立的并且包括任何一种或多种标记(其选自由ALS、ADA12、ANGI, CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、 KISSULCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、 VGFR3组成的组)的提高量或减少量(即，偏差)的生物标志物分布可以分别表示受试者具有 或可能有具有HDP的危险或表示在受试者中HDP的较差预后(如,例如,PE将恶化或进展到 HELLP综合征或子痫的预后)。
通过仅实例而非限制性的方式，相比于参比分布，其表示没有HDP如优选没有PE (即，健康状态)的预测或诊断或表示HDP如优选PE的良好预后，利用在来自受试者的样品 中如本文教导的两种或更多种标记的测量量建立的并且包括(a)任何一种或多种标记(其 选自由 ALS、ADA12、CRP、CSH、DAG1、ENPP2、GP126、ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PHLD, PRDXl 和/或PRDX2、S10A9、SAA4和组成的组)的提高量(即，偏差)和/或(b)任何一种或多种标记(其选自由 ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、FBLNl、FBN2、HGFL, ICAM3、LCAP, PGBM、PGRP2、PTPRS, R0B04、TENX 和 VGFR3 组成的组)的减少量(即，偏差)的 生物标志物分布可以分别表示受试者具有或可能有具有HDP的危险或表示在受试者中HDP 的较差预后(如，例如，PE将恶化或进展到HELLP综合征或子痫的预后)。
如实验所表示的、以及在以下实施方式中反映的，通过仅实例而非限制性的方式， 优选地在怀孕人类女性中
-相对于参比分布，包括选自由ALS、CRP、ENPP2、GP126、KISS1、LCAT、PHLD, PRDXl 和/或PRDX2、S10A9、SAA4和TFF3组成的组中的标记的量的提高的生物标志物分布可以在 妊娠的约15到约23或24周之间加以评估，更优选在妊娠的约18到约23或24周之间，甚 至更优选在妊娠的约20到约23或24周之间，以及最优选在妊娠的约22周；和/或
-相对于参比分布，包括选自由ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、FBLNl、FBN2、HGFL、ICAM3、LCAP、PGBM、PGRP2、PTPRS、R0B04、TENX 和 VGFR3 组成的组 中的标记的量的减少的生物标志物分布可以在妊娠的约15到约23或24周之间加以评估， 更优选在妊娠的约18到约23或24周之间，甚至更优选在妊娠的约20到约23或24周之 间，以及最优选在妊娠的约22周；和/或
-相对于参比分布，包括选自由ALS、ADA12、CRP、CSH、DAG1、ENPP2、GP126、ICAM3、 KISS1、LCAP、LCAT、PHLD、PRDX1、和 / 或 PRDX2、S10A9、SAA4 和 TFF3 组成的组中的标记的量 的提高的生物标志物分布可以在妊娠的约24或25到约37周之间加以评估，更优选在妊娠 的约24或25到约34周之间，甚至更优选在妊娠的约24或25到约30周之间，还更优选在 妊娠的约24或25到约28周之间，以及最优选在妊娠的约26周；和/或
-相对于参比分布，包括选自由ANGI, CANU CSF1R、DPEP2、DSG2、ECMU FBLNU FBN2、HGFL, PGBM、PGRP2、PTPRS, R0B04、TENX和VGFR3组成的组中的标记的量的减少的生 物标志物分布可以在妊娠的约24或25到约37周之间加以评估，更优选在妊娠的约24或 25到约34周之间，甚至更优选在妊娠的约24或25到约30周之间，还更优选在妊娠的约 24或25到约28周之间，以及最优选在妊娠的约26周。
在一种实施方式中，用于监测HDP如优选PE(或用于监测发展HDP如优选PE的可 能性)的方法包括以下步骤(i)在来自受试者的样品中从两个或更多连续时间点测量任 何一种或多种标记的量，上述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、 DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、 PHLD, PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3 组成的组；(ii)在如在(i)中测量的样品之间比较一种或多种标记的量；(iii)在如在(ii)中比较的样品之间发 现(确定)一种或多种标记的量的偏差或没有偏差；以及(iv)将偏差或没有偏差的所述发现 归因于在受试者中在两个或更多连续时间点之间HDP的变化(或归因于发展HDP的可能性 的变化)。因而上述方法便于在受试者中随着时间的推移监测HDP或发展HDP的风险。
在另一种实施方式中，用于监测HDP如优选PE (或用于监测发展HDP如优选PE 的可能性)的方法包括以下步骤(i)在来自受试者的样品中从两个或更多连续时间点测 量任何两种或更多种标记的量，上述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、 DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、 PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(ii)利用(i)的测量结果来建立在两个或更多连续时间点处两种或更多种标记的量的受试者分 布；(iii)比较如在(ii)中建立的受试者分布；(iv)发现在如在(iii)中比较的受试者分 布之间的偏差或没有偏差；以及(V)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在受试者中在两 个或更多连续时间点之间HDP的变化(或归因于发展HDP的可能性的变化)。因此上述方法 便于在受试者中随着时间的推移监测HDP或发展HDP的风险。
非限制性地，这样的连续时间点可以相隔约2周以上，优选相隔约4周以上，例如， 相隔约6或8周，或还优选相隔约10周以上，例如，相隔约12周或15周。
在整个本披露内容中，用于监测如本文教导的任何一种疾病或病症的方法特别可 以便于预测疾病或病症的发生，或监测疾病或病症的进展、加重、缓解或复发、或对治疗或 对其它外部或内部因素、情况或应激物的反应等。有利地，如本文教导的监测方法可以应用 于受试者的医疗过程，优选旨在减轻如此监测的疾病或病症的医疗。例如，在患者是否可以 出院、需要治疗的变化或需要进一步住院治疗的决策中，可以包括这样的监测。如本文中使 用的，提及疾病或病症的监测还特别包括受试者发展疾病或病症的可能性、风险或机会的 监测，即，随着时间的推移监测所述可能性、风险或机会的变化。
类似地，在整个本披露内容中，用于如本文教导的任何一种疾病或病症的预测或 预后的方法特别可以便于预测或预后疾病或病症的发生，或预测或预后疾病或病症的进 展、加重、缓解或复发，或对治疗或对其它外部或内部因素、情况或应激物的反应等。
本发明的发明人进一步认识到，在妊娠或产后期间，在连续时间点处如本文教导 的生物标志物的评估还可以便于HDP并且优选PE的诊断、预测和/或预后。例如，在所述连 续时间点处标记的量之间的差异偏离在相应时间点处在将不发展HDP或PE的妇女中测得 的所述标记的量之间的差异的情况下，这样的偏差可以表示受试者具有或可能有发展HDP 或PE的危险。
因此，还提供了用于在受试者中诊断、预测和/或预后HDP如优选PE的方法，该方 法包括以下步骤(i )在来自受试者并来自第一时间点的样品中测量任何一种或多种标记 的量，上述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(ii )在来自受试者并来自 连续的第二时间点的样品中测量所述一种或多种标记的量；(iii)计算在如在(i)和(ii) 中测得的所述一种或多种标记的量之间的差异；(iv)比较如在(iii)中计算的差异与在 所述第一和第二时间点处所述一种或多种标记的量之间的差异的参比值，所述参比值表示 HDP的已知的诊断、预测和/或预后；(V)发现如在(iii)中计算的差异与参比值的偏差或 没有偏差；以及(iv)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在受试者中HDP的特定的诊断、 预测和/或预后。
还披露了用于在受试者中诊断、预测和/或预后HDP如优选PE的方法，该方法包 括以下步骤(i )在来自受试者并来自第一时间点的样品中测量任何两种或更多种标记的 量，上述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组;(ii)利用(i)的测量结 果来建立在所述第一时间点处两种或更多种标记的量的受试者分布；(iii)在来自受试者并来自连续的第二时间点的样品中测量所述两种或更多种标记的量；(iv)利用的(iii)的 测量结果来建立在所述第二时间点处两种或更多种标记的量的受试者分布；(V)计算如在(ii)和(iv)中建立的受试者分布之间的差异；(vi)比较如在(V)中计算的差异与在所述 第一和第二时间点处所述两种或更多种标记的量之间的差异的参比分布，所述参比分布表 示HDP的已知的诊断、预测和/或预后；(vii)发现如在(V)中计算的差异与参比分布的偏 差或没有偏差；以及(viii)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在受试者中HDP的特定的 诊断、预测和/或预后。
例如，在所述第一和第二时间点处在受试者中测得的给定标记的量之间计算的差 异(Ds)偏离如在正常妊娠中观测到的相应差异(Dn)的情况下，上述偏差可以表明，受试者 具有或可能有具有HDP如PE的危险。非限制性地，偏差可以是明显的，其中DS>DN或其中 Ds〈Dn或其中Ds>0而Dn〈0，或其中Ds〈0而Dn>0。上述差异可以适当表示为算术运算，如，例 如，减法或除法(例如，斜率、比率)。
非限制性地，这样的连续时间点可以是相隔约2周以上，优选相隔约4周以上，例 如，相隔约6或8周，或还优选相隔约10周以上，例如，相隔约12周或15周。
同样非限制性地，第一时间点可以是在妊娠的约15到约23或24周之间，优选在 妊娠的约18到约23或24周之间，更优选在妊娠的约20到约23或24周之间，甚至更优选 在妊娠的约22周。第二时间点可以是在妊娠的约24或25到约37周之间，优选在妊娠的 约24或25到约34周之间，更优选在妊娠约24或25到约30周的之间，还更优选在妊娠的 约24或25到约28周之间，以及甚至更优选在妊娠的约26周。
还披露了用来确定受试者是否(如，例如，仍然、或不再)需要HDP如优选PE的治疗 性或预防性治疗的方法，该方法包括(i)在来自受试者的样品中测量任何一种或多种标 记的量，所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S 10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(ii)比较在(i)中测得的 一种或多种标记的量与所述一种或多种标记的量的参比值，所述参比值表示HDP的已知的 诊断、预测和/或预后；(iii)发现在(i)中测得的一种或多种标记的量与所述参比值的偏 差或没有偏差；(iv)根据所述发现，推断是否需要HDP如优选PE的治疗性或预防性治疗。
还披露了用来确定受试者是否(如，例如，仍然、或不再)需要HDP如优选PE的治 疗性或预防性治疗的方法，该方法包括(i)在来自受试者的样品中测量任何两种或更多 种标记的量，所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(ii )利用(i )的测量结果 来建立两种或更多种标记的量的受试者分布；(iii)比较(ii)的所述受试者分布与所述两 种或更多种标记的量的参比分布，所述参比分布表示HDP的已知的诊断、预测和/或预后； (iv)发现(ii)的受试者分布与参比分布的偏差或没有偏差；(V)根据所述发现，推断是否 需要HDP如优选PE的治疗性或预防性治疗。
在上述方法便于得出结论受试者具有或可能有具有HDP的危险或具有HDP的较 差预后的情况下，可以特别指定一种治疗。非限制性地，可以测试(如本文教导的)入院以后 或在留在医疗保健中心期间的具有HDP的患者继续所述HDP的治疗的必要性，并且当不再需要或仅在有限程度上需要这样的治疗时，则可以出院。HDP如PE的示例性的治疗和预防性治疗包括但不限于抗高血压治疗(特别使用β -阻断剂、钙通道阻断剂、血管舒张剂和/ 或DOPA脱羧酶抑制剂，如，例如，甲基多巴、拉贝洛尔、醋丁洛尔、美托洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔、硝苯地平、伊拉地平和/或肼屈嗪、和/或MgSO4治疗)、流产、和分娩如通过引产或剖腹产手术。
涉及如本文教导的一种或多种生物标志物的评估的应用和方法可以主要用于妊娠或产后胎生动物女性受试者。优选地，所述受试者是哺乳动物，更优选人。
涉及如本文教导的一种或多种生物标志物的评估的应用和方法可以优选用于妊娠或产后人类女性受试者，如从妊娠的任何年龄并可达约产后12周，如但不限于
-其中，妊娠的人类女性受试者是妊娠约5或更多周，或妊娠约10或更多周，或优选妊娠约15或更多周，或更优选妊娠约20或更多周，例如，妊娠约21、22、23或24周，或甚至更优选妊娠约25或更多周，例如，妊娠约26、27、28或29周；和/或
-其中，妊娠的人类女性受试者是妊娠约40或更少周，例如，妊娠约39或38周，或妊娠约37或更少周，例如，妊娠约36或35周，或妊娠约34或更少周，例如，妊娠约33、32、 31或30周;和/或
-其中，妊娠的人类女性受试者是妊娠约10周至约40周，优选妊娠约15周至约 37周，或还优选妊娠约20周至34周；或-其中，产后人类女性受试者是产后约12周或更少周，例如，产后约11或10周， 或产后约9周或更少周，例如,产后约8或7周，或产后约6周或更少周，例如,产后约5或 4周，或产后约3周或更少周，例如，产后约2或I周。
另外，本发明的实施例表明，如本文教导的生物标志物便于在怀孕女性(当评估生物标志物时，其尚未患有临床上明显的HDP或PE)中预测HDP和优选PE的潜在(即，未来或即将)发生。
因而，涉及如本文教导的一种或多种生物标志物的评估的应用和方法可以在受试者中，尤其是在没有临床上明显的(即，有效的)HDP或PE的受试者中优选用来预测HDP和优选ΡΕ。这样的预测可以优选指明被测受试者将发展临床上明显的HDP或PE的可能性、机会或风险，例如在一定的时间段内或在妊娠或产后的给定年龄。
例如，涉及如本文教导的一种或多种生物标志物的评估的应用和方法，以及尤其是用来预测HDP和优选PE的应用和方法，可以用于妊娠的人类女性受试者，其中妊娠的人类女性受试者优选为
-妊娠约37或更少周，例如，妊娠约36或35周，或妊娠约34或更少周，例如，妊娠约33、32或31周，或妊娠约30或更少周，例如，妊娠约29、28或27周，或优选妊娠约26或更少周，例如，妊娠约25、24或23周，或更优选妊娠约22或更少周，例如，妊娠约21周，或还优选妊娠约20或更少周，例如，妊娠约19、18、17或16周，或还优选妊娠约15或更少周， 例如，妊娠约14、13、12、11或10周；和/或
-妊娠约10周至约37周，优选妊娠约15周至约34周，更优选妊娠约20至约30 周，甚至更优选妊娠约22至约26周；以及
其中，妊娠的人类女性受试者优选并不具有有效的HDP或ΡΕ，例如受试者并不表现便于诊断HDP或PE的临床症状和体征。
另外披露了如本文教导的应用和方法，借此，可以预测发作的孕龄或产后年龄和/ 或到HDP如优选PE的发作的剩余时间。这样的应用和方法可以有利地比较生物标志物量或分布与参比值或参比分布，其表示HDP的发作的已知的孕龄或产后年龄和/或到HDP的发作的已知的剩余时间。在这方面，选自HGFL、PTPRS、R0B04和VGFR3的任何一种或多种标记可以是特别有用的。
另外披露了如本文教导的应用和方法，借此，上述方法便于区别具有或具有患有早期发作先兆子痫的风险(即，妊娠〈34周的临床表现)、早产PE (S卩，妊娠>34并〈37周的临床表现)、以及足月PE (即，妊娠彡37周的临床表现)的受试者。
因而，还披露了，本发明的应用和方法用于HDP的诊断、预测、预后和/或监测，其中HDP是早期发作PE或早产PE或足月PE。
在已知或预期具有发展HDP或PE的风险的受试者中，利用本文披露的标记用于 HDP和优选PE可以是特别有用的。非限制性地，与HDP和优选PE有关的危险因子包括未经产、多次妊娠、在妊娠之间延长的时间间隔、在先前妊娠中HDP或PE的历史或HDP或PE的家族史、极端的年龄(〈20岁和>40岁)、肥胖、慢性高血压、慢性肾病、偏头痛、头痛、(妊娠) 糖尿病、多囊卵巢综合征、自身免疫病如狼疮、类风湿性关节炎、结节病或MS、血管或结缔组织疾病、维生素D缺乏、抗磷脂抗体综合征或遗传性易栓症、以前的伙伴具有HDP或PE的男性伴侣、胎儿水肿和不明原因的胎儿宫内生长受限。
因而，本发明的诊断、预测、预后和/或监测方法可以优选用于具有一种或多种上述危险因子的受试者和受试者群体。在一种实施方式中，本发明的诊断、预测、预后和/或监测方法可以优选进一步包括在受试者中确定HDP如优选PE的一种或多种危险因子的存在或不存在和/或水平。
如本文教导的任何一种预测、诊断、预后和/或监测应用或方法可以优选便于至少50%的敏感性和/或特异性(优选地，敏感性和特异性)，至少60%，至少70%或至少80%， 例如，彡85%或彡90%或彡95%,例如，约80%至100%或约85%至95%。
在整个本说明书中提及“疾病和/或病症”涵盖如本文披露的任何这样的疾病和病症，只要符合特定详述的上下文，更具体但非限制性地包括妊娠的高血压疾病(HDP)并优选先兆子痫(PE)。
本文教导的用于疾病和病症的诊断、预测、预后和/或监测的应用和方法可以用于还没有被诊断为患有上述疾病和病症(例如，预防性筛查)的受试者，或已被诊断为患有上述疾病和病症的受试者，或被怀疑患有上述疾病和病症(例如，显示一种或多种特征性体征和/或症状)的受试者，或具有发展上述疾病和病症的风险(例如，遗传易感性；一种或多种发展、环境或行为危险因子的存在)的受试者。上述应用和方法还可以用来检测疾病和病症的进展的不同阶段或严重性。上述应用和方法还可以用来检测疾病和病症对预防性或治疗性治疗或其它干预措施的反应。上述应用和方法可以另外用来帮助医生基于受试者的疾病和病症的恶化、维持现状、部分恢复、或完全恢复，来决定进一步治疗或观察或患者从医疗保健中心出院。
此外，本文教导的用于疾病和病症的诊断、预测、预后和/或监测的应用和方法可以用于群体筛查，如，例如，一般群体的筛查或基于一个或多个标准划分的群体的筛查，例如，年龄、血统、职业、相应疾病和病症的危险因子的存在或不存在，等。
在本文教导的用于疾病和病症(尤其是HDP和优选PE)的预测、诊断、预后和/或 监测的应用和方法中，选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组中的任何一种或多种标记的 测量结果可以结合于与相应疾病和病症有关的一种或多种另外生物标志物或临床参数的 评估。
因而，还提供了如上文教导的在受试者中用于HDP如优选PE的诊断、预测、预后和 /或监测的方法，其进一步包括在来自受试者的样品中测量一种或多种上述其它标记的存 在或不存在和/或水平。特别提供了这样的方法，其中方法的检查阶段进一步包括在来自 受试者的样品中测量一种或多种上述其它标记的存在或不存在和/或量。可以使用任何已 知或未知的适宜标记。
在整个本说明书中，〃其它(生物)标记〃通常是指包括这样的其它标记，其可用 于如本文披露的疾病和病症的诊断、预测、预后和/或监测。通过实施而不是限制性的方 式，可用于评估HDP和优选PE的生物标志物包括可溶性fms样酪氨酸激酶-1 (sFlt-1, sVEGFR-1) (Maynard et al. 2003,上文)、内皮糖蛋白(Levine et al. 2006,上文)、胎盘生 长因子(PIGF)和血管内皮生长因子(VEGF)(Polliotti et &1.2003，上文)。另外的生物标 志物可以包括那些生物标志物，它们披露在授权给Proteogenix Inc.的W02009/097584A1 和授权给Auckland Uniservices Ltd.的W02009/108073A1中，其以引用方式结合于本文。
应当理解，可以各自分开和独立地评估上述其它生物标志物的存在或不存在和/ 或量，或可以将上述其它生物标志物的存在或不存在和/或量包括在用本文披露的方法建 立的受试者分布或参比分布内。
可以按照先前用于其它生物标志物的已知程序来建立如本文采用的参比值。可以 在如本文教导的方法以内(即，构成一步骤)或以外(即，不构成一步骤)来建立上述参比值。 因此，本文教导的任何一种方法可以包括建立如本文教导的一种或多种标记的量的参比值 的步骤，所述参比值表示(a)如本文教导的疾病或病症的不存在或其良好预后的预测或诊 断，或(b )如本文教导的疾病或病症或其较差预后的预测或诊断。
另一方面提供了用于建立用于任何一种或多种标记的量的参比值的方法，所述标 记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、 FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3 组成的组，所述参比值表示
(a)如本文教导的疾病或病症的不存在或其良好预后的预测或诊断，或
(b)如本文教导的疾病或病症或其较差预后的预测或诊断，
所述方法包括
(i)在以下样品中测量所述一种或多种标记的量
(ia)来自不患有相应疾病或病症或不具有患有相应疾病或病症的风险或具有相 应疾病或病症的良好预后的一个或多个受试者的一个或多个样品，或
(ib)来自患有相应疾病或病症或具有患有上述相应疾病或病症的风险或具有上 述相应疾病或病症的较差预后的一个或多个受试者的一个或多个样品，以及
(ii)存储所述一种或多种标记的量
(iia)如在(ia)中测得的作为参比值，其表示不存在相应疾病或病症的预测或诊 断，或表示其良好预后，或
(iib)如在(ib)中测得的作为参比值,其表示相应疾病或病症的预测或诊断,或表示其较差预后。
本发明的方法可以以其他方式采用任何一种、两种或更多种标记的量的参比分 布，所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3 组成的组，以及可选地一种或多种其 它生物标志物的存在或不存在和/或量，其可以按照先前用于其它生物标志物的已知程序 来建立。可以在本发明的方法以内(即，构成一步骤)或以外(即，不构成一步骤)来建立上 述参比分布。因此，本文教导的方法可以包括以下步骤建立如本文教导的任何一种、任何 两种或更多种标记的量的参比分布，以及可选地一种或多种其它生物标志物的存在或不存 在和/或量，所述参比分布表示(a)因此不存在如本文教导的疾病或病症或其良好预后的 预测或诊断，或因此(b)如本文教导的疾病或病症或其较差预后的预测或诊断。
另一方面提供了一种用于建立用于任何一种、两种或更多种标记的量的参比分布 的方法,所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组，以及可选地可用于如本文 教导的疾病或病症的诊断、预测、预后和/或监测的一种或多种其它生物标志物的存在或 不存在和/或量，所述参比分布表示
(a)相应疾病或病症的不存在或因此其良好预后的预测或诊断，或
(b)相应疾病或病症或因此其较差预后的预测或诊断，
所述方法包括
(i)在以下样品中，测量如本文教导的所述一种、两种或更多种标记的量以及所述 一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量
(ia)来自不患有相应疾病或病症或不具有患有上述相应疾病或病症的风险或具 有上述相应疾病或病症的良好预后的一个或多个受试者的一个或多个样品；或
(ib)来自患有相应疾病或病症或具有患有上述相应疾病或病症的风险或具有上 述相应疾病或病症的较差预后的一个或多个受试者的一个或多个样品；
(ii)
(iia)利用(ia)的测量结果来产生如本文教导的所述一种、两种或更多种标记的 量的分布以及所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量；或
(iib)利用(ib)的测量结果来产生如本文教导的所述一种、两种或更多种标记的 量的分布，以及所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量；
(iii)
(iiia)将(iia)的分布存储为参比分布，其表示不存在相应疾病或病症的预测或 诊断或因此表示其良好预后；或
(iiib)将(iib)的分布存储为参比分布，其表示相应疾病或病症的预测或诊断或 因此表示其较差预后。
另外提供了用于在受试者中建立基线或参比值的方法，该方法包括(i)在来自 受试者并来自不同时间点的样品中测量任何一种或多种标记的量，所述标记选自由ALS、 ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、 HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、 SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组，其中受试者并不患有如本文教导的疾病或病症，以及 (ii)计算受试者的范围或平均值，其是用于所述受试者的基线或参比值。可以通过任何适 宜的技术如可以是本领域已知的技术来测量任何一种或多种标记的量和/或一种或多种 其它生物标志物的存在或不存在和/或量，所述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、 CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、 LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成 的组。
例如，可以采用能够特异性地结合于各自的生物标志物和/或其片段的结合剂 (binding agents)。结合剂特别可以是抗体、适体、光适体、蛋白质、肽、肽模拟物或小分子。 例如，可以采用免疫检测技术或质谱分析法或色谱法、或所述方法的组合。
另外披露了用于在受试者中诊断、预测、预后和/或监测如本文教导的疾病或病 症的试剂盒，该试剂盒包括(i)装置，该装置用于在来自受试者的样品中测量任何一种或多 种标记的量，上述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组，以及可选地和优选地(ii ) 所述一种或多种标记的量的参比值或用于建立所述参比值的装置，其中所述参比值表示相 应疾病或病症的已知的诊断、预测和/或预后。该试剂盒因而便于通过装置(i )，在来自受 试者的样品中测量所述一种或多种标记的量；比较通过装置(i )测得的所述一种或多种标 记的量与(ii )的或通过装置(ii )建立的参比值；发现通过装置(i )测得的所述一种或多种 标记的量与(ii)的参比值的偏差或没有偏差；因此将偏差或没有偏差的所述发现归因于 在受试者中相应疾病或病症的特定的诊断、预测和/或预后。
另一种实施方式提供了用于在受试者中诊断、预测、预后和/或监测如本文教导 的疾病或病症的试剂盒，该试剂盒包括(i)装置，该装置用于在来自受试者的样品中测量任 何一种、两种或更多种标记的量，所述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、 DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、 PGRP 2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组，和(i i ) 可选地，用于在来自受试者的样品中测量一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/ 或量的装置，和可选地并优选地(iii)装置，该装置用于建立如本文教导的所述一种、两种 或更多种生物标志物的量的受试者分布和可选地所述一种或多种其它生物标志物的存在 或不存在和/或量，以及可选地并优选地(iv)如本文教导的所述一种、两种或更多种生物 标志物的量的参比分布和可选地所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或 量，或用于建立所述参比分布的装置，所述参比分布表示相应疾病或病症的已知的诊断、预 测和/或预后。因而这样的试剂盒便于在来自受试者的样品中，分别通过装置(i)和(ii) 来测量任何一种、两种或更多种标记的量，和可选地一种或多种其它生物标志物的存在或 不存在和 / 或量，所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、 PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3 组成的组；基于所述测量结 果，建立(例如，利用包括在试剂盒中的装置或利用适宜的外部装置)如本文教导的所述一 种、两种或更多种标记的量的受试者分布和所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存 在和/或量；比较受试者分布与(iv)的或通过装置(iv)建立的参比分布；发现所述受试者 分布与所述参比分布的偏差或没有偏差；以及因此将偏差或没有偏差的所述发现归因于在 受试者中的相应疾病或病症的特定的诊断、预测和/或预后。
在本发明的试剂盒中的用于测量任何一种或多种标记(其选自由ALS、ADA12、 ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、 ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、 TENX、TFF3、VGFR3组成的组)的量和/或一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/ 或量的装置可以分别包括能够特异性地结合于如本文教导的所述一种或多种标记和/或 其片段的一种或多种结合剂，和能够特异性地结合于所述一种或多种其它生物标志物的一 种或多种结合剂。结合剂特别可以是抗体、适体、光适体、蛋白质、肽、肽模拟物或小分子。可 以有利地将结合剂固定在固相或载体上。本发明的试剂盒可以采用免疫检测技术或质谱分 析技术或色谱技术、或所述技术的组合。
因此还披露了用于诊断、预测、预后和/或监测如本文教导的疾病或病症的试剂 盒，该试剂盒包括Ca)能够特异性地结合于任何一种或多种标记和/或其片段的一种或 多种结合剂，所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(b)优选地，已知量或浓 度的任何一种或多种选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组的标记和 / 或其片段(例如， 用作对照、标准和/或校准物)；(c)优选地，所述一种或多种标记的量的参比值，或用于建 立所述参比值的装置。如在本说明书中其它地方教导的，可以适当地标记在(a)和/或(c) 中的所述成分。
还披露了用于诊断、预测和/或预后如本文教导的疾病或病症的试剂盒,该试剂 盒包括(a)能够特异性地结合于任何一种、两种或更多种标记和/或其片段的一种或多种 结合剂，所述标记选自由 ALS、ADAl2、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(b)可选地，能够特异性 地结合于一种或多种其它生物标志物的一种或多种结合剂；(c)优选地，已知量或浓度的 任何一种或多种标记和/或其片段，以及可选地，已知量或浓度的所述一种或多种其它生 物标志物(例如，用作对照、标准和/或校准物)，所述标记选自由ALS、ADA12、ANGI, CANU CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、 LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；(d)优选地，如本文教导的所述一种、两种或更多种标记的量的参比分布，和可 选地，所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量，或用于建立所述参比分布的装置。如在本说明书中其它地方教导的，可以适当地标记在.(a)、(b)和/或(C)下的所述成分。
另外披露了如在本文中描述的试剂盒用于诊断、预测、预后和/或监测如本文教导的疾病或病症的应用。
还披露了可用于测量任何一种或多种标记和可选地本文关注的一种或多种其它生物标志物的试剂和工具，上述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、 DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、 PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组。
因此，披露了蛋白、多肽或肽阵列或微阵列，其包括(a)任何一种或多种标记和/ 或其片段，上述标记选自由 ALS, ADA12、ANGI, CANU CSF1R、CRP、CSH、DAGU DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组，优选已知量或浓度的所述一种或多种标记和/或其片段；以及(b)可选地并优选地，一种或多种其它生物标志物，优选已知量或浓度的所述一种或多种其它生物标志物。
还披露了结合剂阵列(binding agent array)或微阵列，其包括(a)能够特异性地结合于任何一种或多种标记和/或其片段的一种或多种结合剂，上述标记选自由ALS、 ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、 HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、 SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组，优选已知量或浓度的所述结合剂；以及(b)可选地并优选地，能够特异性地结合于一种或多种其它生物标志物的一种或多种结合剂，优选已知量或浓度的所述结合剂。
还披露了如上文教导的试剂盒，其被构造为便携式装置，如，例如，床侧装置，用于家里或临床设置。
因而一个相关方面提供了能够在来自受试者的样品中测量任何一种或多种选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、 GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、PRDX2、PTPRS、R0B04、 S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组的标记和/或其片段的量的便携式测试装置，该便携式测试装置包括(i)用于从受试者获得样品的装置，( )用于在所述样品中测量所述一种或多种标记和/或片段的量的装置，以及(iii)用于可视化在样品中测得的所述一种或多种标记和/或片段的量的装置。
在一种实施方式中，部分(ii)和(iii)的装置可以是相同的，从而提供了能够在来自受试者的样品中测量所述一种或多种标记和/或其片段的量的便携式测试装置，该便携式测试装置包括(i )用于从受试者获得样品的装置；以及(i i )这样的装置，其用于在所述样品中测量所述一种或多种标记和/或其片段的量以及用于可视化在样品中测得的所述一种或多种标记和/或片段的量。
在一种实施方式中，所述可视化装置能够指示在样品中所述一种或多种标记和/ 或片段的量是高于或低于一定的阈值水平，和/或在样品中所述一种或多种标记和/或片段的量是否偏离所述一种或多种标记和/或片段的量的参比值，所述参比值表示如本文教导的疾病或病症的已知的诊断、预测和/或预后。因此，便携式测试装置还可以适当地包括所述参比值或用于建立参比值的装置。
在一种实施方式中，选择阈值水平，使得在样品中高于或低于(取决于标记和疾病 或病症)所述阈值水平的所述一种或多种标记和/或片段的量表明，受试者具有或可能有具 有相应疾病或病症的危险，或表明，在受试者中上述相应疾病或病症的较差预后，并且在样 品中低于或高于(取决于标记和疾病或病症)所述阈值水平的所述一种或多种标记和/或片 段的量表明，受试者并不具有或并不具有患有如本文教导的疾病或病症的风险，或表明在 受试者中上述疾病或病症的良好预后。
在一种实施方式中，便携式测试装置包括参比值(参考值)，该参比值表示不存在 如本文教导的疾病或病症的预测或诊断或表示上述疾病或病症的良好预后，或包括用于建 立所述参比值的装置，以及与所述参比值相比，在来自受试者的样品中，任何一种或多种选 自由 ALS、ADAl2、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、 GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、 S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组的标记和/或其片段的升高或降低(取决于标记 和疾病或病症)的量表明受试者具有或可能有患有相应疾病或病症的危险或表明在受试者 中对于上述相应疾病或病症的较差预后。在另一种实施方式中，便携式测试装置包括参比 值，该参比值表示如本文教导的疾病或病症的预测或诊断或表示对于上述疾病或病症的较 差预后，或包括用于建立所述参比值的装置，以及与所述参比值相比，在来自受试者的样品 中，如本文教导的所述一种或多种标记和/或片段的可比量表明受试者具有或可能有患有 相应疾病或病症的危险或表明在受试者中对于上述相应疾病或病症的较差预后。
在另一种实施方式中，便携式测试装置的测量(和可选地可视化)装置可以包括具 有近端和远端的载体(实心载体，solid support),包括在近端附近的样品施加区；在样品 施加区的远侧的反应区；和在反应区的远侧的检测区；可选的对照标准，该对照标准包括 任何一种或多种选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、 PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3 组成的组中的标记和 / 或其片段,借 此所述载体具有毛细管性能，其引导在施加区中施加的流体样品在从近端到远端的方向上 流动；以及可选地包括流体源，以改善更粘稠样品的毛细管流动。
反应区可以包括特异性结合分子的一个或多个带(bands)，用于结合于检测剂的 任何一种或多种标记(其选自由 ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、 ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组)和 / 或其片段,将上述特 异性结合分子结合物(conjugate)设置在载体上,使得它可以连同流体的毛细管流动一起 迁移；并且其中检测区包括一个或多个捕捉带(capture bands),该捕捉带包括固定在载体 上的标记特异性分子的群体。
反应区可以另外包括足够量的捕捉特异性结合分子的一个或多个带，用于任何一 种或多种标记(其选自由 ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、 ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、 PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组)和 / 或其片段，以防止阈 值量的标记特异性结合分子结合物迁移到检测区。可替换地，所述装置另外包括用于比较捕获的标记特异性结合分子结合物的量与阈值的装置。
其它方面涉及以下认识在如本文教导的疾病和病症，尤其是但非限制性地包括 HDP和优选PE中，本文披露的标记可以是用于治疗性和/或预防性干预的有价值的靶。
因此，本文还披露了以下任何之一和全部
(I) 一种药剂(试剂，agent),该药剂能够调节选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、 CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、 LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的任何一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或活性，其用作药物，优选用于如 本文教导的任何一种疾病或病症的治疗；
(2) 一种药剂在制造用于治疗如本文教导的任何一种疾病或病症的药物中的应 用，所述药剂能够调节如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或 活性；或一种制剂在用于治疗如本文教导的任何一种疾病或病症中的应用，所述药剂能够 调节如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或活性；
(3)用于在需要治疗的受试者中治疗如本文教导的任何一种疾病或病症的方法， 该方法包括将治疗或预防有效量的药剂给予所述受试者，所述药剂能够调节如上文在(I) 中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或活性；
(4)如在上文(I)至(3)的任何之一中阐述的主题，其中所述药剂能够降低或增加 如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或活性；
(5)如在上文(I)至(4)的任何之一中阐述的主题，其中所述药剂能够特异性地结 合于如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质；
(6)如在上文(I)至(5)的任何之一中阐述的主题，其中所述药剂是抗体或其片段 或衍生物；多肽；肽；肽模拟物；适体；光适体；或化学物质，优选有机分子，更优选小有机 分子;
(7)如在上文(I)至(4)的任何之一中阐述的主题，其中所述药剂能够减少或抑制 如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的表达，优选其中所述药剂是反义药 剂、核酶、或能够引起RNA干扰的药剂；
(8)如在上文(I)至(4)的任何之一中阐述的主题，其中所述药剂能够减少或抑制 如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或活性，优选地其中所述 药剂是如上文在(I)中定义的所述一种或多种蛋白质的重组或分离的缺失构造物、相对于 如上文在(I)中定义的一种或多种天然蛋白质具有显性负活性的多肽；
(9) —种测定(分析，assay),用来从一组测试药剂选择潜在地可用于治疗如本文 教导的任何一种疾病或病症的候选药剂，所述测定包括确定测试药剂是否可以调节，如增 加或减少并且优选减少如上文在(I)中定义的所述一种或多种核酸或蛋白质的水平和/或 活性；
(10)如在上文(9)中阐述的测定，进一步包括使用所选的候选药剂来制备用于给 予的组合物，以及在非人类动物模型，优选非人类哺乳动物模型中，监测其对于如本文教导 的任何一种疾病或病症的预防和/或治疗效果；
(11)通过如在上文(10)中阐述的测定加以分离的药剂；
(12)—种药物组合物或配方，其包含预防和/或治疗有效量的如在上文(I)至(8)或(10)的任何之一中阐述的一种或多种药剂、或其药用N-氧化物形式、加成盐、前药或溶剂化物，并且进一步包含一种或多种药用载体；
(13) —种用于生产如在上文(12)中阐述的药物组合物或配方的方法，该方法包括混合所述一种或多种药剂与所述一种或多种药用载体。
如在上文(I)至(13)的任何之一中阐述的所述病症或疾病可以尤其选自HDP且优选PE。
因此还设想了一种方法(筛选测定)，用于选择能够特异性地结合于选自由ALS、 ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、 HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、 SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组中的任何一种或多种核酸或蛋白质的药剂(例如，核酸如基因、或蛋白质)，所述方法包括(a)提供一种或多种，优选多种，测试结合剂；(b)从(a)的测试结合剂中选择那些结合于所述一种或多种核酸或蛋白质的测试结合剂；以及(c)从在 (b)中选择的测试结合剂反选择(S卩，除去)那些结合于任何一种或多种其它的、意外或不希望的靶的测试结合剂。
可以通过在通常有利于这样的结合的条件下使所述一种或多种核酸或蛋白质与测试结合剂接触(即，结合、暴露或温育)来有利地测试在测试结合剂和所述一种或多种核酸或蛋白质之间的结合。例如并且非限制性地，可以适当地体外测试在测试结合剂和所述一种或多种核酸或蛋白质之间的结合；或可以在包含所述一种或多种核酸或蛋白质的宿主细胞或宿主生物体中进行测试并暴露于或配置成表达测试结合剂。
非限制性地，结合或调节剂能够体外、在细胞中、在器官中和/或在生物体中结合所述一种或多种核酸或蛋白质或调节所述一种或多种核酸或蛋白质的活性和/或水平。
在如在上文(9)和(10)的任何之一中阐述的筛选测定中，由测试调节剂对所述一种或多种核酸或蛋白质的活性和/或水平的调节可以有利地通过在通常有利于上述调节的条件下使所述一种或多种核酸或蛋白质(例如，基因或蛋白质)与测试调节剂接触(即，结合、暴露或温育)来测试。通过实施而不是限制性的方式，在所述一种或多种核酸或蛋白质的活性和/或水平的调节来自测试调节剂与所述一种或多种核酸或蛋白质的结合的情况下，所述条件可以通常有利于这样的结合。例如和非限制性地，由测试调节剂对所述一种或多种核酸或蛋白质的活性和/或水平的调节可以适当地在体外测试，或可以在包含所述一种或多种核酸或蛋白质并暴露于或被配置成表达测试调节剂的宿主细胞或宿主生物体中加以测试。
还设想
-ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、 FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3中的任何一种或多种(例如，核酸如基因、或多肽或蛋白质)用作药物，优选用于治疗如本文教导的任何一种疾病或病症；
-所述一种或多种核酸或蛋白质在制造用于治疗如本文教导的任何一种疾病或病症的药物中的应用；
-所述一种或多种核酸或蛋白质用于治疗如本文教导的任何一种疾病或病症的应用；
-用于在需要上述治疗的受试者中治疗如本文教导的任何一种疾病或病症的方法，该方法包括给予所述受试者治疗或预防有效量的所述一种或多种核酸或蛋白质；
特别地，其中所述病症或疾病可以选自HDP且优选PE。
在本文披露的方面和实施方式中，如应用、方法、试剂盒、装置、试剂等，任何一种或多种标记、核酸或蛋白质可以以进一步优选的替换方式选自由ALS、ADA12、ANGI, CANU CSF1R、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、ICAM3、KISSl、LCAT, PGBM、 PGRP2、PHLD、PRDXl、PTPRS、R0B04、S10A9、TENX、TFF3 组成的组。
在又一进一步优选的替换方式中，尤其是在方面和实施方式涉及先兆子痫(PE)的情况下，任何一种或多种标记、核酸或蛋白质可以选自由ALS、ADA12、ANGI, CANU CSF1R、 CRP、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLN1、FBN2、GP126、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、PGBM、 PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、TENX、TFF3 组成的组。本发明的上述和另外的方面和优选实施方式描述在以下部分和所附权利要求中。所附权利要求1至26的主题由此具体地结合在本说明书。


图1至11示出了在22周和26周孕龄时在病例(即，在妊娠期间以后将发展PE的妇女)与对照(即，在妊娠期间以后将不发展PE的妇女)中各自标记的量的箱须图。
图12和13 示出了在病例中各自标记的量(Y轴)和到PE的发作(显示/诊断)的时间(X轴)之间的相关性。
图14是根据本发明的测试条的平面图(A)和侧面图(B)。
图15是根据本发明的测试盒的平面图。
图16A-B分别示出了与许多测试垫相比，根据本发明的试剂条的侧面图和顶视图。
图17示出了病例和对照的群体。 妊娠22周获得第一血浆样品；
■妊娠26周获得第二血浆样品； 在病例中临床诊断PE的妊娠时间；0当出生时的妊娠时间。
具体实施方式
如本文中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则“一个”、“一种”、和“该”的单数形式包括单数和复数指称。
如本文中所使用的，术语“包含”、“包括”和“由.....组成”与“包括”、或“含有”是同义的，并且是包容性的或开放式的并且并不排除另外的、非列举成员、要素或方法步骤。 该术语还涵盖“由.....组成”和“基本上由.....组成”。
通过端点的数值范围的列举包括归入相应范围的所有数目和分数、以及列举的端
如本文中所使用的，当提及可测量值如参数、量、持续时间等时，术语“约”是指包括与指定值的变化，尤其是+/-10%或更小的变化，优选+/-5%或更小，更优选+/-1%或更小，以及还更优选+/-0. 1%或更小，只要在所披露的发明中这样的变化适合于进行。可以理解的是，还具体和优选地披露了修饰语“约”涉及的数值本身。
而术语“一个或多个(一种或多种)”，如成员组的一个或多个成员，是本身明确的， 通过进一步列举，该术语特别包括提及所述成员的任何一个，或所述成员的任何两个或更多个，如，例如，任何彡3、彡4、彡5、彡6或彡7等的所述成员，并且可达所有所述成员。
在本说明书中引用的所有文献的全部内容以引用方式结合于本文。
除非另有规定，否则在披露本发明时所使用的所有术语(包括技术和科学术语)具有如由本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。通过进一步的指导，可以包括术语定义以更好地理解本发明的教导。
本发明的发明人认识到，ALS、ADA12、ANGI,CANU CSF1R、CRP、CSH、DAGU DPEP2、 DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、 PRDXl、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 中的任何一种或多种是尤其用于妊娠的高血压疾病(HDP)如优选先兆子痫(PE)的有价值的生物标志物。
术语“生物标志物”在本领域中是普遍的并且可以广泛地表示生物分子和/或其可检测部分，相对于受试者的表型和/或基因型的一个或多个方面，在受试者中它的定性和/或定量评估是预测或信息性的(例如，预测、诊断和/或预后性的)，如，例如，相对于受试者的关于给定疾病或病症的状态。优选地，如本文中使用的，生物标志物是基于肽、多肽和/或蛋白质的。本文中可互换使用术语〃生物标志物〃和〃标记〃。
本文中提及“如本文教导的疾病和/或病症”或类似提及涵盖如本文披露的任何这样的疾病和病症，只要符合这样的列举的上下文，尤其是但非限制性地包括妊娠的高血压疾病且优选先兆子痫。
妊娠的高血压疾病(HDP)包括与在妊娠期间和/或产后(例如，可达产后12周)高血压有关的疾病和病症的异类集合。
HDP可以方便地分类如下
1.由妊娠诱导的高血压
a.没有蛋白尿或(普遍的)水肿
b.具有蛋白尿或(普遍的)水肿(即，先兆子痫)
1.轻度
i1.严重
c.子痫
I1.同步高血压(慢性高血压)
II1.妊娠恶 化的高血压(妊娠加重高血压)
a.叠加先兆子痫
b.叠加子痫
最近的研究可以不再将PE分类为轻度或严重的，而是可以基于妊娠时间来确定 PE组，优选地a.早期发作(即，〈妊娠34周的临床表现)；b.早产(即，〉妊娠34并〈37周的临床表现)；c.足月(即，>妊娠37周的临床表现)。
可以用其它方式将HH)归类为预先存在的或妊娠的，可选地对任何类型添加“具有先兆子痫”(如果产妇或胎儿症状、体征或测试结果有必要如此)。
可以方便地将妊娠的非蛋白尿高血压定义为收缩压BP彡HOmmHg和/或舒张压 BP ^ 90mmHg的血压，其是在两个分开的场合并相隔4小时以上测得，例如，相隔约4小时至约168小时。当以妊娠以前或在妊娠20周以前测得高血压时，可以通常表示这样的高血压为慢性高血压。当在先前血压正常的妇女中并在妊娠20周以后测得高血压时，可以表示这样的高血压为妊娠引起的高血压。通常，妊娠引起的高血压将在产后12周内消退。当测得至少140/90mmHg的血压但并不持续6小时以上时，可以表示这样的高血压为短暂性高血压。
妊娠的蛋白尿高血压可以如在前面段落中加以定义，进一步伴随在24小时尿收集中彡300mg的总蛋白。
HDP还涵盖这样的疾病和病症，其在本领域中通常表示为妊娠高血压、轻度先兆子痫、妊娠弓I起的高血压、妊娠的特异性高血压、妊娠的毒血症等。
术语“孕龄”、“妊娠的年龄”和类似术语在本领域中是普遍的并且通常表示时间， 如自女性的末次月经期的第一天起以周为单位测得的。正常妊娠的人妊娠为约38至42周， 优选约40周。
“先兆子痫”(PE或先兆子痫)通常表示妊娠相关的疾病或病症，其特征在于具有蛋白尿或水肿或两者的高血压。PE还可以伴随肾小球机能失调、脑水肿、肝水肿、凝血功能异常和/或其它并发症。
PE可以方便地定义为以下体征和症状的一些组合
(I)在妊娠20周以后，收缩血压(BP) > 140mmHg和/或舒张压BP > 90mmHg (通常在两个场合并相隔4小时以上测得，例如，相隔约4至约168小时)，
(2)在妊娠20周以后，新发作蛋白尿(I+,通过纤维素试纸并使用尿分析法，在24 小时尿收集中彡300mg的蛋白，或单随机尿样品具有彡O. 3的蛋白/肌酐比值)，以及
(3)到产后12周，高血压和蛋白尿的消退，
如尤其是高血压和蛋白尿的组合。
严重PE可以方便地定义为
(I)收缩压BP≥160mmHg或舒张压BP≥110mmHg (通常在两个场合并相隔4小时以上测得，例如，相隔约4至约168小时)或
(2)蛋白尿，其特征在于，在24小时尿收集中测得> 3. 5g蛋白或两个随机尿样品具有至少3+蛋白(通过纤维素试纸)。
在PE中，高血压和蛋白尿通常在彼此7天内发生。在严重PE中，严重高血压、严重蛋白尿或HELLP综合征(溶血、升高的肝酶、低血小板)或子痫可以同时发生或每次仅一种症状。
偶尔，严重PE可以导致癫痫发作的发展，S卩，导致子痫。子痫还可以包括对许多器官或组织如肝(例如，肝细胞损害、门静脉周性坏死)和中枢神经系统(例如，脑水肿和脑出血)的功能障碍或损坏。
因此，HDP还涵盖这样的疾病和病症，其在本领域中通常表示为PE，特别包括轻度 PE,严重PE和具有另外的并发症的PE，子痫和HELLP综合征。
在医疗和临床实践中，术语“正在预测”或“预测”、“正在诊断”或“诊断”和“正在预后”或“预后”是普通的和很好理解的。应当理解的是，短语“用于诊断、预测和/或预后” 给定疾病或病症的方法还可以互换与短语如用于所述疾病或病症的“诊断、预测和/或预后的方法”或对所述疾病或病症“进行(或确定或建立)诊断、预测和/或预后的方法”等。
通过进一步的解释并且非限制性地，“正在预测”或“预测”通常是指在还未患有 所述疾病或病症的受试者中疾病或病症的提前表明、指示或预言。例如，在受试者中疾病 或病症的预测可以表明受试者将发展所述疾病或病症的可能性、机会或风险，例如在一定 的时间段内或到一定年龄。所述可能性、机会或风险可以特别表示为绝对值、范围或统计数 据，或可以相对于适宜的对照受试者或受试者群体(如，例如，相对于一般的、正常的或健康 的受试者或受试者群体)来表示。因此，受试者将发展疾病或病症的可能性、机会或风险可 以有利地表示为相对于适宜的对照受试者或受试者群体的增加或减少、或成倍增加或成倍 减少。如本文中所使用的，术语在受试者中如本文教导的病症或疾病的“预测”还可以特别 指受试者具有上述病症或疾病的’阳性’预测，即，受试者具有具有患有上述病症或疾病的 风险(例如，相对于对照受试者或受试者群体，风险显著增加)。如在本文中描述的，术语在 受试者中没有如本文教导的疾病或病症的“预测”可以特别指，受试者具有上述疾病或病症 的’阴性’预测，即，相对于对照受试者或受试者群体，受试者患有上述疾病或病症的风险 并没有显著增加。
术语“诊断”通常是指基于症状和体征和/或根据各种诊断程序的结果(如，例如， 根据已知诊断的疾病或病症的特征性的一种或多种生物标志物的存在、不存在和/或量)以 对受试者的疾病或病症得到认识、决定或作出结论的过程或行为。如本文中所使用的，在受 试者中，如本文教导的疾病或病症的“诊断”可以特别指，受试者具有这样的疾病或病症，因 此，被诊断为患有上述疾病或病症。在受试者中，没有如本文教导的疾病或病症的“诊断”可 以特别指，受试者并不患有上述疾病或病症，因此，被诊断为并不患有上述疾病或病症。尽 管显示暗示上述疾病或病症的一种或多种常规症状或体征，受试者也可以被诊断为并不患 有上述疾病或病症。
术语“预示”或“预后”通常是指对疾病或病症的进展和恢复前景(例如，可能性、 持续时间、和/或程度)的预期。本文教导的疾病或病症的良好预后可以通常涵盖自疾病或 病症的满意的部分或完全恢复的预期，优选在可接受的时间段内。上述疾病或病症的良好 预后可以更加通常地涵盖上述疾病或病症的不进一步恶化或加重的预期，优选在给定时间 段内。如本文教导的疾病或病症的较差预后可以通常涵盖的上述疾病或病症的不够标准的 恢复和/或不满意的缓慢恢复、或基本上没有恢复或甚至进一步恶化的预期。
如本文中所使用的，术语“受试者”或“患者”通常指人类，但还可以涵盖是指非人 类动物，优选温血动物，更优选胎生动物，甚至更优选哺乳动物，如，例如，非人类灵长类动 物、啮齿动物、犬科动物、猫科动物、马科动物、绵羊、猪等。特别是女性受试者，更尤其是妊 娠的或产后女性受试者。
如本文中所使用的，术语“样品”或“生物样品”包括获自受试者的任何生物样品。 样品可以包括但不限于全血、血浆、血清、红细胞、白细胞(例如，外周血单核细胞)、唾液、 尿、大便(即，粪便)、眼泪、汗液、皮脂、乳头抽吸物、导管灌洗物、肿瘤渗出物、滑液、脑脊液、 淋巴样液、细针抽吸物、羊水、任何其它体液、细胞裂解液、细胞的分泌产物、炎症液、精液和 阴道分泌物。优选的样品可以包括这样的样品，其包含可检测量的任何一种或多种标记如 本文教导的蛋白。在优选的实施方式中，样品可以是全血或其部分成分如，例如，血浆、血 清、或细胞沉淀物。优选地，样品可容易通过微创方法来获得，从而便于从受试者去除或分 离出所述样品。样品还可以包括组织样品和活检、组织匀浆液等。优选地，用来检测如本文教导的任何一种或多种标记的水平的样品是血浆。术语“血浆”通常指血液的基本上无色 的水样液体，其不包含细胞，但其中通常悬浮有血细胞(红细胞、白细胞、凝血细胞等)，并且 包含营养物、糖、蛋白质、矿物质、酶等。此外优选地，所述样品是尿。
当在样品中检测或确定所述分子或分析物或分子或分析物的所述组的存在或不 存在和/或量时，在样品中，“测量”分子或分析物如蛋白、多肽或肽、或两种或更多种分子或 分析物如两种或更多种蛋白质、多肽或肽的组，优选基本上排除其它分子和分析物。
术语“量”和“水平”在本领域中是同义的并且通常是很好理解的。如本文中所使用 的，上述术语可以特别指样品中分子或分析物的绝对量，或样品中分子或分析物的相对量， 即，相对于另一个值如相对于如本文教导的参比值，或相对于数值范围，其指出生物标志物 的基线表达。这些值或范围可以获自单个患者或获自患者组。
样品中分子或分析物的绝对量可以有利地表示为重量或摩尔量，或更通常表示为 浓度，例如，重量/体积或摩尔/体积。
在样品中分子或分析物的相对量可以有利地表示为相对于所述另一个值，如相对 于如本文教导的参比值，的增加或减少、或倍数增加或倍数减少。在第一和第二参数(例如， 第一和第二量)之间进行相对比较可以但不需要首先确定所述第一和第二参数的绝对值。 例如，测量方法可以产生用于所述第一和第二参数的可量化读数(如，例如，信号强度)，其 中所述读数是所述参数的数值的函数，并且其中可以直接比较所述读数以产生第一参数与 第二参数的相对值，而实际上不需要首先将读数转换成相应参数的绝对值。
如本文中所使用的，提及任何一种标记(生物标志物)、核酸、肽、多肽或蛋白对应 于在本领域中在各自指定下通常已知的标记、核酸、肽、多肽或蛋白。上述术语涵盖任何生 物体尤其在动物中发现的标记、核酸、蛋白和多肽，优选温血动物，更优选脊椎动物，更优选 哺乳动物，包括人类和非人类哺乳动物，还更优选人类。上述术语尤其涵盖具有天然序列的 这样的标记、核酸、蛋白和多肽，即，其主要序列相同于存在于或源于自然的标记、核酸、蛋 白和多肽的序列。技术人员明了，由于在物种之间的遗传趋异，所以在不同物种之间天然序 列可以不同。另外，由于在给定物种内的正常的遗传多样性(变异)，所以在相同物种的不同 个体之间或内，天然序列可以不同。此外，由于转录后或翻译后修饰，在相同物种的不同个 体之间或甚至在相同物种的不同个体内，天然序列可以不同。本文包括标记、核酸、蛋白和 多肽的任何上述变体或变异体。因此，存在于或源于自然的标记、核酸、蛋白和多肽的所有 序列被认为是“天然的”。上述术语涵盖这样的标记、核酸、蛋白和多肽，其形成活生物体、器 官、组织或细胞的一部分，其形成生物样品的一部分，以及其至少部分地分离自上述来源。 上述术语还涵盖通过重组或合成方式产生的蛋白和多肽。
如本文教导的示例性的人标记、核酸、蛋白或多肽可以是如在NCBI Genbank (http://www.ncb1.nlm.nih.gov/)或 Swissprot/Uniprot (http://www.uniprot.org/) 以下给出的登录号下所注解的。技术人员还可以理解，在一些情况下，所述序列可以是如本 文教导的标记、核酸、蛋白或多肽的前体(例如，前体蛋白)并且可以包括处理自成熟分子的 部分。技术人员可以进一步明了，虽然以下可以列出仅一种或多种变异体，但包括所有变异 体。除非另有规定，否则以以下形式来提供下述条目名称(代码；用于一种或多种代表性 氨基酸序列(例如，变异体)的Genbank登录号，Genbank序列版本“V.，，)
胰岛素样生长因子-结合蛋白复合物酸不稳定链(ALS ;NP_004961，v.1)。以下再现在NP_004961下注解的序列
MALRKGGLALALLLLSWVALGPRSLEGADPGTPGEAEGPACPAACVCSYDDDADELSVF
CSSRNLTRLPDGVPGGTQALWLDGNNLSSVPPAAFQNLSSLGFLNLQGGQLGSLEPQA
LLGLENLCHLHLERNQLRSLALGTFAHTPALASLGLSNNRLSRLEDGLFEGLGSLWDLNL
GWNSLAVLPDAAFRGLGSLRELVLAGNRLAYLQPALFSGLAELRELDLSRNALRAIKANV
FVQLPRLQKLYLDRNLIAAVAPGAFLGLKALRWLDLSHNRVAGLLEDTFPGLLGLRVLRLS
HNAIASLRPRTFKDLHFLEELQLGHNRIRQLAERSFEGLGQLEVLTLDHNQLQEVKAGAF
LGLTNVAVMNLSGNCLRNLPEQVFRGLGKLHSLHLEGSCLGRIRPHTFTGLSGLRRLFLK
DNGLVGIEEQSLWGLAELLELDLTSNQLTHLPHRLFQGLGKLEYLLLSRNRLAELPADAL
GPLQRAFWLDVSHNRLEALPNSLLAPLGRLRYLSLRNNSLRTFTPQPPGLERLWLEGNP
WDCGCPLKALRDFALQN PSAVPRFVQAICE⑶DCQPPAYTYNN ITCASPPEVVGLDLRD
LSEAHFAPC(SEQ ID NO 33)
包含分解素和金属蛋白酶域的蛋白12 (ADA12 ；NP_003465, v. 3 ；NP_067673, v. 2)
血管生成素(ANGI；NP_001091046, v.1 ；NP_001136, v.1)
钙蛋白酶-1催化亚单位(CAN1 ；NP_005177, v. 2)
巨噬细胞集落刺激因子I受体(CSF1R ；NP_005202, V. 2)C-反应蛋白(CRP ;NP_000558，V. 2)
绒毛膜生长催乳激素(CSH；NP_001308, V.1 ；NP_066271, v.1 ；NP_072166, v.1 ； NP_072167, v.1)
营养不良蛋白聚糖(DAG1;ΝΡ_001159400，v.1 ；NP_004384, v. 3)
二肽酶 2 (DPEP2 ；NP_071750, v.1)
桥粒芯蛋白-2(DSG2 ；NP_001934, v. 2)
细胞外基质蛋白质I (ECM1 ；NP_004416, v. 2 ；NP_073155, v. 2)
外核苷酸焦磷酸酶磷酸二酯酶家族成员2 (ENPP2 ；NP_001035181, V.1 ； ΝΡ_001124335, v.1 ；NP_006200, v. 3)
扣针蛋白-1(FBLNl ；NP_001987, v. 2 ；NP_006476, v. 2 ；NP_006477, v. 2 ； NP_006478, v. 2)
原纤蛋白-2(FBN2 ；NP_001990, v. 2)
疑似G 蛋白偶联受体 126 (GP126 ；NP_001027566, v.1 ；NP_001027567, v.1 ； NP_065188, v. 4 ；NP_940971, v.1)
肝细胞生长因子样蛋白(HGFL ；NP_066278, v. 3.)
细胞间粘附分子3 (ICAM3 ；NP_002153, v. 2)
转移抑制因子KiSS-1 (KISS1 ；NP_002247, v. 3)
亮氨酰-胱氨酰氨基肽酶(LCAP；NP_005566, v. 2 ；NP_787116, v. 2)
磷脂酰胆碱-甾醇酰基转移酶(LCAT ；NP_000220, V.1)
基底膜-特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白(PGBM ；NP_005520, V. 4)
N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶(PGRP2 ；NP_443122, V. 3)
磷脂酰肌醇-聚糖-特异性磷脂酶D (PHLD ；NP_001494, v. 2 ；NP_803436, v.1)
过氧化物还原酶I (PRDXI ；NP_002565, v.1 ；NP_859047, v.1 ；NP_859048, v.1)
过氧化物还原酶2 (PRDX2 ；NP_005800, V. 3)
受体型酪氨酸蛋白磷酸酶S(PTPRS ；NP_002841,v. 3 ；NP_570924, v. 2 ；NP_570925, v. 2)
回转同系物4 (R0B04 ；NP_061928, v. 4)
蛋白S100-A9 (S10A9 ；NP_002956, v.1)
血清淀粉样A-4 蛋白(SAA4 ；NP_006503, v.1)
腱生蛋白-X(TENX ；NP_061978, v. 6 ；NP_115859, v. 2)
三叶因子3(TFF3 ；Swissprot/Uniprot (http://www.uniprot.org/)登录号 Q07654，序列版本I)
血管内皮生长因子受体3 (VGFR3 ；NP_002011, v. 2 ；NP_891555, v. 2)
如本文教导的示例性的人的其它标记可以是如在以下给出的登录号下所注解的。 技术人员还可以理解，在一些情况下，所述序列可以是标记的前体(例如，前体蛋白)并且可以包括处理自成熟分子的部分。除非另有规定，否则以以下形式来提供下述条目名称(代码；用于一种或多种代表性的氨基酸序列(例如，变异体)的Swissprot/Uniprot登录号， Swissprot/Uniprot 序列版本 〃ν·")
可溶性fms 样酪氨酸激酶-1 (sFlt-1, sVEGFR-1 ;P17948，v. 2，变异体 P17948-2)
内皮糖蛋白(ENG ；Genbank 登录号 NP_000109, v.1 ;ΝΡ_001108225，v.1)
胎盘生长因子(PLGF；P49763, v. 2 ；Genbank 登录号 NP_002623，v. 2)
血管内皮生长因子(VEGFA;Ρ15692，ν· 2 ;例如，Genbank 登录号 ΝΡ_001020537，ν· 2 (VEGFA 变异体 a))。
本文提及任何生物分子，如标记(生物标志物)、肽、多肽或蛋白还可以涵盖其片段。因此，本文提及测量(或测量的量)任何一种标记或生物分子可以涵盖测量标记或生物分子，如，例如，测量标记或生物分子的成熟和/或经处理的可溶性/分泌形式(例如，血浆循环形式)，和/或测量其一种或多种片段。
例如，可以共同测量任何标记或生物分子和/或其一种或多种片段，使得测得的量对应于共同测得的物种的总量。在另一个实例中，可以各自独立地测量任何标记或生物分子和/或其一种或多种片段。优选地，所述片段可以是血浆循环(即，非细胞或膜结合的) 形式。不希望受限于任何理论，这样的循环形式可以通过自然处理源自全长标记或生物分子，或可以来自在样品中发生的已知的降解过程。在某些情况下，循环形式还可以是全长标记或生物分子，发现其在血浆中循环。因此，所述〃循环形式〃可以是任何标记或生物分子或任何一种的任何经处理的可溶性形式或片段，其在样品中循环，即，其并不结合于所述样品的细胞或膜部分。
除非根据上下文另有指明，否则本文提及任何生物分子如标记、肽、多肽或蛋白涵盖这样的生物分子，其来自存在于其中的任何生物体，并且特别优选来自动物，优选温血动物，更优选脊椎动物，甚至优选哺乳动物，包括人类和非人类哺乳动物，还更优选来自人类。
另外，除非根据上下文另有指明，否则本文提及任何标记、肽、多肽或蛋白以及其片段还可以通常涵盖所述标记、肽、多肽或蛋白和片段的修饰形式如承载表达后修饰，其包括，例如，磷酸化、糖基化、脂化、甲基化、半胱氨酰基化、磺化、谷胱苷肽基化、乙酰化、甲硫氨酸氧化成甲硫氨酸亚砜或甲硫氨酸砜等。
在一种实施方式中，任何标记、肽、多肽或片段和其片段，或如本文采用的其它生物标志物和其片段，可以是人源的，即，它们的主要序列可以相同于天然存在的人标记、肽、 多肽或蛋白的相应主要序列。因此，在这方面，修饰语〃人〃涉及各自的标记、肽、多肽、蛋白质或片段的主要序列，而不涉及它们的起源或来源。例如，这样的标记、肽、多肽、蛋白质或片段可以存在于人受试者的样品中或分离自人受试者的样品，或可以通过其它方式(例如， 通过重组表达、无细胞翻译或非生物肽合成)来获得。
术语蛋白、多肽或肽的“片段”通常是指所述蛋白、多肽或肽的N端和/或C端缺失或截短形式。所述术语涵盖通过任何机制产生的片段，如但不限于，通过所述肽、多肽或蛋白的可变翻译、外和/或内切蛋白酶解和/或降解，如，例如，体内或体外，如，例如，通过通过物理、化学和/或酶蛋白水解。非限制性地，蛋白、多肽或肽的片段可以是所述蛋白、多肽或肽的氨基酸序列的至少约5%、或至少约10%，例如，彡20%、彡30%或彡40%,如彡50%,例如彡60%、彡70%或彡80%,或甚至彡90%或彡95%。
例如，片段可以包括相应全长蛋白的> 5个连续氨基酸的序列，或> 10个连续氨基酸，或> 20个连续氨基酸，或> 30个连续氨基酸，例如，^ 40个连续氨基酸，如例如> 50 个连续氨基酸，例如，彡60、彡70、彡80、彡90、彡100、彡200、彡300、彡400、彡500或彡600个连续氨基酸。
在一种实施方式中，与相应的成熟、全长蛋白或它的可溶性或血浆循环形式相比， 片段可以是N端和/或C端截短I至约20个氨基酸，如，例如，I至约15个氨基酸，或I至约10个氨基酸，或I至约5个氨基酸。
在一种实施方式中，可以通过所述蛋白、多肽或肽的体外蛋白水解来获得给定蛋白、多肽或肽的片段，以从样品有利地获得可检测的一种或多种肽。例如，可以通过适宜的物理、化学和/或酶剂来实现这样的蛋白水解，例如，蛋白酶，优选内蛋白酶，即，在蛋白、多肽或肽链内内部剪切的蛋白酶。适宜的内蛋白酶的非限制性清单包括丝氨酸蛋白酶(EC 3.4. 21)、苏氨酸蛋白酶(EC 3.4. 25)、半胱氨酸蛋白酶(EC 3. 4. 22)、天冬氨酸蛋白酶(EC 3. 4. 23)、金属蛋白酶(EC 3. 4. 24)和谷氨酸蛋白酶。示例性的非限制性的内蛋白酶包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、产酶溶杆菌内蛋白酶Lys-C、金黄色葡萄球菌内蛋白酶 Glu-C (内肽酶V8)或溶组织梭菌内蛋白酶Arg-C (梭菌蛋白酶)。可以使用另外已知的或尚未被识别的酶；技术人员可以基于它们的剪切特异性和频率来选择适宜的一种或多种蛋白酶以获得所期望的肽形式。优选地，可以通过胰蛋白酶类型(EC 3. 4. 21. 4)的内肽酶来实现蛋白水解，优选胰蛋白酶，如但不限于来自牛胰腺、人胰腺、猪胰腺、重组胰蛋白酶、Lys-乙酰化胰蛋白酶、溶液中的胰蛋白酶、固定于载体的胰蛋白酶等的胰蛋白酶的制剂。胰蛋白酶是特别有用的，特别是由于剪切的高特异性和效率。本发明还设想使用任何胰蛋白酶样蛋白酶，即，具有和胰蛋白酶类似的特异性。另外，化学试剂可以用于蛋白水解。例如，CNBr可以在Met处剪切；BNPS-粪臭素可以在Trp处剪切。基于所采用的酶或化学试剂，技术人员可以确定用于处理的条件，例如，蛋白浓度、酶或化学试剂浓度、pH、缓冲剂、温度、时间。
因此还提供了任何一种选自由如上文定义的ALS、ADAl2、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、 CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLN1、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、 PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的标记、肽、多肽或蛋白的分离片段。这样的片段可以给出关于在生物样品中所述标记、肽、多肽或蛋白的存在和量的有用信息，借此，所述片段的检测是有益的。因此，本文披露的所述标记、肽、多肽或蛋白的片段是有用的生物标志物。
优选的片段可以包含、基本上由或由如在表I列出的SEQ ID NO:1至32中阐述的序列组成，其在实施例中用来提供关于各自标记的信息。
表I
权利要求
1.胰岛素样生长因子-结合蛋白复合物酸不稳定链(ALS)、包含分解素和金属蛋白酶域的蛋白12(ADA12)、血管生成素(ANGI)、钙蛋白酶-1催化亚单位(CAN1)、巨噬细胞集落刺激因子I受体(CSF1R)、C-反应蛋白(CRP)、绒毛膜生长催乳激素(CSH)、营养不良蛋白聚糖(DAG1)、二肽酶2(DPEP2)、桥粒芯蛋白_2 (DSG2)、细胞外基质蛋白质I (ECM1)、外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成员2 (ENPP2)、扣针蛋白-1 (FBLNl )、原纤蛋白-2 (FBN2)、疑似G蛋白偶联受体126 (GP126)、肝细胞生长因子样蛋白(HGFL)、细胞间粘附分子3 (ICAM3)、转移抑制基因KiSS-1 (KISS1)、亮氨酰-胱氨酰氨基肽酶(LCAP)、磷脂酰胆碱-留醇酰基转移酶(LCAT)、基底膜-特异性硫酸乙酰肝素蛋白聚糖核心蛋白(PGBM)、N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶(PGRP2)、磷脂酰肌醇-聚糖-特异性磷脂酶D (PHLD)、过氧化物还原酶I (PRDXl)、过氧化物还原酶2 (PRDX2)、受体型酪氨酸蛋白磷酸酶S (PTPRS)、回旋同系物 4 (R0B04)、蛋白 S100-A9 (S10A9)、血清淀粉样 A-4 蛋白(SAA4)、腱生蛋白-X (TENX)、三叶因子3 (TFF3)、血管内皮生长因子受体3 (VGFR3)中的任何一种或多种作为生物标志物，优选作为用于妊娠的高血压疾病的生物标志物的应用。
2.ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS,R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3中的任何一种或多种用于妊娠的高血压疾病的诊断、预测、预后和/或监测的应用。
3.一种用于在受试者中诊断、预测、预后和/或监测妊娠的高血压疾病的方法，其中，所述方法的检查阶段包括在来自所述受试者的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSFIR、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLN1、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组中的任何一种或多种标记的量。
4.根据权利要求3所述的方法，用于在所述受试者中诊断、预测和/或预后妊娠的高血压疾病，所述方法包括(i)在来自所述受试者的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的任何一种或多种标记的量；(ii )使在(i )中测得的一种或多种标记的量与所述一种或多种标记的量的参比值进行比较，所述参比值表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后；(iii)发现在(i)中测得的一种或多种标记的量与所述参比值的偏差或没有偏差；以及(iv)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在所述受试者中妊娠的高血压疾病的特定的诊断、预测和/或预后。
5.根据权利要求3所述的方法，用于在所述受试者中诊断、预测和/或预后妊娠的高血压疾病，所述方法包括(i)在来自所述受试者的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的任何两种或更多种标记的量；(ii)利用(i)的测量结果来建立所述两种或更多种标记的量的受试者分布；(iii)比较(ii)的所述受试者分布与所述两种或更多种标记的量的参比分布，所述参比分布表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后；(iv)发现(ii)的所述受试者分布与所述参比分布的偏差或没有偏差；以及(v)将偏差或没有偏差的所述发现归因于妊娠的高血压疾病的特定诊断、预测和/或预后。
6.根据权利要求3所述的方法，用于监测妊娠的高血压疾病，所述方法包括(i)在来自受试者的来自两个或更多个连续时间点的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组中的任何一种或多种标记的量；(ii)在如在(i)中测得的样品之间比较所述一种或多种标记的量；(iii)在如在(ii)中比较的样品之间发现所述一种或多种标记的量的偏差或没有偏差；以及(iv)将偏差或没有偏差的所述发现归因于妊娠的高血压疾病的变化或归因于在所述两个或更多个连续时间点之间在所述受试者中发展妊娠的高血压疾病的可能性的变化。
7.根据权利要求3所述的方法，用于监测妊娠的高血压疾病，所述方法包括(i)在来自受试者的来自两个或更多个连续时间点的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组中的任何两种或更多种标记的量；(ii)利用(i)的测量结果来建立在所述两个或更多个连续时间点处所述两种或更多种标记的量的受试者分布；(iii)比较如在(ii)中建立的所述受试者分布；(iv)在如在(iii)中比较的所述受试者分布之间发现偏差或没有偏差；以及(V)将偏差或没有偏差的所述发现归因于妊娠的高血压疾病的变化或归因于在所述两个或更多个连续时间点之间在所述受试者中发展妊娠的高血压疾病的可能性的变化。
8.根据权利要求3所述的方法，用于在所述受试者中诊断、预测和/或预后妊娠的高血压疾病，所述方法包括(i )在来自所述受试者并来自第一时间点的样品中测量选自由ALS、ADA 12、ANG1、CANl、CSFIR、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLN1、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组中的任何一种或多种标记的量；(ii)在来自所述受试者并来自连续的第二时间点的样品中测量所述一种或多种标记的量；(iii)计算如在(i)和(ii)中测得的所述一种或多种标记的量之间的差异；(iv)比较如在(iii)中计算的所述差异与在所述第一时间点和第二时间点的所述一种或多种标记的量之间的差异的参比值，所述参比值表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后；(v)发现如在(iii)中计算的所述差异与所述参比值的偏差或没有偏差；以及(iv)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在所述受试者中妊娠的高血压疾病的特定诊断、预测和/或预后。
9.根据权利要求3所述的方法，用于在所述受试者中诊断、预测和/或预后妊娠的高血压疾病，所述方法包括(i )在来自所述受试者并来自第一时间点的样品中测量选自由ALS、ADA 12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组中的任何两种或更多种标记的量；(ii)利用(i)的测量结果来建立在所述第一时间点处所述两种或更多种标记的量的受试者分布；(iii)在来自所述受试者并来自连续的第二时间点的样品中测量所述两种或更多种标记的量；(iv)利用(iii)的测量结果来建立在所述第二时间点处所述两种或更多种标记的量的受试者分布；(V)计算如在(ii)和(iv)中建立的所述受试者分布之间的差异；(Vi)比较如在(V)中计算的所述差异与在所述第一时间点和第二时间点处的所述两种或更多种标记的量之间的差异的参比分布，所述参比分布表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后；(Vii)发现如在(V)中计算的所述差异与所述参比分布的偏差或没有偏差；以及(Viii)将偏差或没有偏差的所述发现归因于在所述受试者中妊娠的高血压疾病的特定诊断、预测和/或预后。
10.一种用来确定受试者是否(例如，仍然、或不再)需要妊娠的高血压疾病的治疗性或预防性治疗的方法，所述方法包括(i)在来自所述受试者的样品中测量选自由ALS、ADAl2、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的任何一种或多种标记的量；(ii )将在(i )中测得的所述一种或多种标记的量与所述一种或多种标记的量的参比值进行比较，所述参比值表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后；(iii)发现在(i)中测得的所述一种或多种标记的量与所述参比值的偏差或没有偏差；以及(iv)根据所述发现，推断是否需要妊娠的高血压疾病的治疗性或预防性治疗。
11.一种用来确定受试者是否(例如，仍然、或不再)需要妊娠的高血压疾病的治疗性或预防性治疗的方法，所述方法包括(i)在来自所述受试者的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的任何两种或更多种标记的量；(ii)利用(i)的测量结果来建立所述两种或更多种标记的量的受试者分布；(iii)比较(ii)的所述受试者分布与所述两种或更多种标记的量的参比分布，所述参比分布表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后；(iv)发现(ii)的所述受试者分布与所述参比分布的偏差或没有偏差；以及(V)根据所述发现，推断是否需要妊娠的高血压疾病的治疗性或预防性治疗。
12.根据权利要求10或11中任一项所述的方法，其中，用于妊娠的高血压疾病的疗法选自抗高血压治疗、流产和分娩。
13.根据权利要求3至12中任一项所述的方法，其中，所述受试者尚未遭受临床上明显的妊娠的高血压疾病，并且由此预测所述受试者将发展临床上明显的妊娠的高血压疾病的可能性、机会或风险。
14.根据权利要求3至13中任一项所述的方法，由此预测发作的孕龄或产后年龄和/或到妊娠的高血压疾病的发作的剩余时间。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的主题，其中，所述妊娠的高血压疾病是先兆子痫(PE)。
16.根据权利要求3至15中任一项所述的方法，其中，所述检查阶段还包括测量可用于妊娠的高血压疾病的诊断、预测和/或预后的一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述其它生物标志物选自由可溶性fms样酪氨酸激酶-1 (sFlt-1，sVEGFR-1)、内皮糖蛋白、胎盘生长因子和血管内皮生长因子(VEGF)组成的组。
18.根据权利要求3至17中任一项所述的方法，还包括在所述受试者中确定HDP的一种或多种危险因子的存在或不存在和/或水平，优选地其中所述危险因子选自未经产、多次妊娠、在妊娠之间延长的时间间隔、在以前的妊娠中HDP或PE的历史或者HDP或PE的家族史、极端的年龄(〈20岁和>40岁)、肥胖、慢性高血压、慢性肾病、偏头痛、头痛、(妊娠)糖尿病、多囊卵巢综合征、自身免疫病如狼疮、类风湿性关节炎、结节病或MS、血管或结缔组织疾病、维生素D缺乏、抗磷脂抗体综合征或遗传性易栓症、以前的伴侣患有HDP或PE的男性伴侣、胎儿水肿和不明原因的胎儿宫内生长受限。
19.根据权利要求3至18中任一项所述的方法，其中，利用能够特异性地结合于各自的生物标志物和/或其片段的结合剂来测量任何一种或多种标记的量和/或所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量，所述一种或多种标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSULCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组。
20.根据权利要求3至19中任一项所述的方法，其中，利用免疫测定技术、或利用质谱分析法、或利用色谱法、或使用所述方法的组合，来测量任何一种或多种标记的量和/或所述一种或多种其它生物标志物的存在或不存在和/或量，所述一种或多种标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组。
21.—种试剂盒，包括(i)用于在来自所述受试者的样品中测量任何一种或多种标记的量的装置，所述标记选自由 ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL,ICAM3、KISS1、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组；以及可选地和优选地(ii )所述一种或多种标记的量的参比值或用于建立所述参比值的装置，其中所述参比值表示妊娠的高血压疾病的已知的诊断、预测和/或预后。
22.—种蛋白、多肽或肽阵列或微阵列，包括(a)选自由ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSU LCAP,LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3 组成的组中的任何一种或多种标记和/或其片段，优选已知量或浓度的所述一种或多种标记和/或其片段；以及(b)可选地和优选地，可用于妊娠的高血压疾病的诊断、预测和/或预后的一种或多种其它生物标志物，优选已知量或浓度的一种或多种其它生物标志物。
23.—种结合剂阵列或微阵列，包括(a)能够特异性地结合于任何一种或多种标记和/或其片段的一种或多种结合剂，优选已知量或浓度的所述结合剂，所述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CANl、CSF1R、CRP、CSH、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL, ICAM3、KISSl、LCAP, LCAT, PGBM、PGRP2、PHLD, PRDXl、PRDX2、PTPRS, R0B04、S10A9、SAA4、TENX, TFF3、VGFR3组成的组；以及(b)可选地和优选地，能够特异性地结合于一种或多种可用于妊娠的高血压疾病的诊断、预测和/或预后的其它生物标志物的一种或多种结合剂，优选已知量或浓度的所述结合剂。
24.一种测试装置，能够在来自受试者的样品中测量选自由ALS、ADA12、ANGI, CANUCSF1R、CRP、CSH、DAGl、DPEP2、DSG2、ECMl、ENPP2、FBLNl、FBN2、GP126、HGFL、ICAM3、KISSl、LCAP、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、SAA4、TENX、TFF3、VGFR3组成的组中的任何一种或多种标记和/或其片段的量，所述测试装置包括(i)用于从所述受试者获得样品的装置，(ii)用于在所述样品中测量所述一种或多种标记和/或片段的量的装置，以及(iii)用于可视化在所述样品中测得的所述一种或多种标记和/或片段的量的装置。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的主题，其中，所述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLN1、FBN2、GP126、ICAM3、KISS1、LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDXl、PTPRS、R0B04、S10A9、TENX、TFF3 组成的组。
26.根据权利要求1至24中任一项所述的主题，其中，所述标记选自由ALS、ADA12、ANG1、CAN1、CSF1R、CRP、DAG1、DPEP2、DSG2、ECM1、ENPP2、FBLN1、FBN2、GP126、ICAM3、KISS1、LCAP, LCAT、PGBM、PGRP2、PHLD、PRDX1、PRDX2、PTPRS、R0B04、S10A9、TENX、TFF3 组成的组。
全文摘要
本申请披露了用于妊娠的高血压疾病、尤其是先兆子痫的新的生物标志物；基于测量所述生物标志物来诊断、预测、预后和/或监测所述疾病的方法；以及用于测量所述生物标志物和/或进行所述方法的试剂盒和装置。
文档编号G01N33/68GK103038645SQ201180019135
公开日2013年4月10日 申请日期2011年4月13日 优先权日2010年4月13日
发明者科恩·卡斯 申请人:普罗诺塔股份有限公司